- ข้อความ
- ประวัติศาสตร์
Culture medium (Martin broth, a sel
Culture medium (Martin broth, a selective medium for fungi)
was made by combining 1 g KH2PO4, 0.5 g MgSO4·7H2O, 10 g glucose,
and 10 g peptone in 1 L of distilled–deionized water for liquid
shake culture. For plate culture, 17 g/L agar was added to the Martin
broth liquid culture solution. The two culture media were used for
isolating fungi from wood pieces. Growths of bacteria and actinomyces
were restricted in the two culture media, while fungi were
influenced rarely. Several fungi were recovered, but specific genera
from these have not been defined. The isolation of fungi in brief
was as follows: all of the equipments and containers were sterilized,
and the entire experiment procedures were carried out under
aseptic conditions. Initially, the white colony on wood pieces was
selected and streaked with a sterilized loop, and then selective incubation
was performed by the plate culture at 28 ◦C for 3 days to
develop the new colony. Subsequently, the new white colony was
selected for preparing suspension solution with sterilized water,
which was pipetted for further culture by spread plate method.
Several of these white colonies were prepared for morphological
study. The colony with white mycelium with abundant mycelia
and plenty of conidiophores in the culture solution was selected.
The fungi thus obtained (CW-1) were inoculated in 500mL conical
flask containing 200mL culture solutions. After 3 days, the culture
solution with fungi was divided into three conical flasks, and
200mL fresh culture solution was added to each flask. After three
cycles, fungal biomass were collected from the culture solution,
and washed with distilled–deionized water to remove the residue
of the culture solution. The clean fungal biomass was oven-dried
at 60 ◦C for 48 h. The dry fungal biomass was pulverized and then
passed through a 0.154mm sieve for use. On the other hand, some
live fungal biomass was used for further amplification culture, and
prepared for biosorption and biodegradation experiment.
2.2. Characterization of white-rot fungi
Elemental (C, H, N) analyses of the fungal biomass were conducted
using an EA 112CHNelemental analyzer (Thermo Finnigan).
FTIR spectra were recorded in the 4000–400cm−1 region for a KBrpellet
by a Nicolet FTIR spectrophotometer (model 560) with a
resolution of 1.0cm−1.
2.3. Batch sorption experiment
Five PAHs (naphthalene, acenaphthene, fluorene, phenanthrene
and pyrene) were chosen as model sorbates due to their prevailing
presence in environments. The selected properties of the PAHs are
presented in Table 1. All the single-solute sorption isotherms by
white-rot fungi (CW-1) were obtained using a batch equilibration
technique described elsewhere [23]. In brief, initial concentrations
ranged from 0.20 to 25 mg/L for naphthalene, from 0.002
to 2.5 mg/L for acenaphthene, from 0.008 to 1.7 mg/L for fluorene,
from 0.001 to 1mg/L for phenanthrene and from 0.0002 to
0.1 mg/L for pyrene. Each isotherm consisted of 10 concentration
points; each point, including the control and calibration, was run
in duplicate. The background solution comprised 0.01 mol/L CaCl2,
and 200 mg/L NaN3 to inhibit the biodegradation of the solution.
The 8-mL vials were filled with a sorbate solution to minimize
the headspace volumes of vials and sealed with aluminum foillined
Teflon screw caps to avoid evaporation of sorbate, and then
agitated in the dark for 3 days at 25±0.5 ◦C to reach apparent equilibrium.
The solution was separated by centrifugation at 4000rpm
for 15 min. The equilibrium concentrations were measured using
a high performance liquid chromatography (HPLC, Agilent 1200)
with a 4.6mm×150mm reverse phase XDB-C18 column and a
fluorescence detector (FLD) using acetonitrile–water (v:v, 90/10)
as the mobile phase at a flow rate of 1mL/min. The individual
excitation wavelengths of naphthalene, acenaphthene, fluorene,
phenanthrene and pyrene were 240, 240, 220, 244 and 237 nm,
while the respective emission wavelengths were 360, 360, 315, 360
and 385 nm. Because of minimal sorption by the vials, and negligible
losses by evaporation, biodegradation and photodegradation,
the sorbed amount was calculated by mass difference between
nominal concentration without sorbent and with sorbent in aqueous
solutions.
