2. Material and methods2.1. Isolati

2. Material and methods
2.1. Isolation and identification of LAB strains

Nine commercial Şalgam samples were purchased from local markets and a total of 38 samples were taken from fermentation processes at two different Şalgam juice plants located in Mersin region. For this purpose, Şalgam juice samples were carried aseptically from factories to laboratory and 2.5 mL of the Şalgam samples were inoculated into 5 mL MRS broth (de Man Rogosa Sharpe Medium, Merck, Germany) and incubated 24 h at 30 °C. The proportion of 0.1 mL from growth cultures was transferred into MRS agar plates and incubated at the same conditions. (Harrigan & McCane, 1996). Typical colonies were randomly picked from MRS agar plates and transferred into MRS broth (Merck, Germany) medium for phenotypic characterization. These strains were identified by using 12 different biochemical tests (motility, Gram reaction, catalase test, oxidase test, CO2 production from glucose, carbohydrate (saccharose) fermentation, arginine hydrolyse, growth temperature, growth pH, salt concentration of the medium, Voges Proskauer, metil red) and named on the basis of the groups in Bergey's Manual of Systematic Bacteriology (1984). Afterward the isolates were identified with API 50 CHL test according to manufacturer instructions (Biomerieux, France).

2.2. Extraction of phenolic compounds of the lactic cultures

Strains of lactic acid bacteria were grown in duplicate in MRS broth (Merck, Germany) supplemented at 1 mM final concentration with the phenolic acid which was previously filter-sterilized (Sartorius, Germany). The 21 strains of lactic acid bacteria inoculated media were incubated at 30 °C in dark, without shaking, for 10 days. Incubated media with cells and without phenolic acids, and incubated media without cells and with the phenolic acids, were used as controls. From the supernatants, the phenolic compounds were extracted by a standard protocol involving two extraction steps with one third of the reaction volume of ethyl acetate (Curiel et al., 2010).

