- ข้อความ
- ประวัติศาสตร์
1introductionJasmonates(JA),ethylen
1introduction
Jasmonates(JA),ethylene,and salicylic acid (SA) are known as defense phytohormones, which play important roles in regulating plant defense responses against various biotic and abiotic stresses such as pest attach,pathogen infection and wounding(Bari&Jones,2009;Santner,Calderon-Villalobos,&Estelle,2009). JA,ethylene and SA also serve as the signal molecules in many physiological processes,and they regulate multiple phytochemicals and secondary metabolites(Liu et al.,2010). Based on previous studies, plant hormone applications could regulate glucosinolate metabolism(Yan&Chan,2007).JA or methyl jasmonate(MeJA) consistently increased the levels of indole glucosinolates of oilseed rapes,mustard and Chinese cabbage,whereas the levels of aliphatic and aromatic glucosinolates remained unchanged after JA treatment Wallsgrove,&Pickett,1995;van Dam, Witjes,&Svatos,2003).On thecontrary,SA irrigation to the roots of oilseed raps increased all classas of glucosinolates with aromatic glucosinolate being the most predominant (Kiddle,Doughty,&Wallsgrove,1994). In addition,it was also reported that phytohormone treatments influenced the postharvest quality and phytochemicals of several horticultural products(Ayala-Zavala,Wang,Wang&Ferguson,2003). Strawberries treated with MeJA in conjunction with ethanol showed higher antioxidant capacity,more total phenolics,and anthocyanins than those treated with ethanol or control (Ayala-Zavala et al.,2005). The application of Jas and SA in crop improvement has great potential despite the fact that studies on the physiological effects of these two new phytohormones in crops are still limited.
Chinese kale (Brassica alboglabra Bailey) is an original Chinese vegetable belonging to the Brassicaceae family. It distributes widely in south China and Southeast Asia, and is present in relatively small quantities in Japan, Europe and America. Generally, Chinese kale is grown for its bolting stems as the common edible part, whereas the tender rosette leaves are also widely consumed as leafy vegetable in Southern China. Besides good flavor, Chinese kale also exhibits a high nutritional value because of its high levels of antioxidants and anticarcinogenic compounds,including vitamin C, carotenoids, phenoic compounds and glucosinolates (He,Chen,&Schnitzler,2002;He ,Song,Wang,&Wu,2002;Sun,Liu,Zhao,Yan,&Wang,2011;Sun,Yan,Liu,Wei,&Wang,2012)vitamin C is an important primary metabolite of plant that functions as an antioxidant, and has been shown to scavenge superoxide and hydroxyl radicals and acts as a chain-breaking antioxide in lipid peroxidation (Gayosso-Garcia Sancho,Yahia,& Gonzalez-Aguilar,2011; Wolucka, Goossens,&Inze,2005). Epidemiologic studies elucidated that cerotenoids as efficient quenchers of singlet oxygen clound also scavenge free radicals and thus prevent the development of cancer (Nishino,Murakoshi,Tokuda,&Satomi,2009).Phenolics have shown various biological effects including inhibition of low-density lipoprotein oxidation ,human immunodeficiency virus type 1 protease as well as their antimicrobial and anticarcinogenic capacities (Chun et al.,2005). Glucosinolates are a group of sulfur- and nitrogen-containing secondary metabolites that are mainly found in the order of Brassicales amd related group of dicotyledonous angiosperms (Hansen, Moller, Sorensen,& Cantwell,1995). Isothiocyanate, which is one kind of glucosinolate hydrolyzed products, have gained much attention in recent years owing to its significant anticarcinogenic activity. Epidemiological studies have shown that isothiocyanayes possess protective effect against different types of cancer, particularly bladder, colon and lung cancer ( Cartea&Velasco,2008). Although the applications of phytohormone treatments on horticultural crops have been widely studies (Ayala-Zavala et al.,2005;Kim,Chen,Wang,&Choi,2006; Kim, Fonseca, Choi,& Kubota, 2007; van Dam et al.,2003; Wang, Bowman,& Ding,2008;Zhang et al.,2003) further surveys are still needed, as different horticultural products contain different phytochemicals and response differently to various phytohormones; while the effects of phytohormone treatments varied with different edible parts and developmental stages. Moreover,few reports were available on the effects of plant hormone treatments on health-promoting compounds in leafy vegetables. It will be interesting to survey the role of plant hormones in inducing main health-promoting compounds in Chinese kale as a leafy vegetable, and to evaluate the effective preharvest approaches for maintain Chinese kale in good nutrient quality. In this study, we aim to investigate the effects on glucosinolates and antioxidants in the leaves treated with MeJA,Ethnol (ETH), 1-methylcyclopropene (1-MCP,an inhibitor of ethylene) and SA six days before harvest.
2.Material and methods
2.1 Plant material
The seeds of Chinese kale (Brassica alboglabra Bailey cv. Fuzhouhuanghua ) were sown in trays consisting of peat and vermiculite(3:1) in a greenhouse of Zhejiang University (Hangzhu, China) in October 2009. The seedlings were ggrown in the greenhouse at a day temperature of 25°C and a night temperature of 20°C. Water and fertilizer were applied as necessary.
2.2 Plant hormone treatments
Thirty days after growing, which was six days before harvest, plants of equal size and stature were selected to be treated with methyl jasmonate (MeJA), Ethrel (ETH), 1-methylcyclopropene (1-MCP) and salicylic acid (SA) (n=60).MeJA and 1-MCP treatments were conducted in 100 L airtight containers, respectively.MeJA were applied by vapor fumigation,i.e.,spotting on to filter paper at final vapor concentration of 100 µM (Ding,Wang,Gross & Smith, 2002; Wang,1998). The concentration of the 1-MCP treatment was 10 µL L^(-1). After 24 h treatment, the containers were removed. Ethrel (2-chlorethyl phosphonic acid) was sprayed on the shoots of Chinese kale plants at a concentration of 50 µL L^(-1) (Brader,Tas,&Palva,2001). The control was treated with sterile distilled water. SA treatments were applied as a shoot spraying and/or root irrigation. The concentrations of SA treatments with shoot spraying and root irrigation were 1 mM and 5 mM, respectively. The control was treated with sterile distilled water. The different handling methods were disgnated as SA shoot spraying and water root irrigation (SA/Control), water shoot spraying and SA root irrigation (Control/SA), and SA root spraying and SA root irrigation (SA/SA) (Kiddle et al.,1994;Van Dam et al.,2003).
The leaves were sampled for nutrient analysis at 0 d, 1 d, 3 d and d after plant hormone treatments. Samples were placed on ice, and immediately transported to the laboratory. For each sampling, three independent replicates were taken for analysis. Some samples were used as fresh for the analyses of chlorophyll, vitamin C and total carotenoids, while the other samples were frozen by lyophilization with a freeze dryer (VirTis Inc.,New York, USA) and sstorage at -20°C for further analyses of total phenolics, antioxidant capacity and glucosinolates.
2.3 Analysis of health-promoting compounds
2.3.1Glucosinolates composition and content
Glucosinolates were extracted and analyzed as previously described (Sun et al.,2011,2012). Briefly, freeze-dried samples (100 mg) were boiled in 4 mL water for 10 min. The supernatant was collected after centrifugation (5 min,700 g). and the residues were washed once with water (4 mL), centrifuged abd then combined with the previous extract. The aqueous extract was applied to a DEAE-Sephadex A-25(40 mg) column (pyridine acetate form) (GE Healthcare, Piscataway,NJ). The column was washed three times with 1 mL pyridine acetate(20 mM) and twice 1 mL water. The glucosinolates were converted into their desulpho analogues by overnight treatment with 100 µL of 0.1% (1.4 units) aryl sulphatase (Sigma), and the desuphoglucosinolaates were eluted with 2×0.5 mL water. HPLC analysis of desuphoglucosinolates was carried out using a Waters HPLC instrument equipped with a Model 2996 PDA absorbance detector (Waters, USA). Samples (20 µL) were separated at 30°C on a Waters Spherisorb C18 cloumn (250×4.6 mm i.d.; 5 µm particle size) using acetonitrile and water at a flow rate of 1.0 mL min^(-1) .The procedure employed isocratic elution with 1.5% acetonitrile for the first 5 min; a linear gradient to 20% acetonitrile over the next 15 min followed by isocratic elution with 20% acetonitrile for the final 10 min. Absorbance was detected at 226 nm. Ortho-nitrophenyl-β-D-galactopyranoside(Sigma) was used as an internal standard for HPLC analysis.
Jasmonates(JA),ethylene,and salicylic acid (SA) are known as defense phytohormones, which play important roles in regulating plant defense responses against various biotic and abiotic stresses such as pest attach,pathogen infection and wounding(Bari&Jones,2009;Santner,Calderon-Villalobos,&Estelle,2009). JA,ethylene and SA also serve as the signal molecules in many physiological processes,and they regulate multiple phytochemicals and secondary metabolites(Liu et al.,2010). Based on previous studies, plant hormone applications could regulate glucosinolate metabolism(Yan&Chan,2007).JA or methyl jasmonate(MeJA) consistently increased the levels of indole glucosinolates of oilseed rapes,mustard and Chinese cabbage,whereas the levels of aliphatic and aromatic glucosinolates remained unchanged after JA treatment Wallsgrove,&Pickett,1995;van Dam, Witjes,&Svatos,2003).On thecontrary,SA irrigation to the roots of oilseed raps increased all classas of glucosinolates with aromatic glucosinolate being the most predominant (Kiddle,Doughty,&Wallsgrove,1994). In addition,it was also reported that phytohormone treatments influenced the postharvest quality and phytochemicals of several horticultural products(Ayala-Zavala,Wang,Wang&Ferguson,2003). Strawberries treated with MeJA in conjunction with ethanol showed higher antioxidant capacity,more total phenolics,and anthocyanins than those treated with ethanol or control (Ayala-Zavala et al.,2005). The application of Jas and SA in crop improvement has great potential despite the fact that studies on the physiological effects of these two new phytohormones in crops are still limited.
