In this study, we established a pur

In this study, we established a purification scheme to purify recombinant laforin and analyzed laforin to determine whether the monomer or dimer species is more physiologically relevant. Our ultimate goal is to crystallize laforin to determine its three-dimensional structure and use these insights to understand the enzyme. Human laforin is difficult to purify due to its tendency to be sequestered into inclusion bodies when expressed in E. coli. Therefore, we cloned the gene for laforin from the Gallus gallus (red rooster) genome into a bacterial expression vector and purified laforin from E. coli using a two-step purification procedure. We subjected monomeric Gallus gallus laforin to gel electrophoresis, mass spectrometry, dynamic light scattering, phosphatase and starch-binding assays.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ในการศึกษานี้ เราสร้างโครงร่างการทำให้บริสุทธิ์การฟอก recombinant laforin และวิเคราะห์ laforin เพื่อตรวจสอบว่า ชนิดน้ำยาหรือ dimer ขึ้นทางสรีรวิทยาที่เกี่ยวข้อง เป้าหมายหลักของเราคือการ ตกผลึก laforin เพื่อกำหนดโครงสร้างสามมิติ และใช้ข้อมูลเชิงลึกเหล่านี้จะเข้าใจการทำงานของเอนไซม์ Laforin มนุษย์ได้ยากให้บริสุทธิ์เนื่องจากแนวโน้มจะ sequestered เข้าไปในร่างกายรวมเมื่อแสดงออกใน E. coli ดังนั้น เราโคลนยีนสำหรับ laforin จากจีโน (ไก่แดง) กางเกงกางเกงในเวกเตอร์นิพจน์แบคทีเรีย และบริสุทธิ์ laforin จาก E. coli ใช้ฟอกด้วยสองขั้นตอน เราภายใต้ laforin กางเกงกางเกง monomeric การเจลอิ รเมท แสงแบบไดนามิก scattering ฟอสฟา และแป้งผูก assays

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ในการศึกษานี้เราจัดตั้งโครงการบริสุทธิ์ในการชำระล้าง laforin recombinant และวิเคราะห์ laforin เพื่อตรวจสอบว่าโมโนเมอร์หรือ dimer เป็นเผ่าพันธุ์ที่มีความเกี่ยวข้องทางสรีรวิทยา เป้าหมายสูงสุดของเราคือการตกผลึก laforin เพื่อตรวจสอบโครงสร้างสามมิติและใช้ข้อมูลเชิงลึกเหล่านี้จะเข้าใจการทำงานของเอนไซม์ laforin มนุษย์เป็นเรื่องยากที่จะชำระเนื่องจากแนวโน้มที่จะได้รับทรัพย์เข้าสู่ร่างกายเมื่อรวมแสดงใน E. coli ดังนั้นเราจึงโคลนยีนสำหรับ laforin จากกางเกงกางเกง (ไก่สีแดง) จีโนมเป็นเวกเตอร์แสดงออกแบคทีเรียและ laforin บริสุทธิ์จากเชื้อ E. coli ใช้กระบวนการทำให้บริสุทธิ์แบบสองขั้นตอน เราอยู่ภายใต้ monomeric กางเกงกางเกง laforin เพื่อข่าวคราวมวลสารกระเจิงแสงแบบไดนามิก phosphatase และตรวจแป้งที่มีผลผูกพัน

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ในการศึกษานี้จึงได้จัดตั้งโครงการบำบัดน้ำเสียฟอกยีน laforin และวิเคราะห์ laforin เพื่อตรวจสอบว่ามอนอเมอร์ชนิดหรือเป็นเราที่เกี่ยวข้องเพิ่มเติม เป้าหมายสูงสุดของเราคือการตกผลึกของ laforin เพื่อศึกษาโครงสร้างสามมิติและใช้ข้อมูลเชิงลึกนี้เข้าใจเอนไซม์ laforin มนุษย์ยากที่จะชำระเนื่องจากแนวโน้มที่จะถูกแยกเป็น inclusion bodies ที่แสดงออกใน E . coli ดังนั้นเราจึงโคลนยีนสำหรับ laforin จาก gallus gallus ( ไก่แดง ) จีโนมในการแสดงออกของเวกเตอร์แบคทีเรียและทำให้บริสุทธิ์ laforin จาก E . coli โดยใช้กระบวนการบำบัดสองขั้นตอน เราเกิด laforin gallus gallus ภายใต้การเจล , แมส การกระจายแสงแบบไดนามิก , และการเปลี่ยนแปลงแป้ง ) .