All liquid detection reagents used

All liquid detection reagents used for the line blot assay were from Amplicor strip detection reagent kits (Dynal, Oslo, Norway). PCR products were denatured with 0.13 N NaOH (1:2 dilution of 0.4 N NaOH in PCR product). HPV genotyping strips were placed into individual wells of the typing trays (Perkin-Elmer) and covered with 3 ml of hybridization buffer (4× SSPE [1× SSPE is 0.18 M NaCl, 10 mM NaH2PO4, and 1 mM EDTA, pH 7.7], 0.1% sodium dodecyl sulfate) prewarmed to 53°C. Seventy microliters of denatured, biotinylated product was added to each well and incubated in a shallow, shaking (60 rpm) water bath at 53°C for 30 min. Following hybridization, trays were removed from the water bath, and hybridization solution was removed with a vacuum aspirator. Strips were briefly rinsed in the trays with ambient wash buffer (1× SSPE, 0.1% sodium dodecyl sulfate). After removal of the rinse by aspiration, 3 ml of prewarmed (53°C) wash buffer was added to each well and the trays were incubated in a shaking water bath at 53°C for 15 min. After the stringent wash, buffer was removed, 3 ml of streptavidin-horseradish peroxidase conjugate was added to each well, and the tray was placed on a rotating platform at room temperature for 30 min, with shaking at 70 rpm. Unbound conjugate was removed by a quick rinse with ambient wash buffer followed by two 10-min washes in ambient wash buffer. After the final wash, buffer was removed by vacuum aspiration, and strips were rinsed in 0.1 M sodium citrate. Color development was activated by incubation in a 4:1 mixture of substrates A (hydrogen peroxide in sodium citrate buffer) and B (3,3′,5,5′-tetramethylbenzidine in dimethylformamide) for 5 min on a rotating platform (70 rpm). Strips were rinsed in deionized water and stored in citrate buffer until interpretation. Developed strips were interpreted or photographed within 2 h of color development for accurate analysis of the results. Strips can be stored in citrate buffer in a sealed plastic bag in the dark. Any prolonged exposure to light results in fading of the signal and darkening of the membrane. Alternatively, the strips can be dried immediately following the final citrate buffer wash and taped directly into a research notebook. Strip interpretation was performed with a labeled acetate overlay, with lines indicating the position of each probe relative to the reference mark.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