Chinese kale (Brassica alboglabra Bailey) is an original Chinese vegetable belonging to the Brassicaceae family. It distributes widely in south China and Southeast Asia, and is present in relatively small quantities in Japan, Europe and America. Generally, Chinese kale is grown for its bolting stems as the common edible part, whereas the tender rosette leaves are also widely consumed as leafy vegetable in Southern China. Besides good flavor, Chinese kale also exhibits a high nutritional value because of its high levels of antioxidants and anticarcinogenic compounds,including vitamin C, carotenoids, phenoic compounds and glucosinolates (He,Chen,&Schnitzler,2002;He ,Song,Wang,&Wu,2002;Sun,Liu,Zhao,Yan,&Wang,2011;Sun,Yan,Liu,Wei,&Wang,2012)vitamin C is an important primary metabolite of plant that functions as an antioxidant, and has been shown to scavenge superoxide and hydroxyl radicals and acts as a chain-breaking antioxide in lipid peroxidation (Gayosso-Garcia Sancho,Yahia,& Gonzalez-Aguilar,2011; Wolucka, Goossens,&Inze,2005). Epidemiologic studies elucidated that cerotenoids as efficient quenchers of singlet oxygen clound also scavenge free radicals and thus prevent the development of cancer (Nishino,Murakoshi,Tokuda,&Satomi,2009).Phenolics have shown various biological effects including inhibition of low-density lipoprotein oxidation ,human immunodeficiency virus type 1 protease as well as their antimicrobial and anticarcinogenic capacities (Chun et al.,2005). Glucosinolates are a group of sulfur- and nitrogen-containing secondary metabolites that are mainly found in the order of Brassicales amd related group of dicotyledonous angiosperms (Hansen, Moller, Sorensen,& Cantwell,1995). Isothiocyanate, which is one kind of glucosinolate hydrolyzed products, have gained much attention in recent years owing to its significant anticarcinogenic activity. Epidemiological studies have shown that isothiocyanayes possess protective effect against different types of cancer, particularly bladder, colon and lung cancer ( Cartea&Velasco,2008). Although the applications of phytohormone treatments on horticultural crops have been widely studies (Ayala-Zavala et al.,2005;Kim,Chen,Wang,&Choi,2006; Kim, Fonseca, Choi,& Kubota, 2007; van Dam et al.,2003; Wang, Bowman,& Ding,2008;Zhang et al.,2003) further surveys are still needed, as different horticultural products contain different phytochemicals and response differently to various phytohormones; while the effects of phytohormone treatments varied with different edible parts and developmental stages. Moreover,few reports were available on the effects of plant hormone treatments on health-promoting compounds in leafy vegetables. It will be interesting to survey the role of plant hormones in inducing main health-promoting compounds in Chinese kale as a leafy vegetable, and to evaluate the effective preharvest approaches for maintain Chinese kale in good nutrient quality. In this study, we aim to investigate the effects on glucosinolates and antioxidants in the leaves treated with MeJA,Ethnol (ETH), 1-methylcyclopropene (1-MCP,an inhibitor of ethylene) and SA six days before harvest.
2.Material and methods
2.1 Plant material
The seeds of Chinese kale (Brassica alboglabra Bailey cv. Fuzhouhuanghua ) were sown in trays consisting of peat and vermiculite(3:1) in a greenhouse of Zhejiang University (Hangzhu, China) in October 2009. The seedlings were ggrown in the greenhouse at a day temperature of 25°C and a night temperature of 20°C. Water and fertilizer were applied as necessary.
2.2 Plant hormone treatments
Thirty days after growing, which was six days before harvest, plants of equal size and stature were selected to be treated with methyl jasmonate (MeJA), Ethrel (ETH), 1-methylcyclopropene (1-MCP) and salicylic acid (SA) (n=60).MeJA and 1-MCP treatments were conducted in 100 L airtight containers, respectively.MeJA were applied by vapor fumigation,i.e.,spotting on to filter paper at final vapor concentration of 100 µM (Ding,Wang,Gross & Smith, 2002; Wang,1998). The concentration of the 1-MCP treatment was 10 µL L^(-1). After 24 h treatment, the containers were removed. Ethrel (2-chlorethyl phosphonic acid) was sprayed on the shoots of Chinese kale plants at a concentration of 50 µL L^(-1) (Brader,Tas,&Palva,2001). The control was treated with sterile distilled water. SA treatments were applied as a shoot spraying and/or root irrigation. The concentrations of SA treatments with shoot spraying and root irrigation were 1 mM and 5 mM, respectively. The control was treated with sterile distilled water. The different handling methods were disgnated as SA shoot spraying and water root irrigation (SA/Control), water shoot spraying and SA root irrigation (Control/SA), and SA root spraying and SA root irrigation (SA/SA) (Kiddle et al.,1994;Van Dam et al.,2003).
The leaves were sampled for nutrient analysis at 0 d, 1 d, 3 d and d after plant hormone treatments. Samples were placed on ice, and immediately transported to the laboratory. For each sampling, three independent replicates were taken for analysis. Some samples were used as fresh for the analyses of chlorophyll, vitamin C and total carotenoids, while the other samples were frozen by lyophilization with a freeze dryer (VirTis Inc.,New York, USA) and sstorage at -20°C for further analyses of total phenolics, antioxidant capacity and glucosinolates.
2.3 Analysis of health-promoting compounds
2.3.1Glucosinolates composition and content
Glucosinolates were extracted and analyzed as previously described (Sun et al.,2011,2012). Briefly, freeze-dried samples (100 mg) were boiled in 4 mL water for 10 min. The supernatant was collected after centrifugation (5 min,700 g). and the residues were washed once with water (4 mL), centrifuged abd then combined with the previous extract. The aqueous extract was applied to a DEAE-Sephadex A-25(40 mg) column (pyridine acetate form) (GE Healthcare, Piscataway,NJ). The column was washed three times with 1 mL pyridine acetate(20 mM) and twice 1 mL water. The glucosinolates were converted into their desulpho analogues by overnight treatment with 100 µL of 0.1% (1.4 units) aryl sulphatase (Sigma), and the desuphoglucosinolaates were eluted with 2×0.5 mL water. HPLC analysis of desuphoglucosinolates was carried out using a Waters HPLC instrument equipped with a Model 2996 PDA absorbance detector (Waters, USA). Samples (20 µL) were separated at 30°C on a Waters Spherisorb C18 cloumn (250×4.6 mm i.d.; 5 µm particle size) using acetonitrile and water at a flow rate of 1.0 mL min^(-1) .The procedure employed isocratic elution with 1.5% acetonitrile for the first 5 min; a linear gradient to 20% acetonitrile over the next 15 min followed by isocratic elution with 20% acetonitrile for the final 10 min. Absorbance was detected at 226 nm. Ortho-nitrophenyl-β-D-galactopyranoside(Sigma) was used as an internal standard for HPLC analysis.
