The T111H CtrHb spectrum resulting

The T111H CtrHb spectrum resulting from the treatment (Fig. 3d) contains a multitude of hyperfine shifted lines with intensities suggesting a mixture of at least three species. The new predominant set of resonances corresponds to a major product accounting for ~60% of the sample. The inability for DT to reduce cyanomet T111H CtrHb completely under these NMR conditions can be seen from Supporting Information Fig. S15 and explains the second set of peaks, which corresponds to the cyanomet major heme orientational isomer of the starting material (~ 25%). Finally, a third set corresponds to a minor product that may be due to a different modification of the heme or DT-damaged protein. Notably, after treatment, peaks belonging to the minor cyanomet isomer of the T111H starting material have vanished. We therefore hypothesize that the primary product contains a covalent linkage between H111 and the heme 4-substituent in an orientation analogous to the minor isomer starting material. We refer to this product as T111H CtrHb-A4 (Supporting Information Fig. S20A).
Signals corresponding to heme methyl groups of T111H CtrHb-A4 are assigned on the basis of their high intensity and characteristic paramagnetic downfield 1H and upfield 13C shifts. DQF-COSY spectra reveal one vinyl and both propionate spin systems. Intra-heme NOEs between the 1-CH3 and 8-CH3, along with contacts between the heme 1- and 2-substituents indicate that the heme 2-vinyl group has remained intact (Supporting Information Fig. S17). Cyanomet T111H
CtrHb 1H-15N lr-HMQC data collected before and after DT treatment and compared with WT data indicate the presence of a peculiar imidazole system [52] in the T111H CtrHb-A4 product, exhibiting two downfield shifted 15N signals (at 250.6 and 220.7 ppm) J-coupled to a proton at 8.36 ppm, itself J-connected via TOCSY to a proton at 6.48 ppm. These resonances are attributed to H111 (Table 2). Restraints defining the position of the side chain include: H111 Hε1 to heme 3-CH3 and F48 Hζ and Hε,ε', and H111 Hδ2 to the heme 3-CH3 and V115 side chain methyls. Both H111 Hε1 and Hδ2 have shared NOEs (strong and weak, respectively) to a methyl group at 3.39 ppm, which is assigned to the modified heme 4-CβH3 group. Accordingly, a scalar connectivity is observed between the 4-CβH3 and a single proton at 6.15 ppm (Supporting Information Fig. S17) corresponding to the modified heme 4-CαH. This proton, like the 4-CβH3, is in dipolar contact with H111 Hε1. Although JHN-coupling between H111 15Nε2 and the newly produced 4-CβH3 or 4-CαH was not detected in the long-range data, the observed NOEs, heme methyl 1H chemical shift dispersion pattern [53], propionate shifts, and unusual H111 15N shifts are all consistent with modification occurring at H111 and the heme 4-substituent
(Supporting Information Fig. S20A)

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