2.3. High-performance liquid chromatography (HPLC) analysis

Shimadzu SCL-10AVP was used for HPLC analysis equipped with the column Inertsil ODS-3.5 μm (4.6 × 250 mm). Samples of 20 μL were injected into the column and eluted with a gradient comprising for the mobile phase acetonitrile (Pump A) and 0.1% glacial acetic acid/water (Pump B) were used. The 6 phenolic acids analysed in this study were p-coumaric, o-coumaric, caffeic, ferulic, sinapic and gallic acids (Sigma, USA). The following gradient was at 86% B at 0–10 min, 74% B after 32 min, 20% B for 35–38 min, and 86% B for 40–43 min. Flow rate was 1 mL/min, and column temperature was 40 °C. Detection was performed by scanning from 200 to 540 nm and the quantitative analysis was done at 280 nm.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2. วัสดุและวิธีการ2.1 การแยกและระบุสายพันธุ์ห้องปฏิบัติการตัวอย่าง Şalgam พาณิชย์ 9 ซื้อจากตลาด และจำนวน 38 ตัวอย่างที่ได้มาจากกระบวนการหมักที่พืชน้ำ Şalgam แตกต่างกันสองใน Mersin ภูมิภาค สำหรับวัตถุประสงค์นี้ ตัวอย่างน้ำ Şalgam ได้ดำเนินการ aseptically จากโรงงานเพื่อปฏิบัติและ 2.5 mL ของ Şalgam ตัวอย่าง inoculated เป็นซุป 5 mL นาง (เดอแมน Rogosa Sharpe กลาง เมอร์ค เยอรมนี) และ incubated 24 ชมที่ 30 องศาเซลเซียส สัดส่วนของ 0.1 มล.จากวัฒนธรรมการเจริญเติบโตเป็นแผ่น MRS agar และ incubated ในเงื่อนไขเดียวกัน (Harrigan & McCane, 1996) อาณานิคมทั่วไปได้รับจาก MRS agar แผ่นแบบสุ่ม และเป็นปานกลางจำแนกไทป์นางซุป (เมอร์ค เยอรมนี) สายพันธุ์เหล่านี้ระบุ โดยใช้การทดสอบชีวเคมีต่าง ๆ 12 (motility กรัมปฏิกิริยา การทดสอบ catalase, oxidase ทดสอบ ผลิต CO2 จากการหมักคาร์โบไฮเดรต (saccharose) กลูโคส อาร์จินีน hydrolyse เจริญเติบโตอุณหภูมิ pH เติบโต ความเข้มข้นเกลือของ metil กลาง Voges Proskauer สีแดง) และตั้งชื่อตามกลุ่มใน Bergey ของคู่มือของระบบ Bacteriology (1984) หลังจากนั้นการแยกระบุกับ API 50 CHL ทดสอบตามคำแนะนำของผู้ผลิต (Biomerieux ฝรั่งเศส)2.2 การสกัดสารฟีนอวัฒนธรรมแล็กติกStrains of lactic acid bacteria were grown in duplicate in MRS broth (Merck, Germany) supplemented at 1 mM final concentration with the phenolic acid which was previously filter-sterilized (Sartorius, Germany). The 21 strains of lactic acid bacteria inoculated media were incubated at 30 °C in dark, without shaking, for 10 days. Incubated media with cells and without phenolic acids, and incubated media without cells and with the phenolic acids, were used as controls. From the supernatants, the phenolic compounds were extracted by a standard protocol involving two extraction steps with one third of the reaction volume of ethyl acetate (Curiel et al., 2010).2.3. High-performance liquid chromatography (HPLC) analysisShimadzu SCL-10AVP was used for HPLC analysis equipped with the column Inertsil ODS-3.5 μm (4.6 × 250 mm). Samples of 20 μL were injected into the column and eluted with a gradient comprising for the mobile phase acetonitrile (Pump A) and 0.1% glacial acetic acid/water (Pump B) were used. The 6 phenolic acids analysed in this study were p-coumaric, o-coumaric, caffeic, ferulic, sinapic and gallic acids (Sigma, USA). The following gradient was at 86% B at 0–10 min, 74% B after 32 min, 20% B for 35–38 min, and 86% B for 40–43 min. Flow rate was 1 mL/min, and column temperature was 40 °C. Detection was performed by scanning from 200 to 540 nm and the quantitative analysis was done at 280 nm.