0/5000
1introductionJasmonates (JA), เอทิลีน และกรดซาลิไซลิ (SA) จะเรียกว่าป้องกัน phytohormones ซึ่งมีบทบาทสำคัญในโรงงานควบคุมป้องกันการตอบสนองต่อ biotic และ abiotic เครียดต่าง ๆ เช่นพืชแนบ การศึกษาการติดเชื้อและ wounding (บารีและโจนส์ 2009 Santner, Calderon Villalobos และเอส แตล 2009) JA เอทิลีน และ SA ยังทำหน้าที่เป็นสัญญาณโมเลกุลในกระบวนการสรีรวิทยาต่าง ๆ และพวกเขาควบคุม phytochemicals หลายและ metabolites รอง (หลิว et al., 2010) ขึ้นอยู่กับการศึกษาก่อนหน้านี้ โปรแกรมฮอร์โมนพืชสามารถควบคุม glucosinolate metabolism(Yan&Chan,2007).JA หรือ methyl jasmonate(MeJA) เพิ่มระดับของอินโดล glucosinolates oilseed rapes ผักกาด และผักกาดขาว ปลี ให้อย่างสม่ำเสมอในขณะที่ระดับของ glucosinolates aliphatic และหอมยังคงไม่เปลี่ยนแปลงหลังจากรักษา JA Wallsgrove, Pickett, 1995 เขื่อนแวน Witjes, & Svatos, 2003) ใน thecontrary ชลประทาน SA เพื่อรากของ oilseed raps เพิ่ม classas ทั้งหมดของ glucosinolates ด้วย glucosinolate หอมถูกสุดกัน (Kiddle, Doughty, & Wallsgrove, 1994) นอกจากนี้ มันยังรายงานว่า phytohormone รักษามีผลต่อคุณภาพหลังการเก็บเกี่ยวและ phytochemicals หลายเมนผลิตภัณฑ์ (อยา Zavala วัง วัง และเฟอร์กู สัน 2003) สตรอเบอร์รี่ถือ ด้วย MeJA ร่วมกับเอทานอลพบว่ากำลังการผลิตสารต้านอนุมูลอิสระสูง phenolics รวมเพิ่มเติม และ anthocyanins กว่ารับเอทานอลหรือตัวควบคุม (อยา Zavala et al., 2005) แอพลิเคชันของโรงแรมและ SA ในการปรับปรุงพืชมีศักยภาพที่ดีทั้ง ๆ การศึกษา phytohormones ใหม่เหล่านี้สองในพืชผลสรีรวิทยายังคงจำกัด คะน้า (ผัก alboglabra Bailey) เป็นผักจีนเดิมเป็นของตระกูล Brassicaceae มันกระจายอย่างกว้างขวางในภาคใต้ของจีนและเอเชียตะวันออกเฉียงใต้ กมีอยู่ในปริมาณที่ค่อนข้างเล็กในญี่ปุ่น ยุโรป และอเมริกา ทั่วไป คะน้าโตสำหรับลำต้นของ bolting เป็นส่วนหนึ่งที่กินทั่วไป ขณะ rosette ชำระเงินใบอย่างกว้างขวางนอกจากนี้การบริโภคเป็นผักใบเขียวชะอุ่มในภาคใต้ของจีน นอกจากรสชาติดี คะน้ายังจัดแสดงคุณค่าทางโภชนาการสูงเนื่องจากระดับความสูงของสารต้านอนุมูลอิสระและสาร anticarcinogenic วิตามินซี carotenoids สารประกอบ phenoic และ glucosinolates (เขา เฉิน & Schnitzler, 2002 เขา เพลง วัง และ วู 2002 ดวงอาทิตย์ หลิว เจียว ยาน และ วัง 2011 ดวงอาทิตย์ ย่าน หลิว Wei และ วัง 2012) วิตามินซีเป็น metabolite เป็นหลักสำคัญของพืชที่เป็นสารต้านอนุมูลอิสระที่ทำงาน และจะ scavenge ซูเปอร์ออกไซด์ และอนุมูลไฮดรอกซิล และทำหน้าที่เป็น antioxide แบ่งห่วงโซ่ใน peroxidation ของไขมัน (Sancho Gayosso การ์เซีย Yahia และ Gonzalez Aguilar, 2011 Wolucka, Goossens และ Inze, 2005) ศึกษา epidemiologic elucidated cerotenoids ที่เป็น quenchers ประสิทธิภาพของเสื้อกล้ามออกซิเจน clound ยัง scavenge อนุมูลอิสระ และป้องกันการพัฒนาของมะเร็ง (กรุณา Murakoshi, Tokuda และ Satomi, 2009) ดังนั้น Phenolics ได้แสดงลักษณะทางชีวภาพต่าง ๆ รวมทั้งยับยั้งการเกิดออกซิเดชัน low-density ไลโพโปรตีน รติเอสชนิด 1 ไวรัสเอชไอวีของมนุษย์ ตลอดจนกำลังของจุลินทรีย์ และ anticarcinogenic (ชุน et al., 2005) Glucosinolates คือ กลุ่มของประกอบด้วยซัลเฟอร์ และไนโตรเจนรอง metabolites ที่ส่วนใหญ่พบกับ Brassicales amd ที่เกี่ยวข้องกลุ่ม angiosperms dicotyledonous (แฮนเซ่น มอลเลอร์ Sorensen, & Cantwell, 1995) Isothiocyanate ซึ่งเป็นชนิดหนึ่งของผลิตภัณฑ์ glucosinolate hydrolyzed ได้รับความสนใจมากในปีที่ผ่านมาเพราะกิจกรรมของ anticarcinogenic อย่างมีนัยสำคัญ ความได้แสดงให้เห็นว่า isothiocyanayes มีผลป้องกันกับชนิดของมะเร็ง โดยเฉพาะอย่างยิ่งกระเพาะปัสสาวะ ลำไส้ใหญ่ และปอดมะเร็ง (Cartea & Velasco, 2008) แม้ว่าโปรแกรมบำบัด phytohormone ในผลผลิตทางพืชได้อย่างกว้างขวาง (อยา Zavala et al., 2005 การศึกษา คิม เฉิน วัง และ Choi, 2006 คิม Fonseca, Choi และ คุ 2007 ตู้ดำและ al., 2003 วัง Bowman, & ดิง 2008 จางและ al., 2003) เพิ่มเติม สำรวจยังคงจำเป็น เป็นผลิตภัณฑ์ horticultural ต่าง ๆ ประกอบด้วย phytochemicals แตกต่างและตอบสนองแตกต่าง phytohormones ต่าง ๆ ในขณะที่ผลของการรักษา phytohormone กินส่วนต่าง ๆ และขั้นตอนการพัฒนาที่แตกต่างกัน นอกจากนี้ บางรายงานมีในผลของการรักษาฮอร์โมนในการส่งเสริมสุขภาพสารในผักใบเขียวชะอุ่ม มันจะน่าสนใจสำรวจบทบาทของฮอร์โมนพืชใน inducing สารประกอบหลักที่ส่งเสริมสุขภาพในคะน้าเป็นผักใบเขียวชะอุ่ม และ preharvest มีประสิทธิภาพในการประเมินวิธีการใหม่ ๆ เพื่อรักษาคะน้าในธาตุอาหารคุณภาพดีด้วย ในการศึกษานี้ เรามุ่งการตรวจสอบผลการ glucosinolates และสารต้านอนุมูลอิสระในใบรับ ด้วย MeJA, Ethnol (ETH), 1-methylcyclopropene (1-MCP เป็นผลของเอทิลีน) และ SA หกวันก่อนเก็บเกี่ยว2.วัสดุและวิธีการ2.1 พืชวัสดุ มีหว่านเมล็ดคะน้า (ผัก alboglabra Bailey พันธุ์ Fuzhouhuanghua) ในถาดประกอบด้วยพรุและ vermiculite(3:1) ในเรือนกระจกที่มหาวิทยาลัยเจ้อเจียง (Hangzhu จีน) ในเดือน ๒๕๕๒ ตุลาคม กล้าไม้ถูก ggrown ในเรือนกระจกที่อุณหภูมิวัน 25 องศาเซลเซียสและอุณหภูมิกลางคืน 20 องศาเซลเซียส น้ำและปุ๋ยที่ใช้เท่าที่จำเป็น2.2 พืชฮอร์โมนบำบัด วันที่สามสิบหลังจากเติบโต ซึ่งหกวันก่อนการเก็บเกี่ยว พืชขนาดเท่ากันและสามารถถูกเลือกได้รับ methyl jasmonate (MeJA), Ethrel (ETH), 1-methylcyclopropene (1-MCP) และกรดซาลิไซลิ (SA) (n = 60) รักษา 1-MCP และ MeJA ได้ดำเนินการในบรรจุภัณฑ์แบบสุญญากาศ 100 L ตามลำดับ ใช้ MeJA โดยไอ fumigation,i.e.,spotting ระบบกระดาษกรองที่เข้มข้นสุดท้ายไอ 100 µM (ดิง วัง รวม & Smith, 2002 วัง 1998) ความเข้มข้นของการรักษา 1-MCP 10 µL L^(-1) หลังการรักษา 24 ชม คอนเทนเนอร์ถูกเอาออก Ethrel (2-chlorethyl กรด phosphonic) ถูกฉีดพ่นบนยอดคะน้าพืชที่ความเข้มข้นของ 50 µL L^(-1) (Brader, Tas, & Palva, 2001) ตัวควบคุมถูกรักษา ด้วยน้ำกลั่นฆ่าเชื้อ รักษา SA ถูกนำไปใช้เป็นที่ยิงพ่นหรือรากชลประทาน ความเข้มข้นของนวด SA ยิงพ่นและรากชลประทานมี 1 มม.และ 5 มม. ตามลำดับ ตัวควบคุมถูกรักษา ด้วยน้ำกลั่นฆ่าเชื้อ วิธีการจัดการที่แตกต่างกันได้ disgnated SA ยิงพ่นและน้ำรากชลประทาน (SA/ควบคุม), น้ำพ่นยิง และ SA รากชลประทาน (ควบคุม/SA), และ SA รากฉีดพ่น และ SA รากชลประทาน (SA/SA) (Kiddle et al., 1994 ตู้ดำและ al., 2003) ใบมีตัวอย่างสำหรับวิเคราะห์ธาตุอาหารที่ 0 d, 1 d, 3 d และ d หลังจากรักษาฮอร์โมนพืช ตัวอย่างวางบนน้ำแข็ง และขนส่งไปห้องปฏิบัติการทันที เหมือนกับอิสระสามที่ถ่ายสำหรับสุ่มตัวอย่างแต่ละ วิเคราะห์ ตัวอย่างที่ใช้เป็นสดสำหรับวิเคราะห์คลอโรฟิลล์ วิตามินซี และรวม carotenoids ในขณะที่ตัวอย่างถูกแช่แข็ง โดย lyophilization กับหยุดที่นี่ (VirTis Inc. นิวยอร์ก สหรัฐอเมริกา) และ sstorage ที่-20 ° C สำหรับการวิเคราะห์เพิ่มเติมรวม phenolics หม่อน และ glucosinolates2.3 สารประกอบวิเคราะห์ส่งเสริมสุขภาพ2.3.1Glucosinolates องค์ประกอบและเนื้อหา Glucosinolates ถูกสกัด และวิเคราะห์เป็นอธิบายไว้ก่อนหน้านี้ (Sun et al., 2011, 2012) สั้น ๆ กรอบตัวอย่าง (100 มิลลิกรัม) ถูกต้มในน้ำ 4 mL 10 นาที Supernatant รวบรวมไว้หลังจาก centrifugation (5 นาที 700 กรัม) และตกค้างถูกล้างเมื่อน้ำ (4 mL), centrifuged abd แล้วรวมกับสารสกัดจากก่อนหน้านี้ ใช้สารสกัดอควีกับ DEAE-Sephadex A-25 (40 มิลลิกรัม) คอลัมน์ (แบบฟอร์ม acetate pyridine) (GE สุขภาพ ปิสกาตาเวย์ NJ) คอลัมน์ถูกล้างสามครั้ง 1 mL pyridine acetate (20 mM) และสองน้ำ 1 mL Glucosinolates ได้ถูกแปลงเป็น analogues ของพวกเขา desulpho โดยรักษาค้างคืนกับ 100 µL sulphatase aryl (1.4 หน่วย) 0.1% (ซิกมา), และ desuphoglucosinolaates มี eluted กับ 2 × 0. น้ำ 5 mL วิเคราะห์ HPLC desuphoglucosinolates ถูกดำเนินโดยใช้เครื่องมือ HPLC น้ำพร้อมตัวจับ absorbance 2996 รุ่น PDA (น้ำ สหรัฐอเมริกา) ตัวอย่าง (20 µL) ถูกแยกที่ 30° C ใน cloumn Spherisorb C18 น้ำ (250 × 4. ประชาชน 6 mm; 5 µm อนุภาคขนาด) ใช้ acetonitrile และน้ำที่อัตราการไหลของ min^(-1) 1.0 mL ขั้นตอนการจ้าง elution isocratic คิด ด้วย acetonitrile 1.5% สำหรับ 5 นาทีแรก ไล่เส้นให้ acetonitrile 20% กว่าถัดไป 15 นาทีตาม ด้วย elution isocratic คิดด้วย acetonitrile 20% สำหรับ 10 นาทีสุดท้ายพบ Absorbance ที่ 226 nm Ortho-nitrophenyl-β-D-galactopyranoside(Sigma) ถูกใช้เป็นการภายในสำหรับการวิเคราะห์ HPLC
การแปล กรุณารอสักครู่..
1introduction
Jasmonates (JA) เอทิลีนและกรดซาลิไซลิ (SA) เป็นที่รู้จักกัน phytohormones การป้องกันซึ่งมีบทบาทสำคัญในการควบคุมการตอบสนองการป้องกันพืชกับความเครียดสิ่งมีชีวิตและ abiotic ต่างๆเช่นศัตรูพืชแนบติดเชื้อการติดเชื้อและการกระทบกระทั่ง (บารีและโจนส์ 2009; Santner , Calderon-โลโบและเอสเทล 2009) เจเอทิลีนและ SA ยังทำหน้าที่เป็นโมเลกุลสัญญาณในกระบวนการทางสรีรวิทยาหลายและพวกเขาควบคุมสารอาหารจากพืชหลายและสารทุติยภูมิ (Liu et al., 2010) จากการศึกษาก่อนหน้านี้การใช้งานของฮอร์โมนพืชที่สามารถควบคุมการเผาผลาญ glucosinolate (Yan & Chan, 2007) .JA หรือ methyl jasmonate (เชื้อร) ที่เพิ่มขึ้นอย่างต่อเนื่องระดับของ glucosinolates อินโดข่มขืน oilseed มัสตาร์ดและผักกาดขาวในขณะที่ระดับของอะลิฟาติกและ glucosinolates หอมยังคงอยู่ ไม่เปลี่ยนแปลงหลังการรักษา JA Wallsgrove และพิกเกต, 1995; แวนเขื่อน Witjes และ Svatos, 2003) .On thecontrary ชลประทาน SA ไปที่รากของเคาะน้ำมันเพิ่มขึ้น classas ทั้งหมดของ glucosinolates กับ glucosinolate หอมเป็นที่โดดเด่นมากที่สุด (Kiddle, เก่งกล้าและ Wallsgrove, 1994) นอกจากนี้ยังมีรายงานว่าการรักษา phytohormone อิทธิพลต่อคุณภาพหลังการเก็บเกี่ยวและสารอาหารจากพืชผลผลิตพืชสวนหลายคน (Ayala-เวโรนิกาวังวังและเฟอร์กูสัน, 2003) สตรอเบอร์รี่รับการรักษาด้วยเชื้อรร่วมกับเอทานอลแสดงให้เห็นว่าสารต้านอนุมูลอิสระสูงมากขึ้นรวมฟีนอลและ anthocyanins กว่าผู้ที่รับการรักษาด้วยเอทานอลหรือการควบคุม (อายาเวโรนิกา-et al., 2005) การประยุกต์ใช้ Jas และ SA ในการปรับปรุงการเพาะปลูกมีศักยภาพที่ดีแม้จะมีความจริงที่ว่าการศึกษาเกี่ยวกับผลกระทบทางสรีรวิทยาของทั้งสอง phytohormones ใหม่ในพืชยังคง จำกัด .
ผักคะน้า (Brassica alboglabra Bailey) เป็นผักต้นฉบับภาษาจีนเป็นของครอบครัวบรา จำหน่ายกันอย่างแพร่หลายในภาคใต้ของจีนและเอเชียตะวันออกเฉียงใต้และเป็นอยู่ในปริมาณที่ค่อนข้างเล็กในประเทศญี่ปุ่นยุโรปและอเมริกา โดยทั่วไปผักคะน้าที่ปลูกสำหรับ bolting ของลำต้นเป็นส่วนที่กินได้ทั่วไปในขณะที่ใบดอกกุหลาบซื้อนอกจากนี้ยังมีการบริโภคอย่างกว้างขวางว่าเป็นผักใบในภาคใต้ของจีน นอกจากรสชาติที่ดี, ผักคะน้ายังแสดงคุณค่าทางโภชนาการสูงเนื่องจากระดับสูงของสารต้านอนุมูลอิสระและสารมะเร็งรวมทั้งวิตามิน C, carotenoids, สารประกอบ phenoic และ glucosinolates (เขาเฉินและ Schnitzler 2002; เขาเพลงวังและวู 2002; Sun, หลิว Zhao แยนและวัง 2011 อาทิตย์แยน, หลิวเหว่ยและวัง 2012) วิตามินซีเป็นสารหลักที่สำคัญของพืชที่ทำหน้าที่เป็นสารต้านอนุมูลอิสระและได้รับการแสดงเพื่อไล่ superoxide และไฮดรอก อนุมูลและทำหน้าที่เป็นโซ่ทำลาย antioxide ในไขมัน peroxidation (Gayosso-การ์เซียโช Yahia และกอนซาเล-Aguilar 2011; Wolucka, Goossens และ Inze 2005) การศึกษาทางระบาดวิทยาโฮล์มที่ cerotenoids เป็นที่มีประสิทธิภาพ quenchers ของ clound ออกซิเจนเสื้อกล้ามยังไล่อนุมูลอิสระและทำให้ป้องกันการพัฒนาของโรคมะเร็ง (Nishino, Murakoshi, Tokuda และ Satomi 2009) .Phenolics ได้แสดงให้เห็นผลกระทบทางชีวภาพต่าง ๆ รวมทั้งการยับยั้งการเกิดออกซิเดชันไลโปโปรตีนความหนาแน่นต่ำ เชื้อไวรัสเอดส์ชนิดที่ 1 น้ำย่อยเช่นเดียวกับยาต้านจุลชีพและความสามารถของพวกเขามะเร็ง (จุน et al., 2005) glucosinolates เป็นกลุ่มของ sulfur- และไนโตรเจนที่มีสารทุติยภูมิที่พบส่วนใหญ่อยู่ในคำสั่งของเอเอ็มดี Brassicales กลุ่มที่เกี่ยวข้องกับการ dicotyledonous Angiosperms (แฮนเซน, มอลเลอร์, โซเรนเซนและฮีลี, 1995) isothiocyanate ซึ่งเป็นหนึ่งในประเภทของผลิตภัณฑ์ไฮโดรไลซ์ glucosinolate ได้รับความสนใจมากในปีที่ผ่านมาเนื่องจากกิจกรรมของมะเร็งอย่างมีนัยสำคัญ การศึกษาระบาดวิทยาได้แสดงให้เห็นว่ามี isothiocyanayes ป้องกันผลกระทบที่แตกต่างกันกับชนิดของโรคมะเร็งกระเพาะปัสสาวะโดยเฉพาะอย่างยิ่งลำไส้ใหญ่และมะเร็งปอด (Cartea และ Velasco 2008) แม้ว่าการใช้งานในการรักษา phytohormone ในพืชสวนได้รับการศึกษาอย่างกว้างขวาง (Ayala-เวโรนิกา, et al, 2005;. คิมเชงวังและ Choi, 2006 คิมฟอนเซคาชอยและคูโบต้า 2007. เขื่อนรถตู้, et al, 2003 วังโบว์แมนและ Ding, 2008. Zhang et al, 2003) การสำรวจต่อไปยังคงมีความจำเป็นในขณะที่ผลผลิตพืชสวนที่แตกต่างกันมีสารอาหารจากพืชที่แตกต่างกันและการตอบสนองแตกต่างกันไป phytohormones ต่างๆ ในขณะที่ผลกระทบของการรักษา phytohormone ต่างกับส่วนที่กินได้แตกต่างกันและระยะการพัฒนา นอกจากนี้รายงานไม่กี่ที่มีอยู่เกี่ยวกับผลกระทบของการรักษาฮอร์โมนพืชสารในการส่งเสริมสุขภาพในผักใบ มันจะน่าสนใจเพื่อสำรวจบทบาทของฮอร์โมนพืชในการกระตุ้นให้เกิดสารที่ส่งเสริมสุขภาพหลักในผักคะน้าเป็นผักใบเขียวและการประเมินวิธีการที่มีประสิทธิภาพสำหรับ preharvest รักษาผักคะน้าในสารอาหารที่มีคุณภาพดี ในการศึกษานี้เรามีจุดมุ่งหมายที่จะตรวจสอบผลกระทบต่อ glucosinolates และสารต้านอนุมูลอิสระในใบการรักษาด้วยเชื้อร, ธา (ETH) 1-methylcyclopropene (1-MCP, ยับยั้งเอทิลีน) และ SA หกวันก่อนการเก็บเกี่ยว.
2. วัสดุและ วิธี
2.1
วัสดุพืชเมล็ดของผักคะน้า(. Brassica alboglabra Bailey พันธุ์ Fuzhouhuanghua) ถูกหว่านในถาดประกอบด้วยพรุและดิน (3: 1) ในเรือนกระจกของมหาวิทยาลัยเจ้อเจียง (Hangzhu, จีน) ในเดือนตุลาคม 2009 ได้รับต้นกล้า ggrown ในเรือนกระจกที่อุณหภูมิวันที่ 25 องศาเซลเซียสและอุณหภูมิคืนวันที่ 20 ° C น้ำและปุ๋ยถูกนำไปใช้ตามความจำเป็น.
