The cells after the pulse were coll

The cells after the pulse were collected, and an LB
liquid medium was added to the cells, followed by culture with
shaking at 28°C for 2 to 4 h. The cultured cells were then spread
in an LB selective plate medium (100 lug/ml kanamycin, 50 4g/ml
rifampicin) and subjected to static culture at 28°C. A single
โคโลนี that appeared after three to five days was used as an
อะโกรแบคทีเรียม ทรานสฟอร์แมนต์.
[0059]
5. 3 Euglena การทรานสฟอร์ม (Co-culture)
Euglena was cultured in a KH medium (pH of 6.8) for 4
to 5 days and, after cell counting, suspended in an IM liquid
medium to 5.0x106 cells/ml.
[0060]

The อะโกรแบคทีเรียม ทรานสฟอร์แมนต์ was subjected to
preculture in an อาหาร LB. The resulting ทรานสฟอร์แมนต์ was
inoculated in an IM medium (pH of 5.3) (Tables 2 to 4) and
cultured for about 10 to 15 hours. The cultured bacteria cells

were collected by centrifugation (7,700xg, 20°C, 1 min) and
suspended in the IM liquid medium so that 0D660 was 0.6.

1 ml of the Euglena suspended in the liquid medium and
1 ml of the อะโกรแบคทีเรียม ทรานสฟอร์แมนต์ suspended in the liquid
medium were mixed (a total of 2 ml of culture solution), and

acetosyringone was added at a final concentration of 100 ILE,
followed by co-culturing for 48 hours while gently stirring with
a rotator (2.5x106 cells/ml, OD660 = 0.3) . After the completion of

the culture, 200 111 of the culture solution (0.5x106 cells) or 200
[11 of a 10-fold dilution of the culture solution (0.50x106 cells)
was cultured in a KH selective plate medium (ซีโอซิน 25 lg/ml,
ซีโฟแทกซีม 100 [1g/ml)

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

เซลล์หลังจากพัลส์ได้รวบ รวม และ อันปอนด์ขนาดกลางของเหลวเพิ่มเซลล์ ตามทันสั่นที่ 28° C สำหรับ h 2 4 จากนั้นได้แพร่กระจายเซลล์อ่างในสื่อใช้แผ่นปอนด์ (100 มล/lug กานามัยซิน 4g 50 ml rifampicin) และอยู่ภายใต้วัฒนธรรมแบบคงที่ 28 องศาเซลเซียส เดียวโคโลนีที่ปรากฏหลังสามถึงห้าวันถูกใช้เป็นการอะโกรแบคทีเรียมทรานสฟอร์แมนต์[0059]5. ยูกลีนา 3 การทรานสฟอร์ม (ร่วมวัฒนธรรม) ยูกลีนาเป็นอ่างในสื่อ KH (pH 6.8) 4วันที่ 5 และ หลัง จากการตรวจนับเซลล์ หยุดชั่วคราวในของเหลวอิ่มตัวปานกลางถึง 5.0x106 เซลล์/มล.[0060]อะโกรแบคทีเรียมทรานสฟอร์แมนต์ถูกต้อง preculture ในการอาหารปอนด์ ทรานสฟอร์แมนต์ได้ถูกinoculated ในการ IM (pH 5.3) (ตารางที่ 2 ถึง 4) และอ่างประมาณ 10-15 ชั่วโมง เซลล์แบคทีเรียอ่างถูกรวบรวม โดย centrifugation (7, 700xg, 20° C, 1 นาที) และหยุดชั่วคราวในการ IM ของเหลวที่ 0D 660 ได้ 0.61 ml ของยูกลีนาที่ถูกระงับในกลางของเหลว และ1 ml ของทรานสฟอร์แมนต์อะโกรแบคทีเรียมที่ถูกระงับในของเหลวกลางรวม (จำนวน 2 ml ของวัฒนธรรม), และเพิ่ม acetosyringone ที่ความเข้มข้นสุดท้ายของเมา 100 ตาม culturing ร่วมภายใน 48 ชั่วโมงขณะกวนเบา ๆ ด้วยมีตัวหมุน (2.5x106 เซลล์/ml, OD660 = 0.3) หลังเสร็จสิ้นวัฒนธรรม 200 111 ของการแก้ปัญหาวัฒนธรรม (0.5x106 เซลล์) หรือ 200[11 ของเจือจาง 10-fold โซลูชันวัฒนธรรม (0.50x106 เซลล์)มีอ่างใน KH จานเลือกสื่อ (ซีโอซิน 25 lg/ml ซีโฟแทกซีม 100 [1 g/ml)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

