2. EXPERIMENTAL 2.1. Reagents Horse

2. EXPERIMENTAL

2.1. Reagents

Horseradish peroxidase, chitosan, sodium borohydride, hydrogen peroxide,
hydrogentetrachloroaurate(III) (HAuC14) and trisodium citrate were obtained. from Sigma. Glutaraldehyde was obtained from Fluka. All other chemicals were of analytical grade and all the solutions were prepared using distilled water.


2.2. Instrument
All electrochemical measurements were carried out with a 663 VA Metrohm. The threeelectrode system consisted of a pencil lead electrode as the working electrode, a Ag/AgC1 as the reference electrode and a platinum wire as the auxiliary electrode.


2.3. Preparation of gold nanoparticles
All glasswares used in the preparation of AuNPs were cleaned in freshly prepared 10% w/v of HNO3 for overnight, thoroughly rinsed with distilled water and dried in air. AuNPs were obtained by reduction of gold ions with reducing agent. The AuNPs used in this work were prepared according to reported method with a slight modification [18]. Briefly, five hundred milliliters of aqueous solution containing 0.3 mM HA'iC14 and 0.38 mM trisodium citrate was prepared. Then 1.2 mL of 0.125 M NaBH4 solution was rapidly added into the gold solution under continuous stirring. The color of the solution turned into a purple-red solution, which indicated that the AuNPs were formed and the

Int. J. Electrochem. Sci., Vol. 7, 2012 4647
prepared AuNPs were then stored in a dark glass bottle at 4 ฐC for further use. The resulting AuNPs was characterized with UV—vis spectroscopy (UV1601, Shimadzu) and transmission electron microscopy in a JEM 2010.


2.4. Preparation ofp encil lead electrode
The pencil leads (HB, 2B, 1H, 2H, 3H, 4H, 5H and 6H) were obtained from STAEDTLER, Germany. All leads had a total length of 2.0 cm and a diameter of 2.0 mm. The body of pencil lead was tightly coated with high-density polyethylene (HDPE). The electrical contact was provided by a
metallic wire inserted into the pencil lead. Prior to each series of experiments, the pencil lead electrode was thoroughly polished with aqueous slurry of 0.3-0.05 pm alumina powder on a polishing cloth, and then electrochemical pretreatment of pencil electrode surface was carried out at 1.80 V for 5 min in 0.5 M acetate buffer solution (pH 4.80) containing 0.02 M of NaCI. The prepared electrodes were dried in air and immediately modified by multilayer films.


2.5. Preparation of multilayer films-modified pencil lead electrode

1-111P

AuNPs

Chitosan


4'









Figure 1. Scheme of the hydrogen peroxide biosensor.

Figure. 1 shows the schematic structure of the hydrogen peroxide biosensor based on multilayer films. For preparation of the enzyme biosensor, first cleaned pencil lead electrode was dipped into 2 mL of 0.5% w/v chitosan solution with applying a potential of 1.5 V for 5 min (denoted as CS pencil lead electrode). After the electrodeposition step, (i) modified electrode was immersed in 500 pL of AuNPs solution for 6 h (denoted as AuNPs/CS pencil lead electrode), (ii) followed by the adsorption of HRP for 12 h (denoted as HRP/AuNPs/CS pencil lead electrode), and rinsed thoroughly