2.2
การรักษาฮอร์โมนพืชสามสิบวันนับแต่วันที่เพิ่มขึ้นซึ่งเป็นหกวันก่อนการเก็บเกี่ยวพืชขนาดเท่ากันและความสูงได้รับการคัดเลือกจะได้รับการรักษาด้วยเมธิล jasmonate (เชื้อร) Ethrel (ETH) 1-methylcyclopropene (1-MCP) และกรดซาลิไซลิ (SA) (n = 60) และการรักษา .MeJA 1 MCP ได้ดำเนินการใน 100 ลิตรบรรจุภาชนะอัดลม, respectively.MeJA ถูกนำมาใช้โดยการรมควันไอคือการจำในการกรองกระดาษไอสุดท้าย ความเข้มข้น 100 ไมครอน (Ding วังมวลรวมและสมิ ธ 2002; วัง 1998) ความเข้มข้นของการรักษา 1 MCP 10 ไมโครลิตร L ^ ที่ (- 1) หลังจากการรักษา 24 ชั่วโมง, ภาชนะบรรจุที่ถูกถอดออก Ethrel (2 chlorethyl กรด phosphonic) ถูกพ่นบนใบของพืชผักคะน้าที่ความเข้มข้น 50 ไมโครลิตร L a ^ ปุ่ม (- 1) (Brader, Tas และ Palva, 2001) การควบคุมการได้รับการรักษาด้วยน้ำกลั่นผ่านการฆ่าเชื้อ การรักษา SA ถูกนำไปใช้เป็นยิงฉีดพ่นและ / หรือการชลประทานราก ความเข้มข้นของการรักษาด้วยการฉีดพ่น SA ยิงและการชลประทานราก 1 ถึง 5 มิลลิเมตรตามลำดับ การควบคุมการได้รับการรักษาด้วยน้ำกลั่นผ่านการฆ่าเชื้อ วิธีการจัดการที่แตกต่างกัน disgnated เป็น SA ยิงฉีดพ่นน้ำและการชลประทานราก (SA / Control) การถ่ายน้ำฉีดพ่นและการชลประทานราก SA (ควบคุม / SA) และราก SA ฉีดพ่นและการชลประทานราก SA (SA / SA) (Kiddle et al, . 1994;.. แวนเขื่อน, et al, 2003)
ใบเก็บตัวอย่างสำหรับการวิเคราะห์สารอาหารที่ 0 d, d 1, 3 d d และหลังจากการรักษาฮอร์โมนพืช ตัวอย่างถูกวางไว้บนน้ำแข็งและเคลื่อนย้ายได้ทันทีไปยังห้องปฏิบัติการ สำหรับการสุ่มตัวอย่างในแต่ละสามซ้ำอิสระถูกนำสำหรับการวิเคราะห์ ตัวอย่างบางส่วนถูกนำมาใช้เป็นที่สดใหม่สำหรับการวิเคราะห์ของคลอโรฟิลวิตามินซีและนอยด์รวมในขณะที่กลุ่มตัวอย่างอื่น ๆ ถูกแช่แข็งโดย lyophilization กับเครื่องเป่าแช่แข็ง (VirTis อิงค์, New York, USA) และ sstorage ที่อุณหภูมิ -20 องศาเซลเซียสสำหรับการวิเคราะห์ต่อไป ของฟีนอลรวมความสามารถในการต้านอนุมูลอิสระและ glucosinolates.
2.3 การวิเคราะห์สารส่งเสริมสุขภาพ
2.3.1Glucosinolates องค์ประกอบและเนื้อหา
glucosinolates ถูกสกัดและวิเคราะห์ตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ (อาทิตย์ et al., 2011,2012) สั้น ๆ ตัวอย่างแห้ง (100 มก.) ได้รับการต้มในน้ำ 4 มิลลิลิตรเป็นเวลา 10 นาที สารละลายที่ได้รับภายหลังการหมุนเหวี่ยง (5 นาที, 700 กรัม) และสารตกค้างที่ถูกล้างครั้งเดียวกับน้ำ (4 มิลลิลิตร), อับดุลแล้วปั่นรวมกับสารสกัดจากก่อนหน้านี้ สารสกัดจากน้ำที่ถูกนำไปใช้กับ DEAE-Sephadex A-25 (40 มก.) คอลัมน์ (แบบอะซิเตทไพริดีน) (GE Healthcare, พิสแคต, นิวเจอร์ซีย์) คอลัมน์ถูกล้างสามครั้งด้วยอะซิเตทไพริดีน 1 มิลลิลิตร (20 มิลลิเมตร) และครั้งที่สองน้ำ 1 มิลลิลิตร glucosinolates ถูกแปลงเป็น analogues desulpho ของพวกเขาโดยการรักษาค้างคืนกับ 100 ไมโครลิตร 0.1% (1.4 หน่วย) aryl sulphatase (ซิกม่า) และ desuphoglucosinolaates ถูกชะด้วย 2 × 0.5 มิลลิลิตรน้ำ การวิเคราะห์ HPLC ของ desuphoglucosinolates ได้รับการดำเนินการโดยใช้เครื่องมือ HPLC น้ำพร้อมกับรุ่น 2996 เครื่องตรวจจับการดูดกลืนแสง PDA (Waters, สหรัฐอเมริกา) ตัวอย่าง (20 ไมโครลิตร) ถูกแยกออกวันที่ 30 ° C ในน่านน้ำ Spherisorb C18 cloumn (250 × 4.6 มมรหัส 5 อนุภาคขนาดไมครอน) โดยใช้ acetonitrile และน้ำในอัตราการไหล 1.0 มิลลิลิตรนาที ^ (- 1) ขั้นตอนการจ้างงานได้โดยง่าย ชะ isocratic กับ acetonitrile 1.5% เป็นครั้งแรก 5 นาที; ลาดเชิงเส้นถึง 20% ในช่วงต่อไป acetonitrile 15 นาทีตามด้วยชะ isocratic กับ acetonitrile 20% สุดท้าย 10 นาที การดูดกลืนแสงถูกตรวจพบที่ 226 นาโนเมตร Ortho-Nitrophenyl-β-D-galactopyranoside (ซิกม่า) ถูกนำมาใช้เป็นมาตรฐานสำหรับการวิเคราะห์ภายใน HPLC
Jasmonates (JA) เอทิลีนและกรดซาลิไซลิ (SA) เป็นที่รู้จักกัน phytohormones การป้องกันซึ่งมีบทบาทสำคัญในการควบคุมการตอบสนองการป้องกันพืชกับความเครียดสิ่งมีชีวิตและ abiotic ต่างๆเช่นศัตรูพืชแนบติดเชื้อการติดเชื้อและการกระทบกระทั่ง (บารีและโจนส์ 2009; Santner , Calderon-โลโบและเอสเทล 2009) เจเอทิลีนและ SA ยังทำหน้าที่เป็นโมเลกุลสัญญาณในกระบวนการทางสรีรวิทยาหลายและพวกเขาควบคุมสารอาหารจากพืชหลายและสารทุติยภูมิ (Liu et al., 2010) จากการศึกษาก่อนหน้านี้การใช้งานของฮอร์โมนพืชที่สามารถควบคุมการเผาผลาญ glucosinolate (Yan & Chan, 2007) .JA หรือ methyl jasmonate (เชื้อร) ที่เพิ่มขึ้นอย่างต่อเนื่องระดับของ glucosinolates อินโดข่มขืน oilseed มัสตาร์ดและผักกาดขาวในขณะที่ระดับของอะลิฟาติกและ glucosinolates หอมยังคงอยู่ ไม่เปลี่ยนแปลงหลังการรักษา JA Wallsgrove และพิกเกต, 1995; แวนเขื่อน Witjes และ Svatos, 2003) .On thecontrary ชลประทาน SA ไปที่รากของเคาะน้ำมันเพิ่มขึ้น classas ทั้งหมดของ glucosinolates กับ glucosinolate หอมเป็นที่โดดเด่นมากที่สุด (Kiddle, เก่งกล้าและ Wallsgrove, 1994) นอกจากนี้ยังมีรายงานว่าการรักษา phytohormone อิทธิพลต่อคุณภาพหลังการเก็บเกี่ยวและสารอาหารจากพืชผลผลิตพืชสวนหลายคน (Ayala-เวโรนิกาวังวังและเฟอร์กูสัน, 2003) สตรอเบอร์รี่รับการรักษาด้วยเชื้อรร่วมกับเอทานอลแสดงให้เห็นว่าสารต้านอนุมูลอิสระสูงมากขึ้นรวมฟีนอลและ anthocyanins กว่าผู้ที่รับการรักษาด้วยเอทานอลหรือการควบคุม (อายาเวโรนิกา-et al., 2005) การประยุกต์ใช้ Jas และ SA ในการปรับปรุงการเพาะปลูกมีศักยภาพที่ดีแม้จะมีความจริงที่ว่าการศึกษาเกี่ยวกับผลกระทบทางสรีรวิทยาของทั้งสอง phytohormones ใหม่ในพืชยังคง จำกัด .
