Seafood can pose a public health co

Seafood can pose a public health concern to consumers. It is often consumed raw and may be contaminated with several foodborne pathogens. In order to guarantee the safety of seafood, real-time polymerase chain reaction (PCR) protocols may be used as these enable results to be provided within 24 h.

The first goal of our work was to develop real-time PCR protocols enabling the detection of six foodborne pathogens that may be present in seafood products (Campylobacter jejuni, Campylobacter coli, enterohemorrhagic Escherichia coli, Salmonella spp., Vibrio parahaemolyticus, and Vibrio vulnificus). The corresponding gene targets were: 50S/VS1, rfbE, ttr, tlh, and vvp. A multiplex PCR was also developed to detect the virulence genes of V. parahaemolyticus: tdh and trh. A total of 420 bacterial strains belonging to four different genera/strains were used in this study. Sensitivity and specificity were always 100%, except in the case of Salmonella spp., where three strains were not detected by our PCR protocols.

The second objective of our work was to assess the detection limit of our real-time PCR protocols on artificially contaminated seafood products (raw shrimps, cooked shrimps, and raw mussels), purchased in public stores. Six different levels of contamination were assayed in four replicates for each matrix. The real-time PCR protocols enabled a better level of detection than the ISO methods, except for Salmonella in raw shrimps and for V. vulnificus in shrimps (raw and cooked). The estimated level of detection was between 1 and 47 cfu/25 g sample for the ISO norms and between 1 and 315 cfu/25 g sample for the real-time PCR protocols tailored in our work.

The real-time PCRs developed in our work allowed for good selectivity, sensitivity, and specificity. The sensitivity on seafood products was estimated at a level of 100%, except for Salmonella (97%). In the spiking assays, the levels of detection were lower with the real-time PCR protocol than those obtained with the ISO method. This was not the case for V. vulnificus in raw and cooked shrimps and for Salmonella in raw shrimps.

These real-time PCR protocols appear to be good alternative methods for surveillance of seafood products to ensure the absence of foodborne pathogens.

One additional conclusion is that laboratories have to use enrichment media that are compatible with those recommended by ISO standards. This may facilitate the isolation of the pathogen if the real-time PCR protocol gives a suspect positive signal during the first step of the seafood analysis.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

อาหารทะเลสามารถก่อให้เกิดปัญหาสาธารณสุขให้กับผู้บริโภค มันมักจะใช้วัตถุดิบ และอาจปนเปื้อนกับ foodborne หลายโรค เพื่อรับประกันความปลอดภัยของอาหารทะเล ปฏิกิริยาลูกโซ่พอลิเมอเรสแบบเรียลไทม์ โปรโตคอล (PCR) อาจใช้เป็นเหล่านี้ให้ผลได้ภายใน 24 ชมเป้าหมายแรกของการทำงานของเราคือการ พัฒนาโปรโตคอ PCR แบบเรียลไทม์ที่เปิดใช้งานการตรวจพบโรค foodborne หกที่มีอยู่ในอาหารทะเลผลิตภัณฑ์ (Campylobacter jejuni, Campylobacter coli, enterohemorrhagic Escherichia coli โอซัล parahaemolyticus ต่อ และผล vulnificus) ยีนเป้าหมายสอดคล้องกันถูก: 50S/VS1, rfbE, ttr, tlh และ vvp ยังกล่าวยัง multiplex PCR เพื่อตรวจหายีน virulence ของ V. parahaemolyticus: tdh และ trh จำนวน 420 แบคทีเรียสี่ต่างสกุล/สายพันธุ์ของสายพันธุ์ที่ใช้ในการศึกษานี้ ความไวและ specificity ได้เสมอ 100% ยกเว้นในกรณีที่สายโอ ที่สามสายพันธุ์ไม่พบ โดยโปรโตคอลของ PCRวัตถุประสงค์ที่สองของงานเพื่อ ประเมินจำนวนของโพรโทคอ PCR แบบเรียลไทม์บนเหือดปนเปื้อนผลิตภัณฑ์อาหารทะเล (กุ้งดิบ กุ้งสุก และดิบหอยแมลงภู่), ซื้อในร้านค้าสาธารณะตรวจสอบได้ 6 ระดับการปนเปื้อนได้ assayed ในสี่เหมือนกับในเมทริกซ์แต่ละ โพรโทคอลที่ PCR แบบเรียลไทม์เปิดใช้งานการตรวจหาระดับดีกว่าวิธีมาตรฐาน ISO ยกเว้นซัลในกุ้งดิบ และสำหรับ V. vulnificus ในกุ้ง (ดิบ และสุก) ระดับการประเมินตรวจสอบได้ ระหว่าง 47 และ 1 อย่าง cfu/25 g สำหรับบรรทัดฐาน ISO และระหว่าง 1 อย่าง cfu/25 g 315 สำหรับโพรโทคอ PCR แบบเรียลไทม์ที่เหมาะในการทำงานของเราPCRs แบบเรียลไทม์ที่ได้รับการพัฒนาในการทำงานของเราได้ใวดี ไว และ specificity ความไวในผลิตภัณฑ์อาหารทะเลได้ประมาณระดับ 100% ยกเว้นซัล (97%) ใน spiking assays ระดับของการตรวจสอบถูกกว่า ด้วยโพรโทคอล PCR แบบเรียลไทม์ที่ได้รับกับวิธีมาตรฐาน ISO นี่ไม่ใช่กรณี V. vulnificus ในกุ้ง กุ้ง และซัลในกุ้งดิบโพรโทคอเหล่านี้ PCR แบบเรียลไทม์จะ มีวิธีอื่นที่ดีสำหรับรักษาความปลอดภัยของผลิตภัณฑ์อาหารทะเลเพื่อให้การขาดงานของ foodborne โรคหนึ่งเพิ่มเติมสรุปได้ว่า ห้องปฏิบัติมีการใช้สื่อที่โดดเด่นที่เข้ากันได้กับแนะนำมาตรฐาน ISO นี้อาจช่วยแยกของการศึกษาถ้าโพรโทคอล PCR แบบเรียลไทม์ให้สัญญาณบวกสงสัยในขั้นตอนแรกของการวิเคราะห์อาหาร

