2.4. In vitro evaluation of the BT

2.4. In vitro evaluation of the BT effect on hydrogen peroxide
Concentration of H2O2 was estimated using an acellular method,
adapted from that reported by Leavey et al. [17] and optimized in
order to avoid interferences with peroxidases present in E. Briefly,
about 9 nmol/mL of H2O2 were incubated with the extract corresponding
to protein concentrations ranging from 0 to 250 mg mL
1,
for 15 min at 37 C in a final volume of 1 mL of HH buffer (Hank’s
HEPES e pH 7.4, Sigma). Controls without H2O2 (replaced by HH)
were also incubated for each protein concentration of the bacterial
extract. After adding 40 mL of 1 N HNO3, 200 mL of 10 M Iron (II)
ammonium sulfate and 100 mL of 2.5 M KSCN, the tubes were
centrifuged at 1125 g for 5 min. The absorbance in each supernatant,
reflecting the ferrithiocyanate red complexes, was
measured by spectrophotometry at 480 nm. Concentrations of
H2O2 in the samples were determined by using a standard curve
ranging from 2.5 to 20 nmol/mL. The specimens used for calibration
underwent the same process as the samples containing the protein
extract E. Data normality and variance homogeneity were checked
(QeQ plot graph and Bartlett’s test at the 0.05 level) using the
Openstat free software for window’s XP (Dr William G. Miller, Iowa
State University). A statistical analysis was performed using oneway
(protein concentration) ANOVA and the Fisher’s Protected
least significant difference a posteriori test (Statview 4.5 and
Superanova softwares for Macintosh, Abacus Concepts; p ¼ 0.05).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.4 การการประเมินผลบีทีไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์เพาะเลี้ยงความเข้มข้นของ H2O2 ที่ถูกประเมินโดยใช้วิธี acellularดัดแปลงจากที่รายงานโดย Leavey et al. [17] และเพิ่มประสิทธิภาพในสั่ง interferences ด้วย peroxidases ใน E. สั้น ๆ หลีกเลี่ยงnmol ประมาณ 9 mL ของ H2O2 ได้ incubated กับตรงแยกเพื่อความเข้มข้นของโปรตีนตั้งแต่ 0 250 mg mL 1ใน 15 นาทีที่ 37 C ในปริมาตรสุดท้ายของ 1 mL ของชชบัฟเฟอร์ (แฮงก์HEPES อีค่า pH 7.4 ซิกมา) ควบคุม โดย H2O2 (แทนที่ ด้วยชช)นอกจากนี้ยังมี incubated สำหรับแต่ละความเข้มข้นโปรตีนของแบคทีเรียแยก หลังจากเพิ่ม 40 mL 1 N HNO3, 200 mL 10 M เหล็ก (II)แอมโมเนียมซัลเฟตและ 100 มล. 2.5 เมตร KSCN หลอดได้centrifuged ที่ 1125 กรัมใน 5 นาที Absorbance ใน supernatant ละสะท้อนให้เห็นถึงสิ่งอำนวยความสะดวก ferrithiocyanate สีแดง ถูกวัด โดย spectrophotometry ที่ 480 nm ความเข้มข้นของH2O2 ในตัวอย่างถูกกำหนดโดยเส้นโค้งมาตรฐานตั้งแต่ 2.5 nmol 20 mL ไว้เป็นตัวอย่างที่ใช้สำหรับปรับเทียบประกอบไปด้วยกระบวนการเดียวกันเป็นตัวอย่างที่ประกอบด้วยโปรตีนดึงข้อมูล E. homogeneity normality และต่างได้รับการตรวจสอบ(QeQ พล็อตกราฟและทดสอบในบาร์ตเลตของระดับ 0.05) โดยใช้การซอฟแวร์ฟรี Openstat สำหรับ XP ของหน้าต่าง (Dr William G. มิลเลอร์ รัฐไอโอวารัฐมหาวิทยาลัย) ทำการวิเคราะห์ทางสถิติโดยใช้ oneway(ความเข้มข้นของโปรตีน) การวิเคราะห์ความแปรปรวนและฟิชเชอร์ของคุ้มครองความแตกต่างอย่างมีนัยสำคัญน้อยที่สุด posteriori แบบทดสอบ (Statview 4.5 และSuperanova ซอฟต์แวร์สำหรับ Macintosh แนวคิดอบาคัส p ¼ 0.05)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.4 ในการประเมินผลการเพาะเลี้ยงเนื้อเยื่อของผลกระทบใน BT ไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์
ความเข้มข้นของ H2O2 เป็นที่คาดกันโดยใช้วิธีการไอกรน,
ดัดแปลงมาจากที่รายงานโดย Leavey et al, [17] และเพิ่มประสิทธิภาพใน
การสั่งซื้อเพื่อหลีกเลี่ยงการรบกวนกับ peroxidases อยู่ในอีสั้น ๆ
ประมาณ 9 nmol / มิลลิลิตร H2O2 ถูกบ่มด้วยสารสกัดที่สอดคล้องกัน
เพื่อความเข้มข้นของโปรตีนตั้งแต่ 0-250 มิลลิกรัมมล? 1
เป็นเวลา 15 นาทีที่ 37? ซีในปริมาณสุดท้ายของ 1 มิลลิลิตรของ buffer HH (แฮงค์
HEPES อีพีเอช 7.4 ซิกม่า) การควบคุมโดยไม่ต้อง H2O2 (ถูกแทนที่ด้วย HH)
ถูกบ่มยังสำหรับแต่ละความเข้มข้นของโปรตีนของเชื้อแบคทีเรีย
สารสกัดจาก หลังจากเพิ่ม 40 มิลลิลิตร 1 N HNO3 200 มิลลิลิตร 10 M เหล็ก (II)
แอมโมเนียมซัลเฟตและ 100 มิลลิลิตร 2.5 ล้าน KSCN หลอดถูก
หมุนเหวี่ยงที่ 1125? กรัมเป็นเวลา 5 นาที การดูดกลืนแสงในสารละลายแต่ละ
สะท้อนให้เห็นถึงคอมเพล็กซ์แดง ferrithiocyanate ถูก
วัดโดย spectrophotometry ที่ 480 นาโนเมตร ความเข้มข้นของ
H2O2 ในกลุ่มตัวอย่างได้รับการพิจารณาโดยใช้เส้นโค้งมาตรฐาน
ตั้งแต่ 2.5-20 nmol / มิลลิลิตร ตัวอย่างที่ใช้ในการสอบเทียบ
ขนานกระบวนการเดียวกันกับตัวอย่างที่มีโปรตีน
สารสกัดจากอีปกติข้อมูลและความสม่ำเสมอของความแปรปรวนถูกตรวจสอบ
(QeQ กราฟพล็อตและการทดสอบบาร์ตเลตที่ระดับ 0.05) โดยใช้
Openstat ซอฟต์แวร์ฟรีสำหรับ XP หน้าต่าง (ดรวิลเลียมกรัม มิลเลอร์, ไอโอวา
มหาวิทยาลัยแห่งรัฐ) การวิเคราะห์ทางสถิติได้รับการดำเนินการโดยใช้เที่ยว
(โปรตีนเข้มข้น) ANOVA และฟิชเชอร์ได้รับการป้องกัน
อย่างน้อยแตกต่างกันอย่างมีนัยสำคัญการทดสอบ posteriori (Statview 4.5 และ
โปรแกรม Superanova สำหรับ Macintosh แนวคิด Abacus; พี¼ 0.05)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.4 . ในการประเมินผลการของบีทีมีผลต่อความเข้มข้นของไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์
H2O2 ซึ่งใช้วิธี acellular
, ดัดแปลงจากรายงานโดย leavey et al . [ 17 ] และปรับให้เหมาะสมเพื่อหลีกเลี่ยงการแทรกแซงกับเพอร์ กซิเดส
ปัจจุบันใน สั้น ๆ ,
9 nmol / มิลลิลิตร เป็นสารสกัดที่แยกสลาย
ปริมาณความเข้มข้นตั้งแต่ 0 ถึง 250 มิลลิกรัมต่อมิลลิลิตร

