The WC preparation of recombinant E

The WC preparation of recombinant E. coli with and without
IPTG induction, and the recombinant S-layer protein preparation
were separated on a 12% SDS-PAGE and Western blot was then
performed according to Poobalane [31] with modifications using
an anti-histidine-tag antibody, which can bind to the histidinetag
attached to the S-layer protein. Briefly, after electroblotting
the gels onto a nitrocellulose membrane (ATTO Co., Tokyo, Japan),
the membranes were blocked with casein, and incubated with an
anti-histidine-tag antibody (GE life science, Buckinghamshire, UK)
diluted 1:6000 in TBS for 1 h.Mouse anti-rabbit conjugated to IgGalkaline
phosphatase (Promega, Madison WI, USA) was used at a
concentration of 1:7500 and incubated for 1 h. The reaction was
developed using 5-bromo-4-chloro-3-indolyl phosphate/nitro blue
tetrazolium (BCIP-NBT) alkaline phosphatase substrate (1 tablet
dissolved in 10 ml of double distilled water, Sigma–Aldrich Co, St.
Louis, MO, USA).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

การจัดเตรียมสุขา recombinant E. coli มี และไม่มีเหนี่ยวนำ IPTG และการเตรียมโปรตีนชั้น S recombinantถูกแยกจากกันใน 12% SDS หน้าและตะวันตกได้คืนในตาแล้วปฏิบัติตาม Poobalane [31] กับการปรับเปลี่ยนโดยใช้แอนติบอดีที่ต่อต้าน-histidine-แท็ก ซึ่งสามารถผูกกับ histidinetagกับโปรตีนชั้น S หลังจาก electroblotting สั้น ๆเจไปเยื่อ nitrocellulose (ATTO Co. โตเกียว ญี่ปุ่น),สารถูกบล็อค ด้วยเคซีน และ incubated ด้วยการแอนติบอดีต่อต้าน-histidine-แท็ก (GE วิทยาศาสตร์ บักกิงแฮมเชอร์ อังกฤษ)1:6000 แตกออกใน TBS ใน 1 h.Mouse ป้องกันกระต่ายกลวงเพื่อ IgGalkalineฟอสฟาเตส (Promega เมดิสัน WI สหรัฐอเมริกา) ถูกใช้ในการความเข้มข้นของ 1:7500 และ incubated สำหรับ 1 h ปฏิกิริยาพัฒนาโดยใช้ 5-bromo-4-chloro-3-indolyl ฟอสเฟต/nitro สีน้ำเงินพื้นผิวของอัลคาไลน์ฟอสฟาเตส (BCIP-เอ็นบีที) tetrazolium (1 เม็ดละลายใน 10 ml คู่น้ำกลั่น บริษัทซิก-Aldrich เซนต์Louis, MO สหรัฐอเมริกา)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ในการจัดทำห้องสุขาของ recombinant เชื้อ E. coli
ที่มีและไม่มีการเหนี่ยวนำIPTG และ recombinant เตรียมโปรตีน
S-ชั้นถูกแยกออกบน12% SDS-PAGE
และดวงตะวันจากนั้นก็ดำเนินการตามPoobalane [31]
มีการปรับเปลี่ยนการใช้ต้านฮิสทิดีแอนติบอดี -tag ซึ่งสามารถผูกกับ histidinetag
ที่แนบมากับโปรตีน S-ชั้น สั้น ๆ หลังจาก electroblotting
เจลลงบนเมมเบรนไนโตรเซลลูโลส (ATTO Co. , กรุงโตเกียวประเทศญี่ปุ่น),
เยื่อถูกบล็อกด้วยเคซีนและบ่มกับแอนติบอดีต่อต้านฮิสติดีนแท็ก (GE วิทยาศาสตร์เพื่อชีวิตเหมือนเดิมสหราชอาณาจักร) เจือจาง 1: 6,000 ใน TBS 1 h.Mouse ต่อต้านกระต่ายผันไป IgGalkaline phosphatase (Promega เมดิสันวิสคอนซินสหรัฐอเมริกา) ถูกนำมาใช้ในความเข้มข้น1: 7500 และบ่มเป็นเวลา 1 ชั่วโมง ปฏิกิริยาที่ได้รับการพัฒนาโดยใช้ 5 โบรโม-4-chloro-3-indolyl ฟอสเฟต / ไนโตรฟ้า tetrazolium (BCIP-NBT) พื้นผิวด่าง phosphatase (1 แท็บเล็ตที่ละลายใน10 ml ของน้ำกลั่นคู่ Sigma-Aldrich Co, เซนต์หลุยส์MO, USA)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การเตรียมเซลล์ E . coli ที่ห้องที่มีและไม่มี
เหนี่ยวนำเข้ และรีคอมบิแนนท์โปรตีน s-layer การเตรียม
แยกกันบน SDS-PAGE และ Western blot แล้ว 12 %
) ตาม poobalane [ 31 ] กับการปรับเปลี่ยนใช้
เมื่อแท็กแอนติบอดีป้องกัน ซึ่งสามารถผูกกับ histidinetag
ติดกับ s-layer โปรตีน หลังจาก electroblotting
สั้น ๆเจลลงบนเมมเบรนไนโตรเซลลูโลส ( อัตโต Co . , โตเกียว , ญี่ปุ่น ) ,
เยื่อที่ถูกบล็อกกับเคซีนและบ่มด้วยแอนติบอดีต่อต้าน
เมื่อแท็ก ( ชีวิต GE วิทยาศาสตร์ , เหมือนเดิม , UK )
4 1:6000 ใน TBS เป็นเวลา 1 ชั่วโมง เพื่อป้องกันและ iggalkaline เมาส์กระต่าย
ฟอสฟาเตส ( promega Madison WI , สหรัฐอเมริกา ) ใช้ที่ความเข้มข้นของ 1:7500
บ่มเป็นเวลา 1 ชั่วโมงปฏิกิริยา
พัฒนาโดยใช้ 5-bromo-4-chloro-3-indolyl ฟอสเฟต / Nitro tetrazolium สีฟ้า
( bcip-nbt ) อัลคาไลน์ ฟอสฟาเตส ( (
1 เม็ดละลายใน 10 ml เพิ่มน้ำกลั่น ซิกม่า – อัลดริช Co , St .
หลุยส์ โม สหรัฐอเมริกา )