Elimination of RNA Contamination by

Elimination of RNA Contamination by Traditional Enzymatic Digestion Method.
RNA contamination in DNA was typically removed by RNase A and RNase T1 digestion.
22 Briefly, 2 μL of RNase T1 (25 Units/μL) and 10 μL of RNase A (10 mg/mL) were added to an aliquot of 150 μL of genomic DNA (100 μg) isolated from yeast cells, and then, the mixture was incubated at 37 °C for 6 h followed by successive extraction with phenol/chloroform (1:1, v/v) and chloroform twice,respectively.
Then, the aqueous layer was taken out, and 0.1 volume of 3 M sodium acetate buffer (pH 5.2) and 1 volume of ice cold isopropanol were added. After kept at −20 °C for 30 min, DNA was precipitated by centrifuging at 12 000 under 4 °C for 15 min. The DNA pellet was subsequently washed with 70% ethanol for three times.
The supernatant of 70% ethanol was carefully removed, and the tube was allowed to air-dry with
the lid open for 30 min.
The resultant DNA was then dissolved in Tris-HCl buffer (pH 8.0) for the following treatments.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

กำจัดการปนเปื้อนของอาร์เอ็นเอโดยวิธีการย่อยอาหารเอนไซม์ในระบบดั้งเดิม
อาร์เอ็นเอปนเปื้อนในดีเอ็นเอถูกเอาออก โดย RNase A และ RNase T1 ย่อยอาหารปกติ
22 สั้น ๆ 2 μL ของ RNase T1 (25 หน่วย/μL) และ μL 10 ของ RNase เป็น (10 mg/mL) ถูกเพิ่มเข้าไปมีส่วนลงตัวของ μL 150 ของ genomic DNA (100 μg) แยกต่างหากจากเซลล์ยีสต์ แล้ว ส่วนผสมถูก incubated ที่ 37 ° C สำหรับ 6 h ตามต่อ ๆ มาสกัดด้วยคลอโรฟอร์มวาง (1:1, v/v) และคลอโรฟอร์มสอง ตามลำดับ.
แล้ว ชั้นอควีกระเสียงออก และ 0.1 3 M โซเดียม acetate บัฟเฟอร์ (pH 5.2) และปริมาณของน้ำแข็งที่เย็น isopropanol เพิ่ม 1 หลังจากที่เก็บอยู่ใน −20 ° C สำหรับ 30 นาที ดีเอ็นเอถูกตกตะกอน ด้วย centrifuging ที่ 12 000 ต่ำกว่า 4 ° C สำหรับ 15 นาที ต่อมาถูกล้าง ด้วย 70% เอทานอลเม็ดดีเอ็นเอสำหรับสามเวลา.
supernatant ของเอทานอล 70% ถูกเอาออกอย่างระมัดระวัง และท่อได้รับอนุญาตให้ air-dry ด้วย
ฝาเปิด 30 นาที
resultant ดีเอ็นเอที่ละลายแล้วในทริสเรทติ้ง HCl บัฟเฟอร์ (pH 8.0) สำหรับการรักษาต่อไปนี้

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การกำจัดการปนเปื้อนของอาร์เอ็นเอโดยเอนไซม์ย่อยอาหารแบบดั้งเดิมวิธีการ
ปนเปื้อนของอาร์เอ็นเอใน DNA จะถูกลบออกโดยทั่วไป RNase และ RNase T1 การย่อยอาหาร
22 สั้น ๆ , 2 ไมโครลิตรของ RNase T1 (25 หน่วย / ไมโครลิตร) และ 10 ไมโครลิตรของ RNase (10 mg / ml ) ถูกเพิ่มเข้าไปใน aliquot จาก 150 ไมโครลิตรของดีเอ็นเอ (100 ไมโครกรัม) ที่แยกได้จากเซลล์ยีสต์และส่วนผสมถูกบ่มที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 6 ชั่วโมงตามด้วยการสกัดต่อเนื่องที่มีฟีนอล / คลอโรฟอร์ม (1: 1, v / โวลต์) และคลอโรฟอร์มเป็นครั้งที่สองตามลำดับ
จากนั้นชั้นน้ำถูกนำออกมาและ 0.1 ปริมาณของ 3 M โซเดียมอะซิเตทบัฟเฟอร์ (pH 5.2) และ 1 ปริมาณของน้ำแข็ง isopropanol เย็นถูกเพิ่ม หลังจากที่เก็บไว้ที่ -20 ° C เป็นเวลา 30 นาที, ดีเอ็นเอถูกตกตะกอนโดยการปั่นแยกที่ 12 000 ต่ำกว่า 4 ° C เป็นเวลา 15 นาที เม็ดดีเอ็นเอถูกล้างต่อด้วย 70% เอทานอลสำหรับสามครั้ง
ใส 70% เอทานอลจะถูกลบออกอย่างระมัดระวังและหลอดได้รับอนุญาตให้อากาศแห้งที่มี
ฝาปิดเปิดเป็นเวลา 30 นาที
ผลดีเอ็นเอก็เลือนหายไปจากนั้นใน tris- HCl บัฟเฟอร์ (pH 8.0) สำหรับการรักษาต่อไป

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การขจัดการปนเปื้อนของ RNA โดยวิธีแบบดั้งเดิมการย่อยอาหารเอนไซม์ .
ปนเปื้อนดีเอ็นเออาร์เอ็นเอในมักจะออกโดยเลสและเลส T1 การย่อยอาหาร .
22 สั้น 2 μลเลส T1 ( 25 หน่วย / μ L ) และ 10 μลเลส ( 10 mg / ml ) เพิ่มเป็นส่วนลงตัวของ 150 μ L ของ genomic DNA ( μ 100 กรัม ) แยก จากเซลล์ยีสต์แล้วส่วนผสมจะถูกบ่มที่ 37 ° C 6 H ตามต่อเนื่องการสกัดด้วยฟีนอล / คลอโรฟอร์ม ( 1 : 1 v / v ) และคลอโรฟอร์มสองครั้งตามลำดับ .
แล้วชั้นน้ำที่ถูกนำออกมาและ 0.1 หมวด 3 M โซเดียมอะซิเตตบัฟเฟอร์ pH 5.2 ) และ 1 ปริมาณของน้ำแข็งเพิ่มกระแสเย็น . หลังจากเก็บที่อุณหภูมิ 20 °− C นาน 30 นาทีดีเอ็นเอตกตะกอนโดยวรรณนาที่ 12 000 ภายใต้ 4 ° C เป็นเวลา 15 นาทีเม็ดดีเอ็นเอและการล้างด้วยแอลกอฮอล์ 70 %
3 ครั้ง ที่นำเอทานอล 70% ถูกลบออกอย่างระมัดระวัง และหลอด อนุญาตให้อากาศแห้งด้วย

ฝาเปิดเป็นเวลา 30 นาที ซึ่งเป็น DNA แล้วละลายในกรดเกลือ หรือบัฟเฟอร์ pH 8.0 ) สำหรับการรักษาต่อไปนี้