คลื่น T111H CtrHb ที่เกิดจากการรักษา (Fig. 3d) ประกอบด้วยหลากหลาย hyperfine เปลี่ยนบรรทัด ด้วยการแนะนำการผสมพันธุ์สามน้อยปลดปล่อยก๊าซ ชุดของ resonances กันใหม่สอดคล้องกับบัญชีผลิตภัณฑ์หลัก ~ 60% ของตัวอย่าง ไม่สำหรับ DT ลด cyanomet T111H CtrHb ทั้งหมดภายใต้เงื่อนไขเหล่านี้ NMR สามารถมองเห็นจากฟิกข้อมูลสนับสนุน S15 และอธิบายชุดสองของยอดเขา ที่สอดคล้องกับหลัง orientational ของ heme หลัก cyanomet ของวัสดุเริ่มต้น (~ 25%) สุดท้าย ชุดที่สามตรงกับผลิตภัณฑ์ย่อยที่อาจเกิดจาก modification ต่าง ๆ ของ heme หรือ DT เสียโปรตีน ยวด หลังการรักษา ยอดของหลังรอง cyanomet ของ T111H เริ่มต้นวัสดุมีศาสดา เราจึง hypothesize ที่ผลิตภัณฑ์หลักประกอบด้วยการเชื่อมโยง covalent ระหว่าง H111 และ 4-substituent heme ในความคล้ายคลึงกับไอโซเมอร์รองที่วัสดุเริ่มต้น เราหมายถึงผลิตภัณฑ์นี้เป็น T111H CtrHb-A4 (สนับสนุนฟิกข้อมูล S20A) มีกำหนดสัญญาณที่สอดคล้องกับกลุ่ม methyl heme ของ T111H CtrHb A4 ตามความเข้มข้นสูงและลักษณะ paramagnetic downfield 1 H และกะ upfield 13 C โคซี่ DQF แรมสเป็คตราเปิดเผยไวนิลหนึ่งและทั้งสองระบบหมุน propionate อินทรา heme NOEs 1 CH3 และ 8-CH3 พร้อมกับติดต่อระหว่าง heme 1 - และ 2-substituents บ่งชี้ว่า กลุ่มไวนิล 2 heme มียังคง เหมือนเดิม (สนับสนุนข้อมูลฟิก S17) Cyanomet T111HCtrHb 1H 15N lr HMQC ข้อมูลรวบรวมก่อน และ หลังการรักษา DT และเปรียบเทียบกับข้อมูล WT บ่งชี้สถานะของระบบเฉพาะอิมิดาโซล [52] ในผลิตภัณฑ์ T111H CtrHb A4, exhibiting สัญญาณ 15N downfield เปลี่ยนสอง (ที่ 250.6 และ 220.7 ppm) เจควบคู่กับโปรตอนที่ 8.36 ppm ตัวเจเชื่อมต่อผ่าน TOCSY กับโปรตอนที่ 6.48 ppm Resonances เหล่านี้มาจาก H111 (ตารางที่ 2) Defining restraints รวมตำแหน่งของโซ่ข้าง: Hε1 H111 heme 3-CH3 F48 Hζ และ Hε ε', และ Hδ2 H111 heme 3-CH3 และ V115 ด้านโซ่ methyls H111 Hε1 และ Hδ2 ได้ร่วม NOEs (แข็งแรง และ อ่อนแอ ตามลำดับ) กลุ่ม methyl ที่ 3.39 ppm ซึ่งถูกกำหนดให้กับกลุ่ม 4 CβH3 heme modified ตามลำดับ สังเกตเชื่อมสเกลาโปรตอนเดียวที่ 6.15 ppm (สนับสนุนฟิกข้อมูลระหว่าง 4-CβH3 S17) ที่สอดคล้องกับ modified heme 4-CαH โปรตอนนี้ เช่น 4-CβH3 เป็น dipolar ติดต่อ H111 Hε1 แม้ไม่พบ JHN คลัประหว่าง H111 15Nε2 และผลิตใหม่ 4-CβH3 หรือ 4 CαH ข้อมูลพิสัย NOEs สังเกต heme methyl 1H กะเคมีกระจายตัวรูปแบบ [53], กะ propionate และ H111 ปกติ 15N กะมีทั้งหมดสอดคล้องกับ modification เกิดที่ H111 และ heme 4-substituent(สนับสนุนข้อมูลฟิก S20A)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

T111H CtrHb สเปกตรัมที่เกิดจากการรักษา (รูป. 3d) มีความหลากหลายของสายตะวันออกเฉียงเหนือมากเกินไปเปลี่ยนเส้นที่มีความเข้มบอกส่วนผสมของอย่างน้อยสามสายพันธุ์ ชุดเด่นใหม่ของ resonances สอดคล้องกับบัญชีสินค้าที่สำคัญสำหรับ ~ 60% ของกลุ่มตัวอย่าง ไร้ความสามารถในการที่จะลด DT cyanomet T111H CtrHb สมบูรณ์ภายใต้เงื่อนไข NMR เหล่านี้สามารถเห็นได้จากรูปที่สนับสนุนข้อมูล S15 และอธิบายถึงชุดที่สองของยอดเขาซึ่งสอดคล้องกับ cyanomet สำคัญ heme isomer orientational ของวัสดุเริ่มต้น (~ 25%) ในที่สุดชุดที่สามสอดคล้องกับสินค้าเล็ก ๆ น้อย ๆ ที่อาจจะเกิดจากไอออนบวก Modi ไฟที่แตกต่างกันของโปรตีนฮีมหรือ DT-เสียหาย โดยเฉพาะอย่างยิ่งหลังการรักษายอดเขาที่อยู่ใน isomer cyanomet เล็กน้อยของวัสดุ T111H เริ่มต้นได้หายไป ดังนั้นเราจึงตั้งสมมติฐานว่าผลิตภัณฑ์หลักที่มีการเชื่อมโยงระหว่างโควาเลนต์ H111 และ heme 4 แทนในการวางแนวทางคล้ายคลึงกับวัสดุที่เริ่มต้น isomer เล็กน้อย เราหมายถึงผลิตภัณฑ์นี้เป็น T111H CtrHb-A4 (สนับสนุนข้อมูลรูป. S20A).
