In order to determine the optimal t

In order to determine the optimal time for the measurement of copGFP signal, cell
fusions were monitored at day 1, 2, 3, 4, and 5 after co-cultivation. By using the inverted
fluorescent microscope, syncytial formation could be observed at 24 hours after coincubation
(Figure 2a); however, the copGFP signal measured by the fluorescent microplate
reader was not significantly different from that generated in the negative control. It is
possible that the copy number of pTruLTRGFP replicated in HEK293T cells was not
sufficient. Further experiment to obtain higher copy number of the plasmid replicated is
underway. Figure 2b (lower panel) shows that the copGFP signal steadily increased on day 2
through day 4 and was highest at day 4. This finding was consistent with previous study that
showed the GFP-producing cells were measured at day 4 after challenged with virus.7 This
could be due to the duration of Tat expression and its transactivation on the LTR promoter.
On day 5, reduction of cell viability was seen (data not shown), indicating that long-term cocultivation
had an adverse effect on cell viability. This observation could be due to toxicity
effect of Env on the cells that expresses Env on their surface for over a period of time.13 In
order to confirm that Env was required for cell-cell fusion, cells that were not transfected
with HIV-1 Env (mock) were tested. The co-cultivation of mock with the target cells showed
low fluorescent intensity (Figure 2b, upper panel), which was expected because truncated
LTR-driven copGFP could still be expressed in a low level in the absence of Tat.7,8 Together,
the result suggested that the optimal time to measure copGFP signal as a readout for cell-cell
fusion activity was at day 4 after co-cultivation.

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

เพื่อตรวจสอบเวลาที่เหมาะสมสำหรับการวัดสัญญาณ copGFP เซลล์
Fusions ถูกตรวจสอบในวันที่ 1, 2, 3, 4, 5 และหลังจากร่วมการเพาะปลูก โดยใช้คว่ำกล้องจุลทรรศน์เรืองแสงก่อ syncytial อาจจะมีการตั้งข้อสังเกตใน 24 ชั่วโมงหลังจาก coincubation (รูปที่ 2a); แต่สัญญาณ copGFP วัดจากไมโครเรืองแสงอ่านไม่แตกต่างจากที่เกิดขึ้นในการควบคุมเชิงลบ มันเป็นไปได้ว่าจำนวนสำเนา pTruLTRGFP จำลองแบบในเซลล์ HEK293T ก็ไม่เพียงพอ การทดลองต่อไปที่จะได้รับสำเนาจำนวนที่สูงขึ้นของพลาสมิดจำลองเป็นชิ้น รูปที่ 2b (แผงล่าง) แสดงให้เห็นว่าสัญญาณที่เพิ่มขึ้นอย่างต่อเนื่อง copGFP ในวันที่ 2 ผ่านวันที่ 4 และสูงสุดในวันที่ 4 การค้นพบนี้สอดคล้องกับการศึกษาก่อนหน้านี้ที่แสดงให้เห็นว่าเซลล์GFP ผลิตถูกวัดในวันที่ 4 หลังจากที่ท้าทายกับไวรัส 7 นี้อาจเป็นเพราะระยะเวลาในการแสดงออกตาดและ transactivation บนก่อการ LTR ได้. ในวันที่ 5, การลดลงของความมีชีวิตเซลล์ที่เห็น (ไม่ได้แสดงข้อมูล) แสดงให้เห็นว่า cocultivation ระยะยาวมีผลกระทบต่อชีวิตของเซลล์ ข้อสังเกตนี้อาจเป็นเพราะพิษผลของ Env ในเซลล์ที่แสดงออก Env บนพื้นผิวของพวกเขาในช่วง time.13 ในการสั่งซื้อเพื่อยืนยันว่าEnv จำเป็นสำหรับฟิวชั่นโทรศัพท์มือถือ, เซลล์ที่ไม่ได้ถูก transfected กับ HIV-1 Env (จำลอง) ได้มีการทดสอบ ร่วมปลูกจำลองกับเซลล์เป้าหมายแสดงให้เห็นความรุนแรงเรืองแสงต่ำ (รูปที่ 2b แผงบน) ซึ่งได้รับการคาดว่าเพราะถูกตัดทอน LTR ขับเคลื่อน copGFP ยังคงอาจจะแสดงออกในระดับต่ำในกรณีที่ไม่มี Tat.7,8 ร่วมกัน, ผลการชี้ให้เห็นว่าเวลาที่เหมาะสมในการวัดสัญญาณ copGFP เป็นการอ่านสำหรับเซลล์เซลล์กิจกรรมฟิวชั่นที่4 วันหลังจากที่ร่วมการเพาะปลูก

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

เพื่อหาเวลาที่เหมาะสมสำหรับการวัด copgfp สัญญาณ cell fusions
ถูก วันที่ 1 , 2 , 3 , 4 , และ 5 หลังจากการเพาะปลูกจำกัด โดยการใช้กล้องจุลทรรศน์เรืองแสงคว่ำ
ความหมาย : การพัฒนาสามารถสังเกตได้ใน 24 ชั่วโมง หลังจาก coincubation
( รูปที่ 2A ) อย่างไรก็ตาม copgfp สัญญาณที่วัดได้จากพื้นที่ภาคเหนือของประเทศไทย
เรืองแสงอ่านไม่แตกต่างจากที่สร้างขึ้นในการควบคุมค่า มันคือ
เป็นไปได้ที่จำนวนชุดของ ptrultrgfp ซ้ำใน hek293t เซลล์ไม่ได้
เพียงพอ การทดลองเพิ่มเติมเพื่อขอรับหมายเลขคัดลอกที่สูงขึ้นของพลาสมิดจำนวนคือ
กําลัง รูปที่ 2B ( แผงล่าง ) แสดงให้เห็นว่าสัญญาณ copgfp เพิ่มขึ้นอย่างต่อเนื่องในวันที่ 2
ผ่านวัน 4 และสูงสุดในวันที่ 4การค้นพบนี้สอดคล้องกับการศึกษาก่อนหน้าที่
แสดง GFP ผลิตเซลล์ถูกวัดในวันที่ 4 หลังจากการท้าทายกับไวรัส นี่
อาจเนื่องจากระยะเวลาในการแสดงออกของ ททท. และ transactivation ของ LTR โปรโมเตอร์
วันที่ 5 การลดปริมาณเซลล์ที่เห็น ( ข้อมูลไม่แสดง ) แสดงว่า
ยมกระยะยาวที่มีผลกระทบต่อเซลล์ .การสังเกตนี้อาจเป็นเพราะผลของความเป็นพิษต่อเซลล์
Env Env ที่แสดงบนพื้นผิวของพวกเขาสำหรับระยะเวลาในการสั่งซื้อเพื่อยืนยันว่า time.13
Env ก็ใช้ astrocytoma ฟิวชั่น เซลล์ที่ไม่ได้ถูก transfected
กับโปรตีน Env ( เยาะเย้ย ) ทดสอบ ร่วมการเยาะเย้ยกับเซลล์เป้าหมายมีความเข้มต่ำ ( รูปที่ 2B
เรืองแสง แผงด้านบน )ซึ่งคาดว่าเพราะตัดทอน
LTR ขับเคลื่อน copgfp ยังแสดงออกในระดับต่ำในการขาดของ ททท. 7 , 8 ด้วยกัน
ผลแนะนำว่า เวลาที่เหมาะสมที่สุดที่จะวัด copgfp สัญญาณเช่นการอ่านข้อมูลสำหรับกิจกรรมฟิวชั่น astrocytoma
อยู่ 4 วัน หลังปลูก จำกัด