Int. J. Electrochem. Sci., Vol. 7, 2012 4648
with distilled water to remove some weakly adsorbed HRP which was regarded as the one layer of multilayer films modified electrode (denoted as (HRP/AuNPs),/ CS pencil lead electrode). Steps (i) and (ii) were then repeated for the required number of layers (denoted as (HRP/AuNPs),/CS pencil lead electrode). For comparison, without AuNPs modified electrode was carried out by the electrodeposition of 0.5% w/v chitosan with applying a potential of 1.5 V for 5 min. The modified pencil lead electrode was immersed in 2.5 %v/v glutaraldehyde for 20 min. Then this electrode was immersed in HRP solution for 12 h (denoted as HRP/Glu/CS pencil lead electrode). The electrode should be soaked in a pH 7.00 phosphate buffer solution at 4 'C until further use.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2. ทดลอง 2.1. reagents Horseradish peroxidase ไคโตซาน โซเดียม borohydride ไฮโดรเจนเปอร์ ออกไซด์hydrogentetrachloroaurate(III) (HAuC14) และซิเต trisodium ได้รับ จากซิก Glutaraldehyde ถูกรับจาก Fluka สารเคมีอื่น ๆ ที่เกรดวิเคราะห์ และทุกโซลูชั่นได้เตรียมไว้ใช้กลั่นน้ำ 2.2 ตราสาร วัดไฟฟ้าทั้งหมดถูกดำเนินกับ 663 VA Metrohm ระบบ threeelectrode ประกอบด้วยของเป็นดินสอนำอิเล็กโทรดทำงานไฟฟ้า Ag/AgC1 เป็นอิเล็กโทรดอ้างอิงและลวดแพลทินัมเป็นอิเล็กโทรดเสริม 2.3. เตรียมเก็บกักทอง Glasswares ทั้งหมดที่ใช้ในการเตรียมการของ AuNPs ได้ถูกล้างไวรัสในสดเตรียมไว้ 10% w/v ของ HNO3 พรรณไม้หลากหลายชนิด อย่างละเอียด rinsed ด้วยน้ำกลั่น และแห้งในอากาศ AuNPs ได้รับ โดยการลดลงของประจุทองกับตัวแทนลดลง AuNPs ที่ใช้ในการทำงานนี้ได้จัดทำตามวิธีการรายงานด้วยการปรับเปลี่ยนเล็กน้อย [18] ละลายประกอบด้วย 0.3 มม.ฮาสั้น ๆ ห้าร้อย milliliters' ซิเตรต trisodium iC14 และ 0.38 มม.ที่เตรียม 1.2 mL ของโซลูชัน NaBH4 0.125 M ได้อย่างรวดเร็วเพิ่มลงในโซลูชันทองใต้กวนอย่างต่อเนื่องด้วย เปลี่ยนสีของโซลูชันแก้ไขปัญหาสีม่วงแดง ซึ่งบ่งชี้ว่า AuNPs ที่มีรูปแบบและ ของดอกเบี้ย J. Electrochem Sci. ปี 7, 2012 4647AuNPs เตรียมไว้แล้วได้ถูกเก็บไว้ในขวดแก้วสีเข้มที่ ฐC 4 สำหรับใช้ต่อไป AuNPs ได้ถูกลักษณะกับ UV – vis ก (UV1601, Shimadzu) และส่งอิเล็กตรอน microscopy ใน JEM 2010 2.4 การเตรียม ofp encil นำอิเล็กโทรด เป้าหมายดินสอ (HB, 2B, 1 ชั่วโมง 2H, 3H, 4H, H ที่ 5 และ 6H) ได้รับจาก STAEDTLER เยอรมนี ลูกค้าเป้าหมายทั้งหมดมีความยาวรวมของ 2.0 ซม.และเส้นผ่าศูนย์กลาง 2.0 มม. ร่างกายของดินสอได้แน่นเคลือบ ด้วย high-density polyethylene (HDPE) ติดต่อการไฟฟ้าได้รับการ ลวดโลหะที่แทรกแบบดินสอ ก่อนแต่ละชุดการทดลอง อิเล็กโทรดนำดินสอถูกต้องขัดกับน้ำอควีของ 0.3 0.05 ผงอลูมินาน.บนผ้าขัด และจากนั้น ทำ pretreatment ไฟฟ้าของพื้นผิวอิเล็กโทรดดินสอออกที่ 1.80 V สำหรับ 5 นาทีในโซลูชันบัฟเฟอร์ acetate 0.5 M (pH 4.80) ประกอบด้วย 0.02 M ของ NaCI หุงตเตรียมถูกอบแห้งในอากาศ และปรับเปลี่ยนทันที โดยฟิล์มหลายชั้น 2.5 การเตรียมอิเล็กโทรดนำดินสอแก้ไขฟิล์มหลายชั้น P 1-111 AuNPs ไคโตซาน 4' รูปที่ 1 โครงร่างของ biosensor ไฮโดรเจนเพอร์ออกไซด์ รูป 1 แสดงโครงสร้างแผนผังวงจรของ biosensor ไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์ที่ใช้ฟิล์มหลายชั้น สำหรับการเตรียมของ biosensor เอนไซม์ อิเล็กโทรดนำดินสอสะอาดแรกถูกจุ่มลงใน 2 mL ของ 0.5% w/v ไคโตซานกับการใช้ศักยภาพของ 1.5 V สำหรับ 5 นาที (สามารถบุเป็น CS ดินสอนำไฟฟ้า) หลังจากขั้นตอนการเคลือบ อิเล็กโทรด (i) ถูกปรับเปลี่ยนถูกแช่อยู่ใน 500 pL AuNPs โซลูชั่นสำหรับ h 6 (สามารถบุเป็นอิเล็กโทรดนำดินสอ AuNPs/CS), (ii) ตาม ด้วยการดูดความชื้นของ HRP h 12 (สามารถบุเป็นอิเล็กโทรดนำดินสอ HRP/AuNPs/CS), และ rinsed อย่างละเอียด ของดอกเบี้ย J. Electrochem Sci. ปี 7, 2012 4648กับกลั่นน้ำเอาบาง HRP weakly adsorbed ซึ่งถือว่าเป็นชั้นหนึ่งของฟิล์มหลายชั้นปรับไฟฟ้า (ตาม (HRP/AuNPs), / CS ดินสอนำไฟฟ้า) ขั้นตอนที่ (i) และ (ii) ได้แล้วซ้ำจำนวนชั้นจำเป็น (ตาม (HRP/AuNPs), / CS ดินสอนำไฟฟ้า) สำหรับการเปรียบเทียบ โดย AuNPs ไฟฟ้าที่ปรับเปลี่ยนถูกดำเนินการ โดยเคลือบของ 0.5% w/v ไคโตซานกับการใช้ศักยภาพของ 1.5 V สำหรับ 5 นาที อิเล็กโทรดนำดินสอแก้ไขถูกสัมผัส glutaraldehyde %v/v 2.5 สำหรับ 20 นาที อิเล็กโทรดนี้แล้ว ถูกแช่อยู่ใน HRP โซลูชันสำหรับ h 12 (สามารถบุเป็นอิเล็กโทรดนำดินสอ HRP Glu/CS) อิเล็กโทรดควรจะนำไปแช่ในโซลูชันบัฟเฟอร์ฟอสเฟต pH 7.00 น.ที่ 4 ' C จนกระทั่งใช้ต่อไป

