2.9. Cell line and culture conditio

2.9. Cell line and culture conditions
The murine macrophage cell line, Raw 264.7 (obtained from the
Cell Culture Unit of the University of Granada, Granada, Spain),were cultured in Dulbecco’s modified Eagle’s medium (DMEM) supplemented with 10%
heatinactivated FBS, high glucose (4.5 g L−1) plus 1% of streptomycinpenicillin, 1% amphotericin, 1% glutamine at 37 ◦C under 5% CO2. Cells were seeded onto 24-well culture plates at a density of 5 × 105 cells/well and grown until confluence, and were incubated in media containing -glucan (0.1–300 g mL−1), for 1 h. Cells were then incubated with or with-out LPS (0.1 g mL−1; Lipopolysaccharides from Escherichia coli serotype 0111:B4 Sigma–Aldrich) for 24 h (37 ◦C under 5% CO2).Their viability was then determined by the Crystal Violet assay(Gilles, Didier, & Denton, 1986). Levels of nitric
oxide (NO) were measured using the Griess reagent (Park, Quinn, Wright, & Schuller-Levis, 1993), and the concentration of pro-inflammatory cytokines
(TNF-, IL-1) was finally investigated using ELISA kits following the manufacturer’s protocol.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.9 การเซลล์เงื่อนไขบรรทัดและวัฒนธรรมบรรทัดเซลล์ murine macrophage, Raw 264.7 (ได้รับจากการเซลล์หน่วยวัฒนธรรมมหาวิทยาลัยกรา กรานาดา สเปน), มีอ่างใน Eagle ของดุลเบกโก modified (DMEM) เสริม ด้วย 10% heatinactivated FBS กลูโคสสูง (4.5 g L−1) บวก 1% streptomycinpenicillin, amphotericin 1%, 1% glutamine ที่ 37 ◦C ภายใต้ 5% CO2 เซลล์ seeded บนวัฒนธรรมดี 24 แผ่นที่ความหนาแน่น 5 × 105 เซลล์/ดี และเติบโตจนถึง confluence และ incubated ได้ในสื่อที่ประกอบด้วย - glucan (0.1 – 300 g mL−1), สำหรับ 1 h. เซลล์ได้แล้ว incubated ด้วย หรือมีออก LPS (0.1 g mL−1 Lipopolysaccharides จาก Escherichia coli serotype 0111:B4 ซิก-Aldrich) ใน 24 ชม (37 ◦C ภายใต้ 5% CO2)ชีวิตของพวกเขาแล้วที่ถูกกำหนด โดยการวิเคราะห์ผลึกม่วง (Gilles, Didier, & Denton, 1986) ระดับของ nitric ออกไซด์ (NO) ถูกวัดโดยใช้รีเอเจนต์ Griess (ปาร์ค ควินน์ ไรท์ และ Schuller-Levis, 1993), และความเข้มข้นของ cytokines โป inflammatory(TNF- IL-1) ถูกสอบสวนใช้ ELISA ชุดต่อของโพรโทคอล finally

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.9 สายพันธุ์ของเซลล์และเงื่อนไขในการเพาะเลี้ยง
เซลล์ macrophage หมาดิบ 264.7 (ที่ได้รับจาก
การเพาะเลี้ยงเซลล์หน่วยจากมหาวิทยาลัยกรานาดา, กรานาดา, สเปน), มาเพาะเลี้ยงในสาย Modi Dulbecco ของเอ็ดกลางของนกอินทรี (DMEM) เสริมด้วย 10%
heatinactivated FBS, น้ำตาลสูง (4.5 กรัม L-1) บวก 1% ของ streptomycinpenicillin, amphotericin 1% glutamine 1% ที่อุณหภูมิ 37 ◦C CO2 ต่ำกว่า 5% เซลล์ที่ถูกเมล็ดใส่ลงในจานเพาะเลี้ยง 24 หลุมที่มีความหนาแน่นของ 5 × 105 เซลล์ / ดีและเติบโตขึ้นจนต่อต้านอิทธิพลและถูกบ่มในสื่อที่มี -glucan (0.1-300? กรัม mL-1) เป็นเวลา 1 ชั่วโมง เซลล์ที่ถูกบ่มแล้วด้วยหรือออก LPS (0.1 กรัม mL-1; lipopolysaccharides จาก Escherichia coli serotype 0111: B4 Sigma-Aldrich) เป็นเวลา 24 ชั่วโมง (37 ◦C CO2 ต่ำกว่า 5%) การมีชีวิต .Their ถูกกำหนดแล้วโดย คริสตัลทดสอบไวโอเล็ต (กิลส์, ดิดิเยร์และ Denton, 1986) ระดับของไนตริก
ออกไซด์ (NO) ถูกวัดโดยใช้น้ำยา Griess (พาร์ควินน์, ไรท์ & Schuller-Levis, 1993), และความเข้มข้นของโปรในชั้น cytokines ammatory
(TNF- ?, IL-1?) เป็นไฟโดยใช้ Nally ชุด ELISA ต่อไปนี้โปรโตคอลของผู้ผลิต

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.9 . เซลล์และสภาพวัฒนธรรม
~ เซลล์แมคโครฟาจสาย 264.7 ดิบ ( ที่ได้จากการเพาะเลี้ยงเซลล์
หน่วยของมหาวิทยาลัยกรานาดา , Granada , สเปน ) , เพาะเลี้ยงในดัลเบโค่ของโมไดจึงเอ็ดนกอินทรีขนาดกลาง ( dmem ) เสริมด้วย 10 %
heatinactivated FBS น้ำตาลสูง ( 4.5 g L − 1 ) บวก 1% ของ streptomycinpenicillin 1% ระหว่าง 1% และที่อุณหภูมิ 37 ◦ C ภายใต้ 5% CO2เซลล์ถูก seeded ลง 24 แผ่นดีวัฒนธรรมในอัตราความหนาแน่น 5 × 105 เซลล์ได้ดี และเติบโตจนคอนfl uence และถูกบ่มในสื่อที่มี - กลูแคน ( 0.1 – 300 กรัมต่อมิลลิลิตร  − 1 ) เป็นเวลา 1 ชั่วโมงแล้วแยกเซลล์หรือออกหล่อลื่น ( 0.1 มิลลิลิตร  G − 1 ; lipopolysaccharides จาก Escherichia coli หรือ 0111 : B4 ซิกม่า Aldrich ) – 24 H ( 37 ◦ C ภายใต้ 5% CO2 )ชีวิตของพวกเขาถูกกำหนดโดยคริสตัลสีม่วง assay ( จิล ดิดิเยร์ & , Denton , 1986 ) ระดับของไนตริก ออกไซด์ ( NO )
ถูกวัดโดยใช้ griess Reagent ( ปาร์ค ควินน์ ไรท์ &ชูลเลอร์ Levis , 1993 ) และความเข้มข้นของโปรในfl
( ammatory cytokines TNF -  1 ,  ) จึงใช้วิธีดังต่อไปนี้โปรโตคอลแนลลี่สอบสวนชุดของผู้ผลิต .