เซลล์หลังจากชีพจรที่ถูกเก็บรวบรวมและ LB
อาหารเหลวถูกบันทึกอยู่ในเซลล์ตามด้วยวัฒนธรรมที่มี
การสั่นสะเทือนที่ 28 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 2-4 ชั่วโมง เซลล์เพาะเลี้ยงกระจายอยู่แล้ว
ในกลางแผ่นเลือก LB (100 ดึง / ml kanamycin 50 4g / ml
rifampicin) และภายใต้วัฒนธรรมแบบคงที่ที่ 28 องศาเซลเซียส เดียว
โคโลนีที่ปรากฏหลังจาก 3-5 วันที่ใช้เป็น
อะโกรแบคทีเรียมทรานสฟอร์แมนต์.
[0059]
5 3 ยูกลีนาการทรานสฟอร์ม (ร่วมวัฒนธรรม)
ยูกลีนาได้รับการเพาะเลี้ยงในกลาง KH (pH 6.8) 4
ถึง 5 วันและหลังจากการนับเซลล์ที่ลอยอยู่ในของเหลว IM
ปานกลางถึง 5.0x106 เซลล์ / มล.
[0060 ] อะโกรแบคทีเรียมทรานสฟอร์แมนต์ได้ภายใต้การpreculture ในอาหารปอน ส่งผลให้ทรานสฟอร์แมนต์ได้รับเชื้อในกลาง IM (pH 5.3) (ตารางที่ 2-4) และเพาะเลี้ยงประมาณ 10 ถึง 15 ชั่วโมง เซลล์เพาะเลี้ยงแบคทีเรียที่ถูกเก็บรวบรวมโดยการหมุนเหวี่ยง (7,700xg 20 องศาเซลเซียส 1 นาที) และแขวนลอยในอาหารเหลว IM เพื่อให้ 0D660 เป็น 0.6. 1 มิลลิลิตรของยูกลีนาที่ลอยอยู่ในอาหารเหลวและ1 มิลลิลิตรของอะโกร แบคทีเรียมทรานสฟอร์แมนต์ที่ลอยอยู่ในของเหลวสื่อผสม (รวม 2 มล. ของการแก้ปัญหาวัฒนธรรม) และacetosyringone ถูกเพิ่มเข้ามาในความเข้มข้นสุดท้ายของ 100 ILE, ตามด้วยการร่วมการเพาะเลี้ยงเป็นเวลา 48 ชั่วโมงในขณะที่เบา ๆ ตื่นเต้นกับโรซาลี (2.5x106 เซลล์ / ml OD660 = 0.3) หลังจากเสร็จสิ้นการวัฒนธรรม, 200 111 ของการแก้ปัญหาวัฒนธรรม (0.5x106 เซลล์) หรือ 200 [11 ของการเจือจาง 10 เท่าของการแก้ปัญหาวัฒนธรรม (0.50x106 เซลล์) เป็นที่เพาะเลี้ยงในกลางแผ่นเลือก KH (ซีโอซิน 25 LG / ml ซีโฟแทกซีม 100 [1 กรัม / มล.)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

เซลล์หลังจากชีพจรรวบรวมและ LB
อาหารเหลวที่ถูกเพิ่มเข้าไปในเซลล์ตามวัฒนธรรมกับสั่นที่ 28 ° C
2 H . เซลล์เพาะเลี้ยงแล้วกระจาย
ในปอนด์เลือกแผ่น ( 100 มิลลิลิตร ) ดึง kanamycin 50 4G / ml
rifampicin ) และภายใต้วัฒนธรรมแบบคงที่ที่ 28 องศา เดียว
โคโลนีที่ปรากฏหลังจากที่สามถึงห้าวัน ถูกใช้เป็น
อะโกรแบคทีเรียมทรานสฟอร์แมนต์ 0059 .
[ ]
5 3 การทรานสฟอร์มยูกลีนา ( วัฒนธรรม Co )
ยูกลีนาเลี้ยงใน KH ปานกลาง ( pH 6.8 ) 4
5 วัน หลังจากนับเซลล์แขวนลอยในตัวกลางของเหลว
ม 5.0x106 เซลล์ / มิลลิลิตร 0060
[ ]

อะโกรแบคทีเรียมทรานสฟอร์แมนต์ภายใต้
พันธุ์ในอาหาร lb .ผลทรานสฟอร์แมนต์คือ
หัวเชื้อในตัวกลาง IM ( พีเอช 5.3 ) ( ตารางที่ 2 ) และ
เลี้ยงประมาณ 10 ถึง 15 ชั่วโมง การเพาะเลี้ยงแบคทีเรีย

ครั้งนี้ ดังนี้ ( 7700xg 20 ° C , 1 นาที ) และ
ชั่วคราวในเหลว ผมที่ 0d660 คือ 0.6

1 มิลลิลิตรของยูกลีนาชั่วคราวในอาหารเหลวและ
1 มิลลิลิตรของอะโกรแบคทีเรียมทรานสฟอร์แมนต์แขวนลอยในของเหลว
สื่อผสม ( รวม 2 มิลลิลิตรของสารละลายวัฒนธรรม ) และ

acetosyringone ถูกเพิ่มในขั้นสุดท้ายความเข้มข้น 100 ด้วย ,
ตามด้วย Co เพาะเลี้ยงเป็นเวลา 48 ชั่วโมง ในขณะที่ค่อยๆกวนด้วย
เป็น rotator ( 2.5x106 เซลล์ / มิลลิลิตร od660 = 0.3 ) . หลังจากจบ

วัฒนธรรม200 111 ของวัฒนธรรมแก้ปัญหา ( 0.5x106 เซลล์ ) หรือ 200
[ 11 เป็น 10 เท่า ( ของวัฒนธรรมแก้ปัญหา ( 0.50x106 เซลล์ )
เลี้ยงใน KH ใช้จานกลาง ( ซีโอซิน 25 LG / ml
ซีโฟแทกซีม 100 [ 1
/ ml )