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2. ทดลอง2.1 รีเอเจนต์มะรุม peroxidase, ไคโตซาน, borohydride โซเดียมไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์hydrogentetrachloroaurate (III) (HAuC14) และซิเตรตไตรโซเดียมที่ได้รับ จากซิกม่า Glutaraldehyde ที่ได้รับจาก Fluka สารเคมีอื่น ๆ ทั้งหมดเป็นของเกรดการวิเคราะห์และการแก้ปัญหาทั้งหมดถูกจัดทำขึ้นโดยใช้น้ำกลั่น. 2.2 เครื่องมือที่ใช้ในการวัดไฟฟ้าทั้งหมดได้ดำเนินการกับ 663 VA Metrohm ระบบ threeelectrode ประกอบด้วยขั้วไฟฟ้าไส้ดินสอเป็นขั้วไฟฟ้าทำงาน Ag / AgC1 เป็นขั้วไฟฟ้าอ้างอิงและลวดแพลทินัมเป็นขั้วช่วย. 2.3 เตรียมความพร้อมของทองคำนาโนแก้วทั้งหมดที่ใช้ในการจัดทำ AuNPs ทำความสะอาดในที่ปรุงสดใหม่ 10% w / v ของ HNO3 สำหรับค้างคืนล้างให้สะอาดด้วยน้ำกลั่นและแห้งในอากาศ AuNPs ที่ได้รับจากการลดลงของไอออนทองกับรีดิวซ์ AuNPs ใช้ในงานนี้ได้จัดทำขึ้นตามวิธีการรายงานที่มีการปรับเปลี่ยนเล็กน้อย [18] สั้น ๆ ห้าร้อยมิลลิลิตรของสารละลายที่มี 0.3 มิลลิ HA'iC14 และ 0.38 มิลลิซิเตรต Trisodium ถูกจัดทำขึ้น แล้ว 1.2 มิลลิลิตร 0.125 แก้ปัญหา M NaBH4 ถูกเพิ่มเข้ามาอย่างรวดเร็วในการแก้ปัญหาทองคำภายใต้กวนอย่างต่อเนื่อง สีของการแก้ปัญหากลายเป็นวิธีการแก้ปัญหาสีม่วงสีแดงซึ่งชี้ให้เห็นว่า AuNPs กำลังก่อตัวขึ้นและInt เจ Electrochem Sci., ฉบับที่ 7, 2012 4647 AuNPs เตรียมถูกเก็บไว้ในขวดแก้วสีเข้มที่ 4 ฐ C สำหรับการใช้งานต่อไป AuNPs ผลก็มีลักษณะที่มีสเปคโทร UV-Vis (UV1601, Shimadzu) และกล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอนในการส่ง JEM 2010. 2.4 เตรียม OFP อิเล็กโทรดนำ encil ดินสอนำไปสู่ ​​(HB, 2B, 1H, 2H, 3H, 4H, 5H และ 6H) ที่ได้รับจาก STAEDTLER เยอรมนี นำไปสู่การทั้งหมดมีความยาวรวม 2.0 ซม. และมีขนาดเส้นผ่าศูนย์กลาง 2.0 มม ร่างกายของไส้ดินสอถูกเคลือบอย่างแน่นหนากับเอทิลีนความหนาแน่นสูง (HDPE) ติดต่อไฟฟ้าได้รับจากลวดโลหะแทรกเข้าไปในห้องนำดินสอ ก่อนที่จะมีชุดการทดลองแต่ละขั้วไส้ดินสอเป็นขัดให้สะอาดด้วยสารละลายน้ำของ 0.3-0.05 นผงอลูมิเนียมบนผ้าขัดและจากนั้นการปรับสภาพของพื้นผิวทางเคมีไฟฟ้าอิเล็กโทรดินสอได้ดำเนินการที่ 1.80 V เป็นเวลา 5 นาทีใน 0.5 M อะซิเตท สารละลายบัฟเฟอร์ (pH 4.80) ที่มี 0.02 M เกลือแกง อิเล็กโทรดที่เตรียมไว้ให้แห้งในอากาศและปรับเปลี่ยนได้ทันทีโดยภาพยนตร์หลาย. 2.5 เตรียมดินสอหลายภาพยนตร์แก้ไขนำขั้วไฟฟ้า1-111P AuNPs ไคโตซาน4 ' รูปที่ 1 โครงการของไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์ไบโอเซนเซอร์. เต็มตัว 1 แสดงโครงสร้างแผนผังของไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์ไบโอเซนเซอร์ที่ใช้ในภาพยนตร์หลาย สำหรับการเตรียมความพร้อมของไบโอเซนเซอร์เอนไซม์อิเล็กไส้ดินสอทำความสะอาดครั้งแรกที่ถูกจุ่มลงไปใน 2 มิลลิลิตร 0.5% w / v แก้ปัญหากับการใช้ไคโตซานที่มีศักยภาพของ 1.5 โวลต์เป็นเวลา 5 นาที (แสดงเป็นอิเล็กโทรไส้ดินสอ CS) หลังจากขั้นตอนด้วยกระแสไฟฟ้า (i) การปรับเปลี่ยนขั้วถูกแช่อยู่ใน 500 PL ของการแก้ปัญหา AuNPs เวลา 6 ชั่วโมง (แสดงเป็น AuNPs / CS ไส้ดินสออิเล็กโทรด), (ii) ตามด้วยการดูดซับของ HRP 12 ชั่วโมง (แสดงเป็น HRP / AuNPs / CS ไส้ดินสอขั้ว) และล้างให้สะอาดInt เจ Electrochem Sci., ฉบับที่ 7, 2012 4648 ด้วยน้ำกลั่นที่จะลบบาง HRP ดูดซับนิดหน่อยซึ่งได้รับการยกย่องให้เป็นหนึ่งในชั้นของภาพยนตร์หลายขั้วแก้ไข (แสดงเป็น (HRP / AuNPs) / ไส้ดินสอ CS อิเล็กโทรด) ขั้นตอน (i) และ (ii) ซ้ำแล้วสำหรับจำนวนที่ต้องการของชั้น (แสดงเป็น (HRP / AuNPs) / ไส้ดินสอ CS อิเล็กโทรด) สำหรับการเปรียบเทียบโดยไม่ต้อง AuNPs ขั้วแก้ไขได้ดำเนินการโดยกระแสไฟฟ้า 0.5% w / v ไคโตซานกับการใช้ศักยภาพของ 1.5 โวลต์เป็นเวลา 5 นาที อิเล็กโทรดไส้ดินสอแก้ไขถูกแช่อยู่ในระดับ 2.5% v / v glutaraldehyde เป็นเวลา 20 นาที จากนั้นขั้วนี้ถูกแช่ในสารละลาย HRP 12 ชั่วโมง (แสดงเป็น HRP / Glu / CS ไส้ดินสออิเล็กโทรด) อิเล็กโทรดควรจะแช่ในค่า pH 7.00 สารละลายบัฟเฟอร์ฟอสเฟตที่ 4 'เซลเซียสจนกว่าจะใช้งานต่อไป