ผักคะน้า (Brassica alboglabra Bailey) เป็นผักต้นฉบับภาษาจีนเป็นของครอบครัวบรา จำหน่ายกันอย่างแพร่หลายในภาคใต้ของจีนและเอเชียตะวันออกเฉียงใต้และเป็นอยู่ในปริมาณที่ค่อนข้างเล็กในประเทศญี่ปุ่นยุโรปและอเมริกา โดยทั่วไปผักคะน้าที่ปลูกสำหรับ bolting ของลำต้นเป็นส่วนที่กินได้ทั่วไปในขณะที่ใบดอกกุหลาบซื้อนอกจากนี้ยังมีการบริโภคอย่างกว้างขวางว่าเป็นผักใบในภาคใต้ของจีน นอกจากรสชาติที่ดี, ผักคะน้ายังแสดงคุณค่าทางโภชนาการสูงเนื่องจากระดับสูงของสารต้านอนุมูลอิสระและสารมะเร็งรวมทั้งวิตามิน C, carotenoids, สารประกอบ phenoic และ glucosinolates (เขาเฉินและ Schnitzler 2002; เขาเพลงวังและวู 2002; Sun, หลิว Zhao แยนและวัง 2011 อาทิตย์แยน, หลิวเหว่ยและวัง 2012) วิตามินซีเป็นสารหลักที่สำคัญของพืชที่ทำหน้าที่เป็นสารต้านอนุมูลอิสระและได้รับการแสดงเพื่อไล่ superoxide และไฮดรอก อนุมูลและทำหน้าที่เป็นโซ่ทำลาย antioxide ในไขมัน peroxidation (Gayosso-การ์เซียโช Yahia และกอนซาเล-Aguilar 2011; Wolucka, Goossens และ Inze 2005) การศึกษาทางระบาดวิทยาโฮล์มที่ cerotenoids เป็นที่มีประสิทธิภาพ quenchers ของ clound ออกซิเจนเสื้อกล้ามยังไล่อนุมูลอิสระและทำให้ป้องกันการพัฒนาของโรคมะเร็ง (Nishino, Murakoshi, Tokuda และ Satomi 2009) .Phenolics ได้แสดงให้เห็นผลกระทบทางชีวภาพต่าง ๆ รวมทั้งการยับยั้งการเกิดออกซิเดชันไลโปโปรตีนความหนาแน่นต่ำ เชื้อไวรัสเอดส์ชนิดที่ 1 น้ำย่อยเช่นเดียวกับยาต้านจุลชีพและความสามารถของพวกเขามะเร็ง (จุน et al., 2005) glucosinolates เป็นกลุ่มของ sulfur- และไนโตรเจนที่มีสารทุติยภูมิที่พบส่วนใหญ่อยู่ในคำสั่งของเอเอ็มดี Brassicales กลุ่มที่เกี่ยวข้องกับการ dicotyledonous Angiosperms (แฮนเซน, มอลเลอร์, โซเรนเซนและฮีลี, 1995) isothiocyanate ซึ่งเป็นหนึ่งในประเภทของผลิตภัณฑ์ไฮโดรไลซ์ glucosinolate ได้รับความสนใจมากในปีที่ผ่านมาเนื่องจากกิจกรรมของมะเร็งอย่างมีนัยสำคัญ การศึกษาระบาดวิทยาได้แสดงให้เห็นว่ามี isothiocyanayes ป้องกันผลกระทบที่แตกต่างกันกับชนิดของโรคมะเร็งกระเพาะปัสสาวะโดยเฉพาะอย่างยิ่งลำไส้ใหญ่และมะเร็งปอด (Cartea และ Velasco 2008) แม้ว่าการใช้งานในการรักษา phytohormone ในพืชสวนได้รับการศึกษาอย่างกว้างขวาง (Ayala-เวโรนิกา, et al, 2005;. คิมเชงวังและ Choi, 2006 คิมฟอนเซคาชอยและคูโบต้า 2007. เขื่อนรถตู้, et al, 2003 วังโบว์แมนและ Ding, 2008. Zhang et al, 2003) การสำรวจต่อไปยังคงมีความจำเป็นในขณะที่ผลผลิตพืชสวนที่แตกต่างกันมีสารอาหารจากพืชที่แตกต่างกันและการตอบสนองแตกต่างกันไป phytohormones ต่างๆ ในขณะที่ผลกระทบของการรักษา phytohormone ต่างกับส่วนที่กินได้แตกต่างกันและระยะการพัฒนา นอกจากนี้รายงานไม่กี่ที่มีอยู่เกี่ยวกับผลกระทบของการรักษาฮอร์โมนพืชสารในการส่งเสริมสุขภาพในผักใบ มันจะน่าสนใจเพื่อสำรวจบทบาทของฮอร์โมนพืชในการกระตุ้นให้เกิดสารที่ส่งเสริมสุขภาพหลักในผักคะน้าเป็นผักใบเขียวและการประเมินวิธีการที่มีประสิทธิภาพสำหรับ preharvest รักษาผักคะน้าในสารอาหารที่มีคุณภาพดี ในการศึกษานี้เรามีจุดมุ่งหมายที่จะตรวจสอบผลกระทบต่อ glucosinolates และสารต้านอนุมูลอิสระในใบการรักษาด้วยเชื้อร, ธา (ETH) 1-methylcyclopropene (1-MCP, ยับยั้งเอทิลีน) และ SA หกวันก่อนการเก็บเกี่ยว.
2. วัสดุและ วิธี
2.1
วัสดุพืชเมล็ดของผักคะน้า(. Brassica alboglabra Bailey พันธุ์ Fuzhouhuanghua) ถูกหว่านในถาดประกอบด้วยพรุและดิน (3: 1) ในเรือนกระจกของมหาวิทยาลัยเจ้อเจียง (Hangzhu, จีน) ในเดือนตุลาคม 2009 ได้รับต้นกล้า ggrown ในเรือนกระจกที่อุณหภูมิวันที่ 25 องศาเซลเซียสและอุณหภูมิคืนวันที่ 20 ° C น้ำและปุ๋ยถูกนำไปใช้ตามความจำเป็น.
2.2
การรักษาฮอร์โมนพืชสามสิบวันนับแต่วันที่เพิ่มขึ้นซึ่งเป็นหกวันก่อนการเก็บเกี่ยวพืชขนาดเท่ากันและความสูงได้รับการคัดเลือกจะได้รับการรักษาด้วยเมธิล jasmonate (เชื้อร) Ethrel (ETH) 1-methylcyclopropene (1-MCP) และกรดซาลิไซลิ (SA) (n = 60) และการรักษา .MeJA 1 MCP ได้ดำเนินการใน 100 ลิตรบรรจุภาชนะอัดลม, respectively.MeJA ถูกนำมาใช้โดยการรมควันไอคือการจำในการกรองกระดาษไอสุดท้าย ความเข้มข้น 100 ไมครอน (Ding วังมวลรวมและสมิ ธ 2002; วัง 1998) ความเข้มข้นของการรักษา 1 MCP 10 ไมโครลิตร L ^ ที่ (- 1) หลังจากการรักษา 24 ชั่วโมง, ภาชนะบรรจุที่ถูกถอดออก Ethrel (2 chlorethyl กรด phosphonic) ถูกพ่นบนใบของพืชผักคะน้าที่ความเข้มข้น 50 ไมโครลิตร L a ^ ปุ่ม (- 1) (Brader, Tas และ Palva, 2001) การควบคุมการได้รับการรักษาด้วยน้ำกลั่นผ่านการฆ่าเชื้อ การรักษา SA ถูกนำไปใช้เป็นยิงฉีดพ่นและ / หรือการชลประทานราก ความเข้มข้นของการรักษาด้วยการฉีดพ่น SA ยิงและการชลประทานราก 1 ถึง 5 มิลลิเมตรตามลำดับ การควบคุมการได้รับการรักษาด้วยน้ำกลั่นผ่านการฆ่าเชื้อ วิธีการจัดการที่แตกต่างกัน disgnated เป็น SA ยิงฉีดพ่นน้ำและการชลประทานราก (SA / Control) การถ่ายน้ำฉีดพ่นและการชลประทานราก SA (ควบคุม / SA) และราก SA ฉีดพ่นและการชลประทานราก SA (SA / SA) (Kiddle et al, . 1994;.. แวนเขื่อน, et al, 2003)
ใบเก็บตัวอย่างสำหรับการวิเคราะห์สารอาหารที่ 0 d, d 1, 3 d d และหลังจากการรักษาฮอร์โมนพืช ตัวอย่างถูกวางไว้บนน้ำแข็งและเคลื่อนย้ายได้ทันทีไปยังห้องปฏิบัติการ สำหรับการสุ่มตัวอย่างในแต่ละสามซ้ำอิสระถูกนำสำหรับการวิเคราะห์ ตัวอย่างบางส่วนถูกนำมาใช้เป็นที่สดใหม่สำหรับการวิเคราะห์ของคลอโรฟิลวิตามินซีและนอยด์รวมในขณะที่กลุ่มตัวอย่างอื่น ๆ ถูกแช่แข็งโดย lyophilization กับเครื่องเป่าแช่แข็ง (VirTis อิงค์, New York, USA) และ sstorage ที่อุณหภูมิ -20 องศาเซลเซียสสำหรับการวิเคราะห์ต่อไป ของฟีนอลรวมความสามารถในการต้านอนุมูลอิสระและ glucosinolates.