All competitive sorption experiments of phenanthrene and
pyrene were conducted at 25±0.5 ◦C. Bi-solute sorption experiments
included sorption of pyrene with 0.5 mg/L phenanthrene as
a co-solute and sorption of phenanthrene with 0.05 mg/L pyrene
as a co-solute. The remaining procedures of the competitive sorption
experiment were performed the same way as described for
single-solute sorption experiments.
2.4. Biosorption and biodegradation experiment
A 4-day culture of white-rot fungi (CW-1) obtained from pure
culture grown in about 200mL of Martin broth was homogenized
in the sterilized conical flask of 500 mL, and was used for inoculating.
Five groups were designed: (i) Martin broth without the
fungi was used as blank control; (ii) heat-killed fungi +Martin
broth, was used as control to study the effect of Martin broth
(in contrast to heat-killed fungi in aqueous solutions of the batch
sorption experiment); (iii) live fungi +Martin broth (total nutrient
solution); (iv) live fungi + sterilized water (without nutrient); and
(v) live fungi +Martin broth without glucose. These experimental
groups were used to investigate the contributions of biosorption
and biodegradation to the removal of PAHs under different nutrient
conditions. The 20-mL solution with the concentrations of 1.0 mg/L
phenanthrene and 0.1 mg/L pyrene were added to the 40-mL vials.
Replicate samples were prepared for each group, including three
experimental groups and two controls. After the addition of solution,
the 40-mL vials were sealed with aluminum foil-lined Teflon
screw caps to avoid sorbate’s evaporation, and then agitated in the
dark for 7 days at 25±0.5 ◦C with aeration for 2min each day. After
7-day of culture, the vials were centrifuged at 4000rpm for 15 min.
The supernatant was removed and diluted with CH3CN (1:1), and
the residual PAHs in the solution was detected by HPLC–FLD. Then
the solution in the vials was decanted as much as possible, and the
residual PAHs in fungal biomass were extracted by ultrasonication
for 30 min with a 10mLmixture of acetone and hexane (1:1, v:v) for
3 successive extractions. The extracts were pooled and evaporated
to almost dry using rotary evaporator and re-dissolved in 5mL of
hexane, followed by a clean-up procedure through a 2.5-g silica
gel column with a 15mL mixture of hexane and dichloromethane
was made by combining 1 g KH2PO4, 0.5 g MgSO4·7H2O, 10 g glucose,
and 10 g peptone in 1 L of distilled–deionized water for liquid
shake culture. For plate culture, 17 g/L agar was added to the Martin
broth liquid culture solution. The two culture media were used for
isolating fungi from wood pieces. Growths of bacteria and actinomyces
were restricted in the two culture media, while fungi were
influenced rarely. Several fungi were recovered, but specific genera
from these have not been defined. The isolation of fungi in brief
was as follows: all of the equipments and containers were sterilized,
and the entire experiment procedures were carried out under
aseptic conditions. Initially, the white colony on wood pieces was
selected and streaked with a sterilized loop, and then selective incubation
was performed by the plate culture at 28 ◦C for 3 days to
develop the new colony. Subsequently, the new white colony was
selected for preparing suspension solution with sterilized water,
which was pipetted for further culture by spread plate method.
Several of these white colonies were prepared for morphological
study. The colony with white mycelium with abundant mycelia
and plenty of conidiophores in the culture solution was selected.
The fungi thus obtained (CW-1) were inoculated in 500mL conical
flask containing 200mL culture solutions. After 3 days, the culture
solution with fungi was divided into three conical flasks, and
200mL fresh culture solution was added to each flask. After three
cycles, fungal biomass were collected from the culture solution,
and washed with distilled–deionized water to remove the residue
of the culture solution. The clean fungal biomass was oven-dried
at 60 ◦C for 48 h. The dry fungal biomass was pulverized and then
passed through a 0.154mm sieve for use. On the other hand, some
live fungal biomass was used for further amplification culture, and
prepared for biosorption and biodegradation experiment.
2.2. Characterization of white-rot fungi
Elemental (C, H, N) analyses of the fungal biomass were conducted
using an EA 112CHNelemental analyzer (Thermo Finnigan).
FTIR spectra were recorded in the 4000–400cm−1 region for a KBrpellet
by a Nicolet FTIR spectrophotometer (model 560) with a
resolution of 1.0cm−1.
