2.7. Biofilm metabolic activity mea

2.7. Biofilm metabolic activity measurement
The metabolic (respiratory) activity of biofilm was determined
by using (XTT) reduction assay. Biofilm formation was done as
described above. Following incubation (24 h), the contents of each
well were removed, and wells were washed three times with
phosphate-buffered saline (PBS) to remove loosely attached cells.
The sodium salt of XTT (2,3-bis(2-methoxy-4-nitro-5-sulfophenyl)-
2H-tetrazolium-5-carboxanilide) was dissolved in PBS to 1 mg/ml
concentration, filter-sterilized and stored at 80 C. Menadione
was dissolved in acetone to 1 mM and sterilized immediately
before each measurement. Working solution of XTT/menadione
reagent was freshly prepared before each assay in ratio of 12.5:1.
Following washing, 100 ml PBS was added to each well of a 96-well
microtitre plate. 13.5 ml of XTT/menadione mixture was then added
to each well; the plate was gently shaken, then covered (in darkness)
and incubated at 37 C for 2e3 h. Following incubation, the
absorbance was measured at 490 nm. Blank well, negative and
positive controls were performed as described above. Each assay
was performed in triplicate (Chaieb et al. 2011; Pettit et al., 2005j).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.7 การวัดกิจกรรมการเผาผลาญ Biofilmกำหนดกิจกรรม (หายใจ) การเผาผลาญของ biofilmโดยใช้ทดสอบลด (XTT) สร้าง Biofilm ได้ทำเป็นอธิบายไว้ข้างต้น ต่อกกไข่ (24 ชั่วโมง), เนื้อหาของแต่ละดีออก และหลุมถูกล้าง 3 ครั้งด้วยบัฟเฟอร์ฟอสเฟตเกลือ (PBS) การเอาหลวม ๆ แนบเซลล์เกลือโซเดียมของ XTT (2,3-bis(2-methoxy-4-nitro-5-sulfophenyl)-2H-tetrazolium-5-carboxanilide) ละลายใน PBS ให้ 1 mg/mlความเข้มข้น กรองฆ่าเชื้อ และเก็บไว้ที่ 80 C. Menadioneในอะซิโตน 1 มม. และฆ่าเชื้อทันทีก่อนการวัดแต่ละ แก้ปัญหาการทำงานของ XTT/menadioneรีเอเจนต์ที่ปรุงสดใหม่ก่อนการทดสอบแต่ละสัดส่วนของ 12.5:1ต่อการซักผ้า 100 ml PBS ถูกเพิ่มไปยังแต่ละจำนวน 96-ดีแผ่น microtitre แล้วเพิ่มส่วนผสม XTT/menadione 13.5 mlไปละดี จานถูกเบา ๆ เขย่า ครอบคลุมแล้ว (ในความมืด)และได้รับการกกที่ 37 C สำหรับ 2e3 h ต่อไปนี้การบ่ม การมีวัด absorbance ที่ 490 nm ว่างดี ลบ และดำเนินการควบคุมตามที่อธิบายข้างต้นบวก ทดสอบแต่ละทำลข้อ (Chaieb et al. 2011 Pettit et al. 2005j)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.7 การวัดกิจกรรมการเผาผลาญจุลินทรีย์การเผาผลาญ (ทางเดินหายใจ) การทำงานของไบโอฟิล์มถูกกำหนดโดยใช้(XTT) การทดสอบลดลง การสร้างไบโอฟิล์มได้ทำตามที่อธิบายไว้ข้างต้น ต่อไปนี้การบ่ม (24 ชั่วโมง) เนื้อหาของแต่ละดีถูกถอดออกและหลุมถูกล้างสามครั้งด้วยน้ำเกลือฟอสเฟตบัฟเฟอร์(พีบีเอส) เพื่อขจัดเซลล์ที่แนบมาคับ. เกลือโซเดียม XTT (2,3 ทวิ (2-methoxy -4-ไนโตร-5-sulfophenyl) - 2H-tetrazolium-5-carboxanilide) ถูกละลายในพีบีเอสถึง 1 mg / ml ความเข้มข้นกรองฆ่าเชื้อและเก็บไว้ที่ 80 C? Menadione ถูกละลายในอะซีโตน 1 มิลลิและฆ่าเชื้อทันทีก่อนที่แต่ละวัด วิธีการแก้ปัญหาการทำงานของ XTT / menadione สารปรุงสดใหม่ได้ก่อนที่แต่ละการทดสอบในอัตราส่วน 12.5: 1. หลังจากการซักผ้า 100 มล. พีบีเอสถูกบันทึกอยู่ในแต่ละดีของ 96 หลุมจานmicrotitre 13.5 มิลลิลิตรผสม XTT / menadione จากนั้นก็เพิ่มให้กับแต่ละดี; แผ่นถูกเขย่าเบา ๆ ปกคลุมแล้ว (ในความมืด) และบ่มที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสสำหรับ 2e3 ชั่วโมง ต่อไปนี้การบ่มการดูดกลืนแสงวัดที่ 490 นาโนเมตร ที่ว่างเปล่าดีเชิงลบและการควบคุมในเชิงบวกได้ดำเนินการตามที่อธิบายไว้ข้างต้น ทดสอบแต่ละคนได้รับการดำเนินการในการเพิ่มขึ้นสามเท่า (Chaieb et al, 2011;.. เพอร์ตี้, et al, 2005j)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.7 . กล่าวคือกิจกรรมวัดการเผาผลาญการเผาผลาญ ( ทางเดินหายใจ ) กิจกรรมของไบโอฟิล์มมุ่งมั่นโดยใช้ ( xtt ) ลดแบคทีเรีย การสร้างไบโอฟิล์มเป็นที่อธิบายข้างต้น ต่อไปนี้บ่ม ( 24 ชั่วโมง ) เนื้อหาของแต่ละก็ถูกถอดออก และบ่อได้ซักสามครั้งด้วยเกลือฟอสเฟตบัฟเฟอร์ ( PBS ) เพื่อเอาไว้หลวมๆแนบเซลล์ปริมาณโซเดียมจากเกลือ xtt ( 2,3-bis ( 2-methoxy-4-nitro-5-sulfophenyl )2h-tetrazolium-5-carboxanilide ) ละลายใน PBS 1 มิลลิกรัม / มิลลิลิตรสมาธิ , กรองและฆ่าเชื้อที่อุณหภูมิ 80 องศาเซลเซียส menadioneละลายในอะซิโตน 1 มม. และฆ่าเชื้อทันทีก่อนการวัดแต่ละครั้ง โซลูชั่นการทำงานของ xtt / menadioneรีเอเจนต์คือการเตรียมสดก่อนแต่ละวิธี ในอัตราส่วน 12.5:1 .ต่อไปนี้ ซัก 100 ml พีบีเอส ได้เพิ่มกันของ 96 ดีmicrotitre จาน 13.5 กรัม xtt / menadione ผสมแล้วเพิ่มกัน ; จานเบาๆ เขย่า แล้วคลุม ( ความมืด )บ่มที่ 37 องศาเซลเซียส สำหรับ 2e3 . ต่อไปนี้บ่ม ,วัดค่าการดูดกลืนแสงที่ 490 nm . ว่างดี และลบการควบคุมที่ดี มีการปฏิบัติตามที่อธิบายไว้ข้างต้น ในแต่ละการทดสอบแสดงทั้งสามใบ ( chaieb et al . 2011 ; เปอ et al . , 2005j )