2.3 การวิเคราะห์สารส่งเสริมสุขภาพ
2.3.1Glucosinolates องค์ประกอบและเนื้อหา
glucosinolates ถูกสกัดและวิเคราะห์ตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ (อาทิตย์ et al., 2011,2012) สั้น ๆ ตัวอย่างแห้ง (100 มก.) ได้รับการต้มในน้ำ 4 มิลลิลิตรเป็นเวลา 10 นาที สารละลายที่ได้รับภายหลังการหมุนเหวี่ยง (5 นาที, 700 กรัม) และสารตกค้างที่ถูกล้างครั้งเดียวกับน้ำ (4 มิลลิลิตร), อับดุลแล้วปั่นรวมกับสารสกัดจากก่อนหน้านี้ สารสกัดจากน้ำที่ถูกนำไปใช้กับ DEAE-Sephadex A-25 (40 มก.) คอลัมน์ (แบบอะซิเตทไพริดีน) (GE Healthcare, พิสแคต, นิวเจอร์ซีย์) คอลัมน์ถูกล้างสามครั้งด้วยอะซิเตทไพริดีน 1 มิลลิลิตร (20 มิลลิเมตร) และครั้งที่สองน้ำ 1 มิลลิลิตร glucosinolates ถูกแปลงเป็น analogues desulpho ของพวกเขาโดยการรักษาค้างคืนกับ 100 ไมโครลิตร 0.1% (1.4 หน่วย) aryl sulphatase (ซิกม่า) และ desuphoglucosinolaates ถูกชะด้วย 2 × 0.5 มิลลิลิตรน้ำ การวิเคราะห์ HPLC ของ desuphoglucosinolates ได้รับการดำเนินการโดยใช้เครื่องมือ HPLC น้ำพร้อมกับรุ่น 2996 เครื่องตรวจจับการดูดกลืนแสง PDA (Waters, สหรัฐอเมริกา) ตัวอย่าง (20 ไมโครลิตร) ถูกแยกออกวันที่ 30 ° C ในน่านน้ำ Spherisorb C18 cloumn (250 × 4.6 มมรหัส 5 อนุภาคขนาดไมครอน) โดยใช้ acetonitrile และน้ำในอัตราการไหล 1.0 มิลลิลิตรนาที ^ (- 1) ขั้นตอนการจ้างงานได้โดยง่าย ชะ isocratic กับ acetonitrile 1.5% เป็นครั้งแรก 5 นาที; ลาดเชิงเส้นถึง 20% ในช่วงต่อไป acetonitrile 15 นาทีตามด้วยชะ isocratic กับ acetonitrile 20% สุดท้าย 10 นาที การดูดกลืนแสงถูกตรวจพบที่ 226 นาโนเมตร Ortho-Nitrophenyl-β-D-galactopyranoside (ซิกม่า) ถูกนำมาใช้เป็นมาตรฐานสำหรับการวิเคราะห์ภายใน HPLC
การแปล กรุณารอสักครู่..
1introduction
jasmonates ( จา ) และเอทิลีนและ salicylic acid ( SA ) เป็นที่รู้จักกันเป็น phytohormones ป้องกันซึ่งมีบทบาทสำคัญในการควบคุมการตอบสนองต่อความเครียดและป้องกันพืชชีวภาพสิ่งมีชีวิตต่างๆเช่นศัตรูพืชแนบ , การติดเชื้อเชื้อโรคและบาดเจ็บ ( บารี&โจนส์ , 2009 ; santner Calderon , วิลล่าโลบอส& , เอสเทล , 2009 ) จาเอทิลีน และ ซา ยังเป็นสัญญาณโมเลกุลในกระบวนการทางสรีรวิทยาหลายและพวกเขาควบคุม phytochemicals และหลายชนิดทุติยภูมิ ( Liu et al . , 2010 ) จากการศึกษาก่อนหน้านี้โปรแกรมฮอร์โมนพืชสามารถควบคุมการเผาผลาญกลูโคซิโนเลต ( ยัน&ชาน , 2007 ) จาหรือเมทิลจั มเนต ( ตาราง ) อย่างต่อเนื่อง เพิ่มระดับของอินโดล กลูโคซิโนเลตของ oilseed ข่มขืนผักกาด ผักกวางตุ้ง ในขณะที่ระดับของอะลิฟาติกและอะโรมาติกกลูโคซิโนเลตยังคงไม่เปลี่ยนแปลงหลังจารักษา wallsgrove &พิคเก็ต , 1995 ; รถตู้เขื่อน witjes & svatos , 2003 ) ในขณะที่ในการชลประทานเพื่อรากของทั้งหมด classas oilseed ) เพิ่มของกลูโคซิโนเลตกับหอมกลูโคซิโนเลตเป็นเด่นที่สุด ( kiddle กล้าหาญ , , & wallsgrove , 1994 ) นอกจากนี้นอกจากนี้ยังได้รายงานว่า phytohormone รักษาต่อคุณภาพหลังการเก็บเกี่ยวและ phytochemicals ผลผลิตพืชสวนหลาย ( Ayala ซาวาลา วัง วัง&เฟอร์กูสัน , 2003 ) สตรอเบอร์รี่ที่ได้รับตารางร่วมกับสารเอทานอลสูงกว่าความจุรวมมากขึ้นผล และแอนโทไซยานินมากกว่าผู้ปฏิบัติด้วยเอทานอล หรือควบคุม ( Ayala ซาวาลา et al . , 2005 )การประยุกต์ใช้ JAS และซาในการปรับปรุงพันธุ์พืชมีศักยภาพที่ดี แม้จะมี ความจริงที่ว่า การศึกษาผลทางสรีรวิทยาของทั้งสองใหม่ phytohormones ในพืชจะยังคงจำกัด
คะน้าเป็นผักจีนเดิมที่เป็นของครอบครัว Brassicaceae . มันกระจายกันอย่างแพร่หลายในจีนตอนใต้และเอเชียตะวันออกเฉียงใต้และเป็นปัจจุบันในปริมาณที่ค่อนข้างเล็กในญี่ปุ่น ยุโรป และอเมริกา โดยทั่วไปแล้ว ผักคะน้าที่ปลูกสำหรับการ bolting ลำต้นเป็นส่วนที่กินได้ทั่วไปในขณะที่ซื้อ Rosette ใบยังบริโภคอย่างกว้างขวาง เช่น ใบผักในภาคใต้ของจีน นอกจากรสชาติดีมากคะน้ายังจัดแสดงที่มีคุณค่าทางโภชนาการสูง เพราะระดับสูงของสารต้านอนุมูลอิสระและการสารประกอบ ได้แก่ วิตามินซี , แคโรทีนอยด์ และสาร phenoic กลูโคซิโนเลต ( เขา เฉิน &ชนิตสเลอร์ , 2002 ; เขา , เพลง , วัง , & Wu , 2002 ; Sun , ลุย , Zhao Yan , &วัง , 2011 ; อาทิตย์ เหยียน , หลิวเหว่ย , & , วัง , 2012 ) วิตามินซี ที่สำคัญคืออาหารหลักของพืชที่ทำหน้าที่เป็นสารต้านอนุมูลอิสระและมีการแสดงหาซุปเปอร์และอนุมูลไฮดรอกซิล และทำหน้าที่เป็นโซ่แตก antioxide lipid peroxidation ( gayosso การ์เซียซานโช่ Yahia & กอนซาเลซ อากีล่าร์ , 2011 ; wolucka กูสเซิ่นส์&นเซ , , 2548 ) การศึกษาทางระบาดวิทยาอธิบายว่า cerotenoids ประสิทธิภาพ quenchers ของออกซิเจนเสื้อกล้ามเมฆายังหาอนุมูลอิสระและป้องกันการพัฒนาของมะเร็ง ( นิชิโนะ ,murakoshi โทคุดะ &ซาโตมิ , 2552 ) ผลแสดงผลทางชีวภาพต่าง ๆ รวมถึงการยับยั้งการออกซิเดชันไลโปโปรตีนความหนาแน่นต่ำ , ไวรัสภูมิคุ้มกันบกพร่องของมนุษย์ประเภท 1 ติเช่นเดียวกับพวกเขาและความสามารถต้านการ ( ชุน et al . , 2005 )กลูโคซิโนเลทเป็นกลุ่มของซัลเฟอร์ และ nitrogen-containing ชนิดทุติยภูมิที่พบเป็นส่วนใหญ่ในการสั่งซื้อของ AMD ที่เกี่ยวข้อง brassicales กลุ่มพืชดอกใบเลี้ยงคู่ ( แฮนเซน โมลเลอร์ โซเรนเซน , , , & แคนท์เวล , 1995 ) ไอโซไธโอไซยาเนต ซึ่งเป็นหนึ่งในชนิดของกลูโคไซโนเลทจากผลิตภัณฑ์ ได้รับความสนใจอย่างมากในปีที่ผ่านมาเนื่องจากการของกิจกรรมที่สำคัญการศึกษาระบาดวิทยาได้แสดงให้เห็นว่า isothiocyanayes มีป้องกันผลกระทบกับมะเร็งชนิดต่าง ๆ โดยเฉพาะอย่างยิ่ง กระเพาะ ลำไส้ และมะเร็งในปอด ( cartea & Velasco , 2008 ) แม้ว่าการรักษาใน phytohormone พืชสวนได้รับการศึกษาอย่างกว้างขวาง ( Ayala ซาวาลา et al . , 2005 ; คิม , เฉิน , หวัง &ชอย , 2006 ; คิม ฟอนเซก้า ชอย&คูโบต้า , 2007 ; เขื่อน et al . , 2003 ;หวัง โบว์แมน &ดิง , 2008 ; Zhang et al . , 2003 ) การสำรวจเพิ่มเติม ยังเป็นเป็นผลิตภัณฑ์พืชสวนแตกต่างกันประกอบด้วย phytochemicals ที่แตกต่างกันและการตอบสนองที่แตกต่าง phytohormones ต่างๆ ในขณะที่ผลของการรักษา phytohormone แปรผกผันกับชิ้นส่วนที่แตกต่างกันกินและขั้นตอนการพัฒนา นอกจากนี้