2.3. Batch sorption experiment
Five PAHs (naphthalene, acenaphthene, fluorene, phenanthrene
and pyrene) were chosen as model sorbates due to their prevailing
presence in environments. The selected properties of the PAHs are
presented in Table 1. All the single-solute sorption isotherms by
white-rot fungi (CW-1) were obtained using a batch equilibration
technique described elsewhere [23]. In brief, initial concentrations
ranged from 0.20 to 25 mg/L for naphthalene, from 0.002
to 2.5 mg/L for acenaphthene, from 0.008 to 1.7 mg/L for fluorene,
from 0.001 to 1mg/L for phenanthrene and from 0.0002 to
0.1 mg/L for pyrene. Each isotherm consisted of 10 concentration
points; each point, including the control and calibration, was run
in duplicate. The background solution comprised 0.01 mol/L CaCl2,
and 200 mg/L NaN3 to inhibit the biodegradation of the solution.
The 8-mL vials were filled with a sorbate solution to minimize
the headspace volumes of vials and sealed with aluminum foillined
Teflon screw caps to avoid evaporation of sorbate, and then
agitated in the dark for 3 days at 25±0.5 ◦C to reach apparent equilibrium.
The solution was separated by centrifugation at 4000rpm
for 15 min. The equilibrium concentrations were measured using
a high performance liquid chromatography (HPLC, Agilent 1200)
with a 4.6mm×150mm reverse phase XDB-C18 column and a
fluorescence detector (FLD) using acetonitrile–water (v:v, 90/10)
as the mobile phase at a flow rate of 1mL/min. The individual
excitation wavelengths of naphthalene, acenaphthene, fluorene,
phenanthrene and pyrene were 240, 240, 220, 244 and 237 nm,
while the respective emission wavelengths were 360, 360, 315, 360
and 385 nm. Because of minimal sorption by the vials, and negligible
losses by evaporation, biodegradation and photodegradation,
the sorbed amount was calculated by mass difference between
nominal concentration without sorbent and with sorbent in aqueous
solutions.
All competitive sorption experiments of phenanthrene and
pyrene were conducted at 25±0.5 ◦C. Bi-solute sorption experiments
included sorption of pyrene with 0.5 mg/L phenanthrene as
a co-solute and sorption of phenanthrene with 0.05 mg/L pyrene
as a co-solute. The remaining procedures of the competitive sorption
experiment were performed the same way as described for
single-solute sorption experiments.
2.4. Biosorption and biodegradation experiment
A 4-day culture of white-rot fungi (CW-1) obtained from pure
culture grown in about 200mL of Martin broth was homogenized
in the sterilized conical flask of 500 mL, and was used for inoculating.
Five groups were designed: (i) Martin broth without the
fungi was used as blank control; (ii) heat-killed fungi +Martin
broth, was used as control to study the effect of Martin broth
(in contrast to heat-killed fungi in aqueous solutions of the batch
sorption experiment); (iii) live fungi +Martin broth (total nutrient
solution); (iv) live fungi + sterilized water (without nutrient); and
(v) live fungi +Martin broth without glucose. These experimental
groups were used to investigate the contributions of biosorption
and biodegradation to the removal of PAHs under different nutrient
conditions. The 20-mL solution with the concentrations of 1.0 mg/L
phenanthrene and 0.1 mg/L pyrene were added to the 40-mL vials.
Replicate samples were prepared for each group, including three
experimental groups and two controls. After the addition of solution,
the 40-mL vials were sealed with aluminum foil-lined Teflon
screw caps to avoid sorbate’s evaporation, and then agitated in the
dark for 7 days at 25±0.5 ◦C with aeration for 2min each day. After
7-day of culture, the vials were centrifuged at 4000rpm for 15 min.