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2. วัสดุและวิธีการ
2.1 การแยกและบัตรประจำตัวของสายพันธุ์ LAB เก้าตัวอย่างŞalgamเชิงพาณิชย์ที่ซื้อมาจากตลาดในประเทศและทั้งหมด 38 ตัวอย่างถูกนำมาจากกระบวนการหมักที่สองŞalgamพืชน้ำผลไม้ที่แตกต่างกันอยู่ในภูมิภาคเมอร์ซิ เพื่อจุดประสงค์นี้Şalgamตัวอย่างน้ำผลไม้ได้ดำเนินการปลอดเชื้อจากโรงงานไปยังห้องปฏิบัติการและ 2.5 มิลลิลิตรตัวอย่างŞalgamถูกเชื้อเป็น 5 มิลลิลิตรน้ำซุป MRS (เดผู้ชาย Rogosa ชาร์ปขนาดกลาง, เมอร์ค, เยอรมนี) และบ่ม 24 ชั่วโมงที่อุณหภูมิ 30 องศาเซลเซียส สัดส่วนของ 0.1 มิลลิลิตรจากวัฒนธรรมการเจริญเติบโตที่ถูกโอนเข้ามาในจานอาหารเลี้ยงเชื้อ MRS และบ่มที่เงื่อนไขเดียวกัน (Harrigan และ McCane, 1996) อาณานิคมทั่วไปถูกเลือกโดยการสุ่มจากจานอาหารเลี้ยงเชื้อ MRS และโอนเข้ามาในน้ำซุป MRS (เมอร์ค, เยอรมนี) สื่อกลางในลักษณะฟีโนไทป์ สายพันธุ์เหล่านี้ถูกระบุโดยใช้ 12 การทดสอบทางชีวเคมีที่แตกต่างกัน (การเคลื่อนไหวของปฏิกิริยาแกรมทดสอบ catalase ทดสอบ oxidase ผลิต CO2 จากกลูโคสคาร์โบไฮเดรต (saccharose) หมักสลาย arginine อุณหภูมิการเจริญเติบโตของค่า pH การเจริญเติบโตของความเข้มข้นของเกลือของกลาง Voges Proskauer แดง metil) และตั้งชื่อบนพื้นฐานของกลุ่มในคู่มือการใช้งาน Bergey ของแบคทีเรียระบบนี้ (1984) ต่อจากนั้นสายพันธุ์ที่ถูกระบุด้วย API 50 CHL ทดสอบตามคำแนะนำของผู้ผลิต (Biomerieux ฝรั่งเศส). 2.2 การสกัดสารฟีนอลของวัฒนธรรมแลคติกสายพันธุ์ของเชื้อแบคทีเรียกรดแลคติกที่ถูกปลูกในที่ซ้ำกันในน้ำซุป MRS (เมอร์ค, เยอรมนี) เสริม ณ วันที่ 1 มิลลิความเข้มข้นสุดท้ายกับกรดฟีนอลซึ่งก่อนหน้านี้ได้รับการกรองผ่านการฆ่าเชื้อ (ซาร์โทเรีย, เยอรมนี) 21 สายพันธุ์ของเชื้อแบคทีเรียกรดแลคติกเชื้อสื่อถูกบ่มที่อุณหภูมิ 30 องศาเซลเซียสในที่มืดโดยไม่ต้องเขย่าเป็นเวลา 10 วัน บ่มสื่อที่มีเซลล์และไม่มีกรดฟีนอลและบ่มสื่อโดยไม่มีเซลล์และกรดฟีนอลที่ถูกนำมาใช้เป็นตัวควบคุม จาก supernatants สารประกอบฟีนอลที่ถูกสกัดโดยโปรโตคอลมาตรฐานที่เกี่ยวข้องกับขั้นตอนที่สองกับการสกัดหนึ่งในสามของปริมาณการเกิดปฏิกิริยาของเอทิลอะซิเตท (Curiel et al., 2010). 2.3 ที่มีประสิทธิภาพสูงของเหลว chromatography (HPLC) การวิเคราะห์Shimadzu SCL-10AVP ถูกนำมาใช้สำหรับการวิเคราะห์ HPLC พร้อมกับคอลัมน์ Inertsil ODS-3.5 ไมครอน (4.6 × 250 มิลลิเมตร) ตัวอย่าง 20 ไมโครลิตรถูกฉีดเข้าไปในคอลัมน์และชะที่มีการไล่ระดับสีประกอบไปด้วยสำหรับเฟสเคลื่อนที่ acetonitrile (ปั๊ม A) และ 0.1% น้ำแข็งกรดอะซิติก / น้ำ (ปั๊ม B) ถูกนำมาใช้ 6 กรดฟีนอลวิเคราะห์ในการศึกษาครั้งนี้มี P-coumaric, o-coumaric, caffeic, ferulic กรด sinapic และฝรั่งเศส (ซิกม่าสหรัฐอเมริกา) ลาดต่อไปนี้เป็นที่ B 86% ที่ 0-10 นาที, B 74% หลังจาก 32 นาที, 20% สำหรับ B 35-38 นาทีและ 86% สำหรับ B 40-43 นาที อัตราการไหล 1 มิลลิลิตร / นาทีและอุณหภูมิคอลัมน์เป็น 40 ° C การตรวจสอบได้ดำเนินการโดยการสแกน 200-540 นาโนเมตรและการวิเคราะห์เชิงปริมาณได้ทำที่ 280 นาโนเมตร