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2 . ทดลอง

2.1 . สารเคมี

horseradish peroxidase , ไคโตซาน , โซเดียมบอโรไฮไดรด์ , ไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์ ,
hydrogentetrachloroaurate ( III ) ( hauc14 ) และไตรโซเดียมซิเตรตที่ได้รับ จาก Sigma กลูตารัลดีไฮด์ ได้จาก fluka . สารเคมีอื่น ๆทั้งหมดของอิตเทอร์เบียมและโซลูชั่นทั้งหมดถูกเตรียมไว้ใช้น้ำกลั่น


. . เครื่องดนตรี
การตรวจวัดทางเคมีไฟฟ้าทั้งหมดได้ดำเนินการกับ metrohm เป็นนายทหารผ่านศึก ระบบ threeelectrode ประกอบด้วยดินสอตะกั่วเป็นขั้วไฟฟ้าทำงาน , agc1 AG / เป็นขั้วไฟฟ้าอ้างอิงและลวดแพลทินัมเป็นขั้วไฟฟ้าเสริม


2.3 การเตรียมอนุภาคทองระดับนาโนเมตร
เครื่องแก้วที่ใช้ในการเตรียมการทั้งหมดของ aunps สะอาดที่เตรียมสด 10 % w / v ของกรดดินประสิวสำหรับค้างคืน ให้ล้างด้วยน้ำและแห้งในอากาศ aunps ได้โดยการลดของไอออนทองลดแทน ที่ใช้ในงานนี้ aunps เตรียมตามรายงานวิธีกับการปรับเปลี่ยนเล็กน้อย [ 18 ] สั้น ๆ500 มิลลิลิตรของสารละลายที่มี ha'ic14 0.3 มม. และไตรโซเดียมซิเตรต 0.38 มม. ที่เตรียมไว้ แล้ว 1.2 ml 0.125 เมตร nabh4 สารละลายอย่างรวดเร็วเพิ่มเป็นทองโซลูชั่นภายใต้อย่างต่อเนื่องกวน . สีของสารละลายกลายเป็นสารละลายสีม่วงแดง ซึ่งพบว่า aunps ขึ้นและ

Int . J . electrochem . วิทย์ , ฉบับที่ 7 , 2012 4647
เตรียม aunps แล้วเก็บไว้ในขวดแก้วสีเข้มที่อุณหภูมิ 4 องศาเซลเซียส เพื่อการใช้งานต่อไป ผล aunps ถูกลักษณะกับ UV VIS spectroscopy ( uv1601 Shimadzu , ) และส่งกล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอนใน - 2010