Reagents ตรวจจับของเหลวทั้งหมดที่ใช้สำหรับการทดสอบน้าบรรทัดถูกจาก Amplicor แถบตรวจหาสารชุด (Dynal ออสโล นอร์เวย์) ผลิตภัณฑ์ PCR ได้เอทิลแอลกอฮอล์กับ 0.13 N NaOH (เจือจาง 1:2 ของ 0.4 N NaOH ในผลิตภัณฑ์ PCR) HPV genotyping แถบวางในแต่ละหลุมในถาดพิมพ์ (เพอร์เอลเมอ) และปกคลุม ด้วย 3 ml ของบัฟเฟอร์ hybridization (4 × SSPE [1 × SSPE เป็น 0.18 M NaCl, 10 มม. NaH2PO4 และ 1 mM EDTA, pH 7.7], 0.1% โซเดียมซัลเฟต dodecyl) prewarmed ถึง 53 องศาเซลเซียส เจ็ดสิบ microliters ลแปลง biotinylated ผลิตภัณฑ์ของถูกแต่ดี และได้รับการกกในตื้น สั่นอาบน้ำ (60 rpm) 53° c 30 นาที ต่อ hybridization ถาดถูกเอาออกจากอ่างน้ำ ไวรัส และโซลูชัน hybridization กับเข้าเครื่องสูญญากาศ แถบมีสั้น ๆ ล้างในถาดกับรอบข้างล้างบัฟเฟอร์ (1 × SSPE, dodecyl 0.1% โซเดียมซัลเฟต) หลังจากถอดล้างโดยความทะเยอทะยาน 3 ml prewarmed (53° C) ล้างบัฟเฟอร์ถูกเพิ่มในถาดและอีกทั้งยังได้รับการกกในอ่างน้ำสั่น 53° c 15 นาที หลังจากการล้างอย่างเข้มงวด บัฟเฟอร์ถูกลบ 3 ml ของ streptavidin ดิชฮอส conjugate เพิ่มดียัง และถาดถูกวางลงบนจานหมุนที่อุณหภูมิห้อง 30 นาที มีการสั่นที่ 70 รอบต่อนาที Conjugate ผูกถูกเอาออก โดยการล้างอย่างรวดเร็ว ด้วยบัฟเฟอร์ล้างโดยรอบตาม ด้วยล้าง 10 นาทีสองในรอบล้างบัฟเฟอร์ หลังจากการล้างขั้นสุดท้าย บัฟเฟอร์ถูกเอาออก โดยขูด และแถบถูกล้างใน 0.1 M โซเดียมซิเตรต พัฒนาสีถูกเปิดใช้งาน โดยใน 4:1 ส่วนผสมของพื้นผิว A (ไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์ในโซเดียมซิเตรตบัฟเฟอร์) และ B (3, 3′, 5, 5 ′-tetramethylbenzidine ใน dimethylformamide) 5 นาทีบนจานหมุน (รอบต่อนาที 70) แถบถูกล้างในจุ และเก็บไว้ในบัฟเฟอร์ซิเตรตจนตีความ พัฒนาแผ่นถูกตีความ หรือถ่ายภาพภายใน 2 ชม.ของการพัฒนาสีสำหรับการวิเคราะห์ที่ถูกต้องของผลการ สามารถเก็บแผ่นในซิเตรตบัฟเฟอร์ในถุงพลาสติกปิดสนิทในมืด แสงเป็นเวลานานมีผลในการซีดจางของสัญญาณ และมืดของเมมเบรน อีกวิธีหนึ่งคือ แถบสามารถแห้งทันทีต่อซิเตรทสุดท้ายล้างบัฟเฟอร์ และบันทึกเทปลงในสมุดบันทึกการวิจัยโดยตรง ตีแถบทำ ด้วยการซ้อนทับป้ายอะซิเตท เส้นแสดงตำแหน่งของแต่ละวัดสัมพันธ์กับเครื่องหมายอ้างอิง

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ทั้งหมดน้ำยาตรวจจับของเหลวที่ใช้สำหรับการทดสอบเส้นเปื้อนมาจากการตรวจสอบ Amplicor แถบน้ำยาชุด (Dynal, ออสโล, นอร์เวย์) ผลิตภัณฑ์พีซีอาร์มีเอทิลแอลกอฮอล์กับ 0.13 N NaOH (1: 2 ลดสัดส่วนของ 0.4 N NaOH ในผลิตภัณฑ์ PCR) แถบ HPV genotyping ถูกวางลงในหลุมแต่ละถาดพิมพ์ดีด (เพอร์กินเอลเมอ) และปกคลุมด้วย 3 มลของบัฟเฟอร์ hybridization (4 × SSPE [1 × SSPE 0.18 M NaCl 10 มิลลิ NaH2PO4 และ 1 mM EDTA, ค่า pH 7.7] 0.1% โซเดียมโดเดซิลซัลเฟต) prewarmed ถึง 53 ° C เจ็ดสิบไมโครลิตรของเอทิลแอลกอฮอล์ผลิตภัณฑ์ไบโอตินถูกเพิ่มเข้าไปในแต่ละดีและบ่มในตื้นสั่น (60 รอบต่อนาที) อ่างน้ำที่ 53 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 30 นาที ต่อไปนี้การผสมพันธุ์ถาดออกจากอ่างน้ำและวิธีการแก้ปัญหาการผสมพันธุ์จะถูกลบออกด้วยการดูดสูญญากาศ แถบถูกล้างสั้น ๆ ในถาดที่มีบัฟเฟอร์ซักรอบ (1 × SSPE, 0.1% โซเดียมโดเดซิลซัลเฟต) หลังจากลบล้างโดยทะเยอทะยาน 3 มิลลิลิตร prewarmed (53 ° C) บัฟเฟอร์ล้างถูกเพิ่มเข้าไปในแต่ละดีและถาดถูกบ่มในอ่างน้ำเขย่าที่ 53 องศาเซลเซียสนาน 15 นาที หลังจากที่ซักเข้มงวดบัฟเฟอร์ถูกลบออก 3 มล. ของสเต-มะรุม peroxidase ผันถูกเพิ่มเข้าไปในแต่ละดีและถาดวางอยู่บนแพลตฟอร์มหมุนที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 30 นาทีด้วยการเขย่าที่ 70 รอบต่อนาที ผันหลุดถูกลบออกโดยล้างอย่างรวดเร็วด้วยบัฟเฟอร์ล้างโดยรอบตามมาด้วยสองล้าง 10 นาทีในบัฟเฟอร์ซักรอบ หลังจากที่ซักสุดท้ายบัฟเฟอร์ถูกลบออกโดยการดูดและแถบถูกล้างใน 0.1 M โซเดียมซิเตรต การพัฒนาสีถูกเปิดใช้งานโดยการบ่มใน 4: 1 ส่วนผสมของพื้นผิว A (ไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์ในบัฟเฟอร์โซเดียมซิเตรต) และ B (3,3 '5,5'-tetramethylbenzidine ใน Dimethylformamide) เป็นเวลา 5 นาทีบนเวทีหมุน (70 รอบต่อนาที ) แถบถูกล้างในน้ำปราศจากไอออนและเก็บไว้ในบัฟเฟอร์ citrate จนกว่าการตีความ แถบที่พัฒนาได้รับการตีความหรือการถ่ายภาพภายใน 2 ชั่วโมงของการพัฒนาสีสำหรับการวิเคราะห์ที่ถูกต้องของผลการค้นหา แผ่นสามารถเก็บไว้ในบัฟเฟอร์ซิเตรตในถุงพลาสติกปิดผนึกในที่มืด ใด ๆ สัมผัสเป็นเวลานานไปสู่ผลลัพธ์ที่แสงจางหายของสัญญาณและมืดลงของเมมเบรน อีกวิธีหนึ่งคือแถบจะแห้งทันทีหลังจากล้างบัฟเฟอร์สุดท้ายซิเตรตและบันทึกเทปโดยตรงลงในสมุดบันทึกการวิจัย การตีความ Strip ได้ดำเนินการกับการซ้อนทับอะซิเตทที่มีข้อความที่มีเส้นระบุตำแหน่งของหัวแต่ละเทียบกับเครื่องหมายอ้างอิง

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ทั้งหมดการตรวจสอบของเหลว สารเคมีที่ใช้สำหรับสาย blot assay จาก amplicor แถบตรวจหาสารเคมีชนิดติดตั้งอิสระ ( dynal , ออสโล , นอร์เวย์ ) ผลิตภัณฑ์ทั้งหมดจะถูกใช้กับ 0.13 ( 1 : 2 N NaOH เจือจาง 0.4 N NaOH ในผลิตภัณฑ์ PCR ) HPV เขตแถบถูกวางไว้ในแต่ละหลุมของพิมพ์ถาด ( เพอร์กินเอลเมอร์ ) และปกคลุมด้วย 3 ml สารบัฟเฟอร์ ( 4 × sspe [ 1 × sspe เป็น 0.18 M NaCl nah2po4 10 มม. และ 1 mM EDTA pH 7.7 ] 0.1 โซเดียมโดเดซิลซัลเฟต ) prewarmed 53 มีตัวเลขขององศา เกิดเป็นผลิตภัณฑ์ไลกันบ่มในที่ตื้น สั่น ( 60 รอบต่อนาที ) น้ำที่อาบอยู่ที่ 53 องศา C เป็นเวลา 30 นาที ต่อไปนี้ probes , ถาดถูกลบออกจากน้ำที่อาบ และสารละลายเบสออกด้วยสูญญากาศดูด . แถบยังเป็นช่วงสั้น ๆในถาดล้างบัฟเฟอร์ซักห้อง ( 1 × sspe 0.1 โซเดียมโดเดซิลซัลเฟต ) หลังการล้างโดยปณิธาน 3 มล. ของ prewarmed ( 53 ° C ) ล้างบัฟเฟอร์ที่ถูกเพิ่มเข้าไปในแต่ละอย่างดีและถาดถูกบ่มในน้ำอาบน้ำสั่นที่ 53 °องศาเซลเซียสเป็นเวลา 15 นาที หลังจากนั้นล้างอ บัฟเฟอร์จะถูกลบออก , 3 ml . เบส streptavidin เปอร์เพิ่ม กัน และ ถาดอาหารถูกวางลงบนแท่นหมุนที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 30 นาที เขย่า ที่ 70 รอบต่อนาที หลุดคู่ถูกลบออกโดยล้างด่วนกับบรรยากาศล้างบัฟเฟอร์ตามด้วยสอง 10 นาทีล้างในบัฟเฟอร์ซักห้อง หลังจากล้างสุดท้าย บัฟเฟอร์ถูกลบออกโดยการดูด และแถบถูกล้างใน 0.1 โมลาร์โซเดียมซิเตรต . การพัฒนาสีได้รับการบ่มเพาะใน 1 ส่วนผสมของพื้นผิว ( ไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์ในโซเดียมซิเตรตบัฟเฟอร์ ) และ B ( 3 , 3 - 5 , 5 ’’ , tetramethylbenzidine ในการล้างพิษ ) เป็นเวลา 5 นาที บนแท่นหมุน ( 70 รอบต่อนาที ) แผ่นถูกล้างในน้ำคล้ายเนื้อเยื่อประสานและเก็บไว้ในซิเตรตบัฟเฟอร์จนการตีความ การพัฒนาแผ่นถูกตีความหรือถ่ายภาพภายใน 2 ชั่วโมง ของการพัฒนาสีสำหรับการวิเคราะห์ที่ถูกต้องของผลลัพธ์ที่ได้ รางสามารถถูกเก็บไว้ในบัฟเฟอร์ซิเตรตในถุงพลาสติกปิดผนึกในที่มืด ใด ๆเปิดรับแสงนาน ผลแสงจางหายของสัญญาณและมืดมิดของเมมเบรน หรือแถบจะแห้งทันทีต่อไปนี้สุดท้ายซิเตรทบัฟเฟอร์ ล้างและบันทึกโดยตรงลงในสมุดบันทึกการวิจัย ตีความได้ว่า แถบด้วยอะซิ ทับซ้อน กับสายที่แสดงตำแหน่งของแต่ละตัวเทียบกับการอ้างอิงมาร์ค