When leaf samples collected in spring were used for the uRT-PCRand mRT-PCR assays, repeated tests confirmed that the detectionof ASGV in leaves of pear and apple was very reliable. Surprisingly,poor mRT-PCR efficiency for ASGV was observed when the dormantbark samples of apple and pear were used. However, the mRT-PCRassays for ACLSV and ASPV were less affected by using dormantbark samples. The reason might be that the occurrence of ASGVis highly localized in host tissues as indicated in previous reports(Knapp et al., 1995, 1998) and a lower ASGV titer in dormant barksof both pear and apple. Therefore, although the tests using barkmaterials can be carried out over the full year, as that indicated inthe previous studies (Menzel et al., 2002; Hassan et al., 2006), theresults obtained at different sampling times might be variable. Pear,especially its old tissues, is rich in polysaccharides and polyphenols,which strongly interfered in the amplification efficiency (Demekeand Adams, 1992; Staub et al., 1995; Pandey et al., 1996). Therefore,young leaves in spring were the most suitable materials for RT-PCRdetection of those viruses. Furthermore, although previous studiesreported the simultaneous detection of two viruses (Menzel et al.,2002) and four viruses (Hassan et al., 2006) infecting apple andpear, their optimized reaction conditions largely depended on theresults obtained by using infected apple materials. These protocolsfrequently failed in the detection viruses in some pear plants (asshown in Fig. S1) due to low virus titer, or high divergence of pearviruses, or some other reasons.
เมื่อเก็บตัวอย่างใบในฤดูใบไม้ผลิที่ใช้สำหรับ urt-pcrand ตรวจ MRT-PCR การทดสอบซ้ำแล้วซ้ำอีกได้รับการยืนยันว่า asgv detectionof ในใบของลูกแพร์และแอปเปิ้ลเป็นที่น่าเชื่อถือมาก น่าแปลกใจที่มีประสิทธิภาพ MRT-pcr ดีสำหรับ asgv พบเมื่อ dormantbark ตัวอย่างแอปเปิ้ลและลูกแพร์ถูกนำมาใช้ แต่ MRT pcrassays สำหรับ aclsv aspv และได้รับผลกระทบน้อยลงโดยใช้ตัวอย่าง dormantbarkเหตุผลที่อาจเป็นไปได้ว่าการเกิดขึ้นของ asgvis ท้องถิ่นสูงในเนื้อเยื่อโฮสต์ตามที่ระบุไว้ในรายงานก่อนหน้านี้ (แนปเอตอัล. 1995, 1998) และ titer asgv ต่ำกว่าใน barksof อยู่เฉยๆทั้งลูกแพร์และแอปเปิ้ล ดังนั้นแม้ว่าการทดสอบโดยใช้ barkmaterials สามารถดำเนินการได้ในช่วงปีที่เต็มรูปแบบเช่นเดียวกับที่ระบุในภาคการศึกษาก่อนหน้านี้ (Menzel et al, 2002;.. hassan et al, 2006)theresults ที่ได้รับในช่วงเวลาที่แตกต่างกันการเก็บตัวอย่างอาจจะมีตัวแปร ลูกแพร์โดยเฉพาะอย่างยิ่งเนื้อเยื่อเก่าของมันอุดมไปด้วย polysaccharides และโพลีฟีนซึ่งขอแทรกแซงในการขยายประสิทธิภาพ (demekeand adams, 1992; staub et al, 1995;. Pandey et al, 1996.) ดังนั้นใบอ่อนในฤดูใบไม้ผลิเป็นวัสดุที่เหมาะสมที่สุดสำหรับ RT-pcrdetection ของไวรัสที่ ยิ่งไปกว่านั้นแม้ว่าหน้าที่ studiesreported ตรวจสอบพร้อมกันของสองไวรัส (Menzel et al,., 2002) และสี่ไวรัส (hassan และคณะ. 2006) แอปเปิ้ลติดไวรัส andpear เงื่อนไขปฏิกิริยาของพวกเขาที่ดีที่สุดส่วนใหญ่ขึ้นอยู่กับ theresults ที่ได้จากการใช้วัสดุที่มีแอปเปิ้ลที่ติดเชื้อ เหล่านี้ protocolsfrequently ล้มเหลวในการตรวจสอบไวรัสในพืชบางลูกแพร์ (asshown ในมะเดื่อ. s1) เนื่องจากการ titer ไวรัสต่ำหรือความแตกต่างสูงของ pearviruses หรือบางเหตุผลอื่น ๆ
การแปล กรุณารอสักครู่..
เมื่อใช้ตัวอย่างใบไม้ที่เก็บในฤดูใบไม้ผลิสำหรับ assays mRT PCR uRT PCRand ทดสอบซ้ำยืนยันว่า detectionof ASGV ในใบแอปเปิ้ลและลูกแพร์น่าเชื่อถือ จู่ ๆ ประสิทธิภาพดี mRT-PCR สำหรับ ASGV ถูกตรวจสอบเมื่อใช้ตัวอย่าง dormantbark แอปเปิ้ลและลูกแพร์ อย่างไรก็ตาม mRT-PCRassays ACLSV และ ASPV ได้น้อยได้รับผลกระทบ โดยใช้ตัวอย่าง dormantbark เหตุผลที่อาจจะเกิด ASGVis รับการสูงแปลในเนื้อเยื่อโฮสต์ตามที่ระบุในรายงานก่อนหน้านี้ (Knapp และ al., 1995, 1998) และเป็น titer ASGV ล่างใน barksof แต่ลูกแพร์และแอปเปิลได้ ดังนั้น แม้ ว่าการทดสอบที่ใช้ barkmaterials สามารถทำผ่านปีเต็ม ตามที่ระบุไว้ในการศึกษาก่อนหน้า (Menzel และ al., 2002 Hassan et al., 2006), theresults ได้เวลาสุ่มตัวอย่างที่แตกต่างกันอาจเป็นตัวแปร ลูกแพร์ เนื้อโดยเฉพาะอย่างยิ่งของเก่าเยื่อ มี polysaccharides และโพลีฟีน ซึ่งขอติดในประสิทธิภาพขยาย (Demekeand อดัมส์ 1992 Staub และ al., 1995 Pandey et al., 1996) ดังนั้น ใบอ่อนในฤดูใบไม้ผลิได้วัสดุเหมาะสมที่สุดสำหรับ RT-PCRdetection ของไวรัสเหล่านั้น นอกจากนี้ แม้ว่าก่อนหน้านี้ studiesreported การตรวจพบพร้อมกันสองไวรัส (Menzel และ al., 2002) และ andpear แอปเปิ้ล ปฏิกิริยาของพวกเขาให้เหมาะสภาพส่วนใหญ่พร้อมกับ theresults ได้ โดยใช้วัสดุแอปเปิ้ลติดไวรัสติดไวรัส 4 (Hassan et al., 2006) Protocolsfrequently เหล่านี้ล้มเหลวในการตรวจหาไวรัสในพืชบางต้นแพร์ (asshown ในฟิก S1) เนื่องจากไวรัสต่ำ titer หรือ divergence สูง pearviruses หรือเหตุผลอื่น ๆ
การแปล กรุณารอสักครู่..