2.4 . การเตรียมการ p encil ตะกั่วขั้ว
ดินสอนัก ( HB 2B 1H , 2H 3H 4H , ได้แก่ , และ , 6H ) ที่ได้รับจาก Staedtler , เยอรมนี ข้อมูลทั้งหมดมีความยาวรวม 20 เซนติเมตร และเส้นผ่าศูนย์กลาง 2.0 มม. ร่างกายของไส้ดินสอก็แน่น เคลือบด้วยพอลิเอทิลีนชนิดความหนาแน่นสูง ( HDPE ) ติดต่อไฟฟ้าได้โดย
โลหะลวดสอดเข้าไปในดินสอตะกั่ว ก่อนที่แต่ละชุดการทดลอง , ดินสอตะกั่วขั้วไฟฟ้าสะอาดขัดด้วยสารละลายสารละลายของผงอลูมินา 0.3-0.05 น. บนผ้าขัด ,แล้วปรับสภาพพื้นผิวขั้วไฟฟ้าดินสอถูกดำเนินการที่ 1.80 V เป็นเวลา 5 นาทีใน 0.5 M acetate สารละลายบัฟเฟอร์ ( pH 4.80 ) ที่มีความเข้มข้น 0.02 M . เตรียมขั้วไฟฟ้าแห้งในอากาศ และทันทีที่ดัดแปลงโดยฟิล์มหลายชั้น


2.5 การเตรียมฟิล์มหลายชั้นดัดแปลงขั้ว 1-111p ดินสอ








aunps ไคโตซาน 4 '









1 รูปรูปแบบของไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์ ไบโอเซนเซอร์ .

รูป 1 แสดงแผนผังโครงสร้างของไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์ ไบโอเซนเซอร์ขึ้นอยู่กับฟิล์มหลายชั้น สำหรับการเตรียมเอนไซม์ไบโอเซนเซอร์ก่อนทำความสะอาดขั้วไฟฟ้าจุ่มดินสอ 2 ml 0.5 % W / V สารละลายไคโตแซนที่มีการใช้ศักยภาพของ 1.5 V 5 นาที ( แทนตะกั่วเป็นขั้ว CS ดินสอ ) หลังจากที่ในขณะที่ขั้นตอน( 1 ) ไฟฟ้าแก้ไขคือ immersed ใน 500 ของโซลูชั่นที่จะ aunps 6 H ( กล่าวคือ เป็น aunps / CS ดินสอ ) , ( ii ) ตามด้วยการดูดซับของ HRP 12 H ( กล่าวคือ เป็น aunps HRP / cs / ดินสอ ) และล้างสะอาด

Int . J . electrochem . วิทย์ , ฉบับที่ 7 , 2012 1
ด้วยน้ำกลั่นเพื่อลบบางป้อแป้ดูดซับ HRP ซึ่งถือเป็นหนึ่งชั้นของชั้นฟิล์มดัดแปลงขั้ว ( แทน ( HRP / aunps ) / ขั้วนำ CS ดินสอ ) ขั้นตอนที่ ( 1 ) และ ( 2 ) แล้วซ้ำสำหรับจำนวนที่ต้องการของชั้น ( กล่าวคือเป็น ( HRP / aunps ) / ขั้วนำ CS ดินสอ ) สำหรับการเปรียบเทียบโดยไม่ aunps ดัดแปลงขั้วไฟฟ้าที่ดำเนินการโดยการเกาะ 0.5% w / v ไคโตซาน ด้วยการใช้ศักยภาพของ 1.5 V 5 นาทีแก้ไขดินสอตะกั่วขั้วเพลิน 2.5 % v / v ดี 20 นาที แล้วแช่ในสารละลายอิเล็กโทรนี้ช 12 H ( กล่าวคือเป็น HRP / cs / ซึ่งขั้วไฟฟ้า ไส้ดินสอ ) ไฟฟ้าควรแช่ pH 700 ฟอสเฟตในสารละลายบัฟเฟอร์ที่ 4 ' C จะใช้ต่อไป