สัญญาณที่สอดคล้องกับกลุ่ม heme เมธิลของ T111H CtrHb-A4 ที่ได้รับมอบหมายบนพื้นฐานของความเข้มสูงของพวกเขาและ paramagnetic ลักษณะลง 1H ELD fi และขึ้น ELD สายกะ 13C สเปกตรัม DQF-โคซี่เปิดเผยไวนิลหนึ่งและทั้งสองระบบหมุน propionate noes ภายใน heme ระหว่าง 1 CH3 และ 8-CH3 พร้อมกับรายชื่อผู้ติดต่อระหว่างฮีม 1 และ 2 substituents แสดงให้เห็นว่ากลุ่ม heme 2 ไวนิลยังคงเหมือนเดิม (สนับสนุนข้อมูลรูป. S17) Cyanomet T111H
CtrHb 1H-15N ข้อมูล LR-HMQC เก็บรวบรวมก่อนและหลังการรักษา DT และเปรียบเทียบกับข้อมูล WT บ่งบอกถึงการปรากฏตัวของระบบ imidazole แปลก [52] ใน T111H สินค้า CtrHb-A4 แสดงสองลง ELD ไฟเปลี่ยนสัญญาณ 15N (ที่ 250.6 และ 220.7 ppm) J-คู่กับโปรตอนที่ 8.36 ppm ตัว J-เชื่อมต่อผ่าน TOCSY เพื่อโปรตอนที่ 6.48 ppm resonances เหล่านี้จะมีการบันทึก H111 (ตารางที่ 2) พันธนาการเดอไฟหนิงตำแหน่งของห่วงโซ่ด้านข้างรวมถึง: H111 Hε1เพื่อ heme 3 CH3 และ F48 HζและHε, ε 'และ H111 Hδ2กับ heme 3 CH3 และห่วงโซ่ด้าน V115 methyls ทั้งสอง H111 Hε1และHδ2ได้ร่วมกัน noes (ที่แข็งแกร่งและอ่อนแอตามลำดับ) ในกลุ่มเมธิลที่ 3.39 ppm ซึ่งได้รับมอบหมายให้ Modi สายเอ็ด heme 4 CβH3กลุ่ม ดังนั้นการเชื่อมต่อสเกลาร์เป็นที่สังเกตระหว่าง 4 CβH3และโปรตอนเดียวที่ 6.15 ppm (สนับสนุนข้อมูลรูป. S17) ที่สอดคล้องกับสาย Modi เอ็ด heme 4 CαH โปรตอนนี้เช่น 4 CβH3อยู่ในการติดต่อกับ dipolar H111 Hε1 แม้ว่า JHN-การมีเพศสัมพันธ์ระหว่าง H111 15Nε2และใหม่ที่ผลิต 4 CβH3หรือ 4 CαHไม่พบในข้อมูลระยะยาว noes สังเกต heme เมธิล 1H เคมีรูปแบบการกระจายตัวกะ [53] กะ propionate และ H111 15N ที่ผิดปกติ การเปลี่ยนแปลงทั้งหมดสอดคล้องกับไอออนบวก Modi ไฟที่เกิดขึ้นใน H111 และ heme 4 แทนที่
(สนับสนุนข้อมูลรูป. S20A)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การ t111h ctrhb สเปกตรัมที่เกิดจากการรักษา ( รูปที่ 3 ) ประกอบด้วยความหลากหลายของไฮเปอร์ จึงไม่ขยับเส้นเข้มแนะนำส่วนผสมของอย่างน้อยสามชนิด ชุดเด่นใหม่ของ resonances กับบัญชีผลิตภัณฑ์หลักสำหรับ ~ 60% ของกลุ่มตัวอย่างไม่สามารถเปลี่ยนเพื่อลด cyanomet t111h ctrhb อย่างสมบูรณ์ภายใต้เงื่อนไขเหล่านี้ คุณสามารถเห็นได้จากข้อมูลประกอบรูป S15 และอธิบายชุดสองยอด