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

อาหารทะเลสามารถก่อให้เกิดสุขภาพความกังวลของผู้บริโภค มันมักจะบริโภคดิบ และอาจปนเปื้อนด้วยเชื้อโรคหลายชนิด อาหารเป็นพิษ . เพื่อรับประกันความปลอดภัยของอาหารทะเลแบบปฏิกิริยาลูกโซ่โพรโทคอลนี้อาจใช้เป็นเหล่านี้ช่วยให้มีผลให้ภายใน 24 ชม.

เป้าหมายแรกของงานของเราคือเพื่อพัฒนาโปรโตคอลแบบเรียลไทม์ซึ่งช่วยให้ตรวจจับการหกเชื้อโรคอาหารเป็นพิษที่อาจมีอยู่ในผลิตภัณฑ์อาหารทะเล ( รวมทั้งเชื้อ Escherichia coli , enterohemorrhagic รวมทั้ง , Escherichia coli , Salmonella spp . , Vibrio parahaemolyticus และ Vibrio vulnificus ) เป้าหมายที่ 1 : 50 / vs1 ยีน rfbe tlh TTR , , , , และ vvp .เป็นเทคนิค multoplex PCR ถูกพัฒนาขึ้นเพื่อตรวจสอบความรุนแรงของยีน tdh และ trh : tdh . ทั้งหมด 420 แบคทีเรียที่แตกต่างกันสี่สกุล / สายพันธุ์ ที่ใช้ในการศึกษาครั้งนี้ ความไวและความจำเพาะ 100% เสมอ ยกเว้นในกรณีของ Salmonella spp . , ที่ 3 สายพันธุ์ตรวจไม่พบโดยโปรโตคอล PCR ของเรา

วัตถุประสงค์ที่สองของงานของเราคือเพื่อประเมินขีดจำกัดของโปรโตคอล PCR แบบเรียลไทม์บนเทียมปนเปื้อนผลิตภัณฑ์อาหารทะเล ( กุ้งดิบ , กุ้งสุกและดิบ , หอย ) ที่ซื้อในร้านค้าสาธารณะ หกระดับที่แตกต่างกันของการปนเปื้อนเป็นปริมาณ 4 ซ้ำแต่ละเมทริกซ์ โปรโตคอล PCR แบบเรียลไทม์ เปิดใช้งานได้ดีกว่าระดับการตรวจสอบ ISO วิธีการยกเว้นเชื้อซัลโมเนลลาในกุ้งดิบและ V . vulnificus ในกุ้งดิบและสุก ) ระดับของการประมาณอยู่ระหว่าง 1 และ 47 CFU / g จำนวน 25 ISO มาตรฐาน และระหว่าง 1 และ 315 CFU / 25 กรัมตัวอย่างเรียลไทม์พีซีอาร์โปรโตคอลที่เหมาะในการทำงานของเรา pcrs

เวลาพัฒนางานของเราให้ดี เลือก ความไว และความจำเพาะ .ความไวในผลิตภัณฑ์อาหารทะเลประมาณที่ระดับ 100 เปอร์เซ็นต์ ยกเว้นแซลโมเนลลา ( 97 ) ในเลือดผิดปกติ ระดับของการลดลงด้วยโปรโตคอล PCR แบบเรียลไทม์ มากกว่าผู้ที่ได้รับกับ ISO ด้วย กรณีนี้ไม่ได้สำหรับ V . vulnificus ดิบและสุก กุ้ง และซาลโมเนลลาในกุ้งดิบ

เรียลไทม์พีซีอาร์โปรโตคอลเหล่านี้ปรากฏเป็นวิธีการทางเลือกที่ดีสำหรับการเฝ้าระวังผลิตภัณฑ์อาหารทะเลเพื่อให้แน่ใจว่าไม่มีเชื้อโรคอาหารเป็นพิษ

เพิ่มเติม สรุป คือ ห้องปฏิบัติการต้องใช้สื่อเสริมที่เข้ากันได้กับผู้ที่แนะนำโดยมาตรฐาน ISOนี้จะอำนวยความสะดวกในการแยกเชื้อหากโปรโตคอล PCR แบบเรียลไทม์ให้สงสัยบวกสัญญาณในระหว่างขั้นตอนแรกของการวิเคราะห์ อาหารทะเล