jasmonates ( จา ) และเอทิลีนและ salicylic acid ( SA ) เป็นที่รู้จักกันเป็น phytohormones ป้องกันซึ่งมีบทบาทสำคัญในการควบคุมการตอบสนองต่อความเครียดและป้องกันพืชชีวภาพสิ่งมีชีวิตต่างๆเช่นศัตรูพืชแนบ , การติดเชื้อเชื้อโรคและบาดเจ็บ ( บารี&โจนส์ , 2009 ; santner Calderon , วิลล่าโลบอส& , เอสเทล , 2009 ) จาเอทิลีน และ ซา ยังเป็นสัญญาณโมเลกุลในกระบวนการทางสรีรวิทยาหลายและพวกเขาควบคุม phytochemicals และหลายชนิดทุติยภูมิ ( Liu et al . , 2010 ) จากการศึกษาก่อนหน้านี้โปรแกรมฮอร์โมนพืชสามารถควบคุมการเผาผลาญกลูโคซิโนเลต ( ยัน&ชาน , 2007 ) จาหรือเมทิลจั มเนต ( ตาราง ) อย่างต่อเนื่อง เพิ่มระดับของอินโดล กลูโคซิโนเลตของ oilseed ข่มขืนผักกาด ผักกวางตุ้ง ในขณะที่ระดับของอะลิฟาติกและอะโรมาติกกลูโคซิโนเลตยังคงไม่เปลี่ยนแปลงหลังจารักษา wallsgrove &พิคเก็ต , 1995 ; รถตู้เขื่อน witjes & svatos , 2003 ) ในขณะที่ในการชลประทานเพื่อรากของทั้งหมด classas oilseed ) เพิ่มของกลูโคซิโนเลตกับหอมกลูโคซิโนเลตเป็นเด่นที่สุด ( kiddle กล้าหาญ , , & wallsgrove , 1994 ) นอกจากนี้นอกจากนี้ยังได้รายงานว่า phytohormone รักษาต่อคุณภาพหลังการเก็บเกี่ยวและ phytochemicals ผลผลิตพืชสวนหลาย ( Ayala ซาวาลา วัง วัง&เฟอร์กูสัน , 2003 ) สตรอเบอร์รี่ที่ได้รับตารางร่วมกับสารเอทานอลสูงกว่าความจุรวมมากขึ้นผล และแอนโทไซยานินมากกว่าผู้ปฏิบัติด้วยเอทานอล หรือควบคุม ( Ayala ซาวาลา et al . , 2005 )การประยุกต์ใช้ JAS และซาในการปรับปรุงพันธุ์พืชมีศักยภาพที่ดี แม้จะมี ความจริงที่ว่า การศึกษาผลทางสรีรวิทยาของทั้งสองใหม่ phytohormones ในพืชจะยังคงจำกัด
คะน้าเป็นผักจีนเดิมที่เป็นของครอบครัว Brassicaceae . มันกระจายกันอย่างแพร่หลายในจีนตอนใต้และเอเชียตะวันออกเฉียงใต้และเป็นปัจจุบันในปริมาณที่ค่อนข้างเล็กในญี่ปุ่น ยุโรป และอเมริกา โดยทั่วไปแล้ว ผักคะน้าที่ปลูกสำหรับการ bolting ลำต้นเป็นส่วนที่กินได้ทั่วไปในขณะที่ซื้อ Rosette ใบยังบริโภคอย่างกว้างขวาง เช่น ใบผักในภาคใต้ของจีน นอกจากรสชาติดีมากคะน้ายังจัดแสดงที่มีคุณค่าทางโภชนาการสูง เพราะระดับสูงของสารต้านอนุมูลอิสระและการสารประกอบ ได้แก่ วิตามินซี , แคโรทีนอยด์ และสาร phenoic กลูโคซิโนเลต ( เขา เฉิน &ชนิตสเลอร์ , 2002 ; เขา , เพลง , วัง , & Wu , 2002 ; Sun , ลุย , Zhao Yan , &วัง , 2011 ; อาทิตย์ เหยียน , หลิวเหว่ย , & , วัง , 2012 ) วิตามินซี ที่สำคัญคืออาหารหลักของพืชที่ทำหน้าที่เป็นสารต้านอนุมูลอิสระและมีการแสดงหาซุปเปอร์และอนุมูลไฮดรอกซิล และทำหน้าที่เป็นโซ่แตก antioxide lipid peroxidation ( gayosso การ์เซียซานโช่ Yahia & กอนซาเลซ อากีล่าร์ , 2011 ; wolucka กูสเซิ่นส์&นเซ , , 2548 ) การศึกษาทางระบาดวิทยาอธิบายว่า cerotenoids ประสิทธิภาพ quenchers ของออกซิเจนเสื้อกล้ามเมฆายังหาอนุมูลอิสระและป้องกันการพัฒนาของมะเร็ง ( นิชิโนะ ,murakoshi โทคุดะ &ซาโตมิ , 2552 ) ผลแสดงผลทางชีวภาพต่าง ๆ รวมถึงการยับยั้งการออกซิเดชันไลโปโปรตีนความหนาแน่นต่ำ , ไวรัสภูมิคุ้มกันบกพร่องของมนุษย์ประเภท 1 ติเช่นเดียวกับพวกเขาและความสามารถต้านการ ( ชุน et al . , 2005 )กลูโคซิโนเลทเป็นกลุ่มของซัลเฟอร์ และ nitrogen-containing ชนิดทุติยภูมิที่พบเป็นส่วนใหญ่ในการสั่งซื้อของ AMD ที่เกี่ยวข้อง brassicales กลุ่มพืชดอกใบเลี้ยงคู่ ( แฮนเซน โมลเลอร์ โซเรนเซน , , , & แคนท์เวล , 1995 ) ไอโซไธโอไซยาเนต ซึ่งเป็นหนึ่งในชนิดของกลูโคไซโนเลทจากผลิตภัณฑ์ ได้รับความสนใจอย่างมากในปีที่ผ่านมาเนื่องจากการของกิจกรรมที่สำคัญการศึกษาระบาดวิทยาได้แสดงให้เห็นว่า isothiocyanayes มีป้องกันผลกระทบกับมะเร็งชนิดต่าง ๆ โดยเฉพาะอย่างยิ่ง กระเพาะ ลำไส้ และมะเร็งในปอด ( cartea & Velasco , 2008 ) แม้ว่าการรักษาใน phytohormone พืชสวนได้รับการศึกษาอย่างกว้างขวาง ( Ayala ซาวาลา et al . , 2005 ; คิม , เฉิน , หวัง &ชอย , 2006 ; คิม ฟอนเซก้า ชอย&คูโบต้า , 2007 ; เขื่อน et al . , 2003 ;หวัง โบว์แมน &ดิง , 2008 ; Zhang et al . , 2003 ) การสำรวจเพิ่มเติม ยังเป็นเป็นผลิตภัณฑ์พืชสวนแตกต่างกันประกอบด้วย phytochemicals ที่แตกต่างกันและการตอบสนองที่แตกต่าง phytohormones ต่างๆ ในขณะที่ผลของการรักษา phytohormone แปรผกผันกับชิ้นส่วนที่แตกต่างกันกินและขั้นตอนการพัฒนา นอกจากนี้
การแปล กรุณารอสักครู่..
ภาษาอื่น ๆ
การสนับสนุนเครื่องมือแปลภาษา: กรีก, กันนาดา, กาลิเชียน, คลิงออน, คอร์สิกา, คาซัค, คาตาลัน, คินยารวันดา, คีร์กิซ, คุชราต, จอร์เจีย, จีน, จีนดั้งเดิม, ชวา, ชิเชวา, ซามัว, ซีบัวโน, ซุนดา, ซูลู, ญี่ปุ่น, ดัตช์, ตรวจหาภาษา, ตุรกี, ทมิฬ, ทาจิก, ทาทาร์, นอร์เวย์, บอสเนีย, บัลแกเรีย, บาสก์, ปัญจาป, ฝรั่งเศส, พาชตู, ฟริเชียน, ฟินแลนด์, ฟิลิปปินส์, ภาษาอินโดนีเซี, มองโกเลีย, มัลทีส, มาซีโดเนีย, มาราฐี, มาลากาซี, มาลายาลัม, มาเลย์, ม้ง, ยิดดิช, ยูเครน, รัสเซีย, ละติน, ลักเซมเบิร์ก, ลัตเวีย, ลาว, ลิทัวเนีย, สวาฮิลี, สวีเดน, สิงหล, สินธี, สเปน, สโลวัก, สโลวีเนีย, อังกฤษ, อัมฮาริก, อาร์เซอร์ไบจัน, อาร์เมเนีย, อาหรับ, อิกโบ, อิตาลี, อุยกูร์, อุสเบกิสถาน, อูรดู, ฮังการี, ฮัวซา, ฮาวาย, ฮินดี, ฮีบรู, เกลิกสกอต, เกาหลี, เขมร, เคิร์ด, เช็ก, เซอร์เบียน, เซโซโท, เดนมาร์ก, เตลูกู, เติร์กเมน, เนปาล, เบงกอล, เบลารุส, เปอร์เซีย, เมารี, เมียนมา (พม่า), เยอรมัน, เวลส์, เวียดนาม, เอสเปอแรนโต, เอสโทเนีย, เฮติครีโอล, แอฟริกา, แอลเบเนีย, โคซา, โครเอเชีย, โชนา, โซมาลี, โปรตุเกส, โปแลนด์, โยรูบา, โรมาเนีย, โอเดีย (โอริยา), ไทย, ไอซ์แลนด์, ไอร์แลนด์, การแปลภาษา.
- ความรู้สึกของฉันที่มีต่อวิชาภาษอังกฤษหลา
- The two corridors of the Stellar River.
- Ayutthaya, Thailand law is a good law. B
- that's what
- The law is the law in medieval Thailand
- After this reference operation the gases
- finished
- สาระเกี่ยวกับ โรคทางกายในผู้ป่วยโรคจิตเภ
- 셀카
- ตอนแรก จะเป็นการสรุปบทกฎหมายที่เกี่ยวกับ
- 오늘은 월요일!
- The two corridors of the Stellar River.
- สาระเกี่ยวกับ โรคทางกายในผู้ป่วยโรคจิตเภ
- แอบใจหายเหมือนกันคะ
- Relax very quickly Goodnight
- Sentence
- ตอนแรก จะเป็นการสรุปบทกฎหมายที่เกี่ยวกับ
- Entrust that assh*le to us. Toss the kni
- ความรู้สึกของฉันที่มีต่อวิชาภาษอังกฤษหลา
- The operating limitations within which c
- เมา
- Enacted" the first law was enacted in th
- ความรู้สึกของฉันที่มีต่อวิชาภาษอังกฤษหลา
- Rheology and structure of fermented milk