115 นาที ที่ 37  C ในปริมาณ 1 มิลลิลิตร สุดท้าย HH บัฟเฟอร์ ( แฮงค์
ฮีเปส E pH 7.4 Sigma ) การควบคุมโดย H2O2 ( แทนที่โดย HH )
ยังบ่มแต่ละความเข้มข้นของสารละลายโปรตีนสารสกัดจากแบคทีเรีย

หลังจากเพิ่ม 40 ml 1 N กรดดินประสิว , 200 ml 10 M เหล็ก ( II ) และ 100 ml
แอมโมเนียมซัลเฟต 2.5 M เชียล , ท่อ คือระดับที่ 1125  g
5 นาที นในแต่ละน่าน
,สะท้อนให้เห็นถึง ferrithiocyanate สีแดงเชิงซ้อนคือ
วัดโดยวิธีที่ 480 nm . ความเข้มข้นของ
H2O2 ในตัวอย่างใช้
โค้งมาตรฐานตั้งแต่ 2.5 ถึง 20 nmol / มิลลิลิตร ตัวอย่างที่ใช้สำหรับการสอบเทียบ
underwent กระบวนการเดียวกับตัวอย่างที่ประกอบด้วยโปรตีนสารสกัดจากข้อมูลการแจกแจงแบบปกติและความแปรปรวน
E
ค่ายังอยู่( qeq พล็อตกราฟและ Bartlett ทดสอบอย่างมีนัยสำคัญทางสถิติที่ระดับ 0.05 3 ) ใช้
openstat ฟรีซอฟต์แวร์สำหรับ XP ของหน้าต่าง ( ดร. วิลเลียม จี. มิลเลอร์ , ไอโอวา
State University ) เป็นการวิเคราะห์การใช้ Oneway
( ความเข้มข้นของโปรตีน ) การวิเคราะห์ความแปรปรวนทางเดียวและชาวประมงได้รับความคุ้มครอง
อย่างน้อยความแตกต่างจากผลไปสู่เหตุทดสอบ ( statview 4.5 และ
superanova โปรแกรมสำหรับ Macintosh , แนวคิด ¼ลูกคิด P 0.05 )