ซึ่งสอดคล้องกับหลัก cyanomet ฮีม orientational ไอโซเมอร์ของวัสดุเริ่มต้น ( ~ 25 % ) ในที่สุดชุดสามสอดคล้องกับผลิตภัณฑ์เล็กน้อย อาจเป็นเพราะการถ่ายทอดแตกต่างกัน Modi ของ heme หรือ DT ทำลายโปรตีน อย่างไรก็ตาม หลังจากการรักษายอดของผู้เยาว์ cyanomet ไอโซเมอร์ของวัสดุ t111h เริ่มหายไปดังนั้นเราจึงพบว่า ผลิตภัณฑ์หลักมีการเชื่อมโยงระหว่าง h111 โควา และท่าน 4-substituent ในทิศทางคล้ายคลึงกับผู้เยาว์เซ็นเตอร์ตั้งแต่วัสดุ เราเรียกผลิตภัณฑ์นี้เป็น t111h ctrhb-a4 ( สนับสนุนข้อมูลรูป
s20a )สัญญาณที่สอดคล้องกับฮีมเมทิลกลุ่ม t111h ctrhb-a4 จะถูกกำหนดบนพื้นฐานของความเข้มสูงและคุณสมบัติพาราแมกเนติกลงจึงละมั่ง 1H และ 13C จึงละมั่งกะของพวกเขา dqf-cosy Spectra เผยไวนิลและ propionate หมุนทั้งระบบ ไม่ท่านภายในระหว่าง 1-ch3 8-ch3 และ ,พร้อมกับการติดต่อระหว่างท่าน 1 - 2-substituents บ่งชี้ว่าท่าน 2-vinyl กลุ่มยังคงเหมือนเดิม ( สนับสนุนข้อมูลรูป s17 ) cyanomet t111h
ctrhb 1h-15n LR ได้เก็บรวบรวมข้อมูล ก่อนและหลังการรักษา และเปลี่ยนเมื่อเทียบกับข้อมูลโดยระบุสถานะของระบบ [ 52 ] อิมิดาโซลแปลกใน t111h ctrhb-a4 ผลิตภัณฑ์จัดแสดงสองลงจึงละมั่ง เปลี่ยนสัญญาณ ( ที่ 15 และ 250.6 220.7 ppm ) j-coupled กับโปรตอนที่ 8.36 ppm , ตัวเอง j-connected ผ่าน tocsy กับโปรตอนที่ 6.48 ppm เฮิรตซ์เหล่านี้เกิดจาก h111 ( ตารางที่ 2 ) เสพ de จึงหนิงตำแหน่งด้านโซ่ ได้แก่ h111 H ε 1 ฮีมและζ 3-ch3 f48 H และ H εε ' , และ h111 H δ 2 กับฮีมและ 3-ch3 v115 โซ่ข้าง methyls .ทั้ง h111 H ε 1 และ h δ 2 แบ่งเวร ( แข็งแรงและอ่อนแอ , ตามลำดับ ) ในกลุ่มเมทิลที่ 3.39 ppm ซึ่งถูกมอบหมายให้โมดิจึงเอ็ดฮีม 4-C บีตา H3 กลุ่ม ตาม , สเกลาร์การเชื่อมต่อสังเกตระหว่าง 4-C บีตา H3 และโปรตอนเดียวที่ 6.15 ส่วนในล้านส่วน ( ข้อมูลประกอบรูปที่ s17 ) สอดคล้องกับโมไดจึงเอ็ดฮีม 4-C αเอช โปรตอนนี้ เหมือน 4-C บีตา H3 ,อยู่ใน dipolar ติดต่อกับ h111 H ε 1 แม้ว่า jhn coupling ระหว่าง h111 15N ε 2 และผลิตใหม่ 4-C บีตา H3 หรือ 4-C α H ไม่พบในข้อมูลระยะไกล , การตรวจสอบไม่ฮีมเมทิล 1 , เคมีกะกระจายรูปแบบ [ 53 ] , propionate กะ และผิดปกติ h111 15 กะจะสอดคล้องกับการโมดิจึงเกิดขึ้นที่ h111 และท่าน 4-substituent
( ข้อมูลประกอบฟิคs20a )