The supernatant was removed and diluted with CH3CN (1:1), and
the residual PAHs in the solution was detected by HPLC–FLD. Then
the solution in the vials was decanted as much as possible, and the
residual PAHs in fungal biomass were extracted by ultrasonication
for 30 min with a 10mLmixture of acetone and hexane (1:1, v:v) for
3 successive extractions. The extracts were pooled and evaporated
to almost dry using rotary evaporator and re-dissolved in 5mL of
hexane, followed by a clean-up procedure through a 2.5-g silica
gel column with a 15mL mixture of hexane and dichloromethane
0/5000
กลางวัฒนธรรม (มาร์ตินน้ำซุปกลางการคัดเลือกเชื้อรา)
ถูกสร้างขึ้นมาโดยการรวม 1 กรัม kh2po4, 0.5 กรัม MgSO4 · 7H2O 10 กรัมกลูโคส
และ 10 กรัมเปปโตนใน 1 ลิตรของน้ำกลั่น-กลั่นปราศจากไอออนวัฒนธรรมของเหลว
สั่น วัฒนธรรมแผ่น 17 g / l วุ้นถูกบันทึกอยู่ในมาร์ติน
น้ำซุปแก้ปัญหาวัฒนธรรมของเหลว สองวัฒนธรรมสื่อที่ใช้สำหรับการแยกเชื้อรา
จากชิ้นไม้ การเจริญเติบโตของเชื้อแบคทีเรียและ Actinomyces
ถูก จำกัด ในสื่อสองวัฒนธรรมในขณะที่เชื้อรามีอิทธิพลไม่ค่อย
หลายเชื้อราหาย แต่เฉพาะจำพวก
จากนี้ยังไม่ได้รับการกำหนดไว้ การแยกของเชื้อราในช่วงสั้น
ได้รับการดังต่อไปนี้ทั้งหมดของอุปกรณ์และภาชนะที่ผ่านการฆ่าเชื้อ,
และขั้นตอนการทดลองทั้งหมดถูกดำเนินการภายใต้เงื่อนไข
ปลอดเชื้อ แรกอาณานิคมสีขาวบนชิ้นไม้เป็น
เลือกและลายวงผ่านการฆ่าเชื้อและจากนั้นเลือกการบ่ม
ได้ดำเนินการโดยวัฒนธรรมแผ่นที่ 28 ◦ C เป็นเวลา 3 วันในการพัฒนา
อาณานิคมใหม่ ต่อมาอาณานิคมสีขาวใหม่
เลือกสำหรับการเตรียมการแก้ปัญหาการหยุดชะงักด้วยน้ำฆ่าเชื้อ
ซึ่ง pipetted วัฒนธรรมต่อไปโดยวิธีการแพร่กระจายแผ่น.
หลายอาณานิคมสีขาวเหล่านี้ถูกจัดเตรียมไว้สำหรับการศึกษาลักษณะทางสัณฐานวิทยา
อาณานิคมที่มีเส้นใยสีขาวที่มีความอุดมสมบูรณ์เส้นใย
และมากมายของ conidiophores ในการแก้ปัญหาวัฒนธรรมได้รับเลือก.
เชื้อราที่ได้รับจึง (CW-1) มีเชื้อใน 500ml กรวย
ขวดที่มีการแก้ปัญหาวัฒนธรรม 200ml หลังจาก 3 วันวัฒนธรรม
แก้ปัญหาด้วยเชื้อราแบ่งออกเป็นสามขวดรูปกรวยและแก้ปัญหาวัฒนธรรม
สด 200ml ถูกบันทึกอยู่ในแต่ละขวด หลังจากสาม
รอบชีวมวลเชื้อราถูกเก็บรวบรวมจากการแก้ปัญหาวัฒนธรรม
และล้างด้วยน้ำกลั่น-กลั่นปราศจากไอออนลบที่เหลือ
ของการแก้ปัญหาวัฒนธรรม ชีวมวลเป็นเชื้อราทำความสะอาดเตาอบแห้ง
ที่ 60 ◦ C เป็นเวลา 48 ชั่วโมง ชีวมวลเชื้อราแห้งบดแล้ว
ผ่านตะแกรง 0.154mm สำหรับการใช้งาน ในทางกลับกันบางชีวมวลเชื้อรา
สดถูกนำมาใช้สำหรับการเพาะเลี้ยงขยายต่อไปและ
เตรียมพร้อมสำหรับการดูดซับและย่อยสลายการทดลอง.
2.2 ลักษณะของสีขาวเน่าเชื้อรา
ธาตุ (c, H, n) การวิเคราะห์ชีวมวลของเชื้อราได้ดำเนิน
โดยใช้การวิเคราะห์ 112chnelemental อี (เทอร์โมฟินนิกัน).
สเปกตรัม ftir ถูกบันทึกไว้ในภูมิภาค 4000-400cm-1 สำหรับ kbrpellet
โดย ftir Spectrophotometer Nicolet (รุ่น 560) ที่มีความละเอียดของ
1.0cm-1.
2.3ชุดทดลองการดูดซับ
ห้าพีเอเอช (แนพทาลี acenaphthene, ฟลูออรีน, phenanthrene
และไพรี) ถูกเลือกให้เป็นแบบ sorbates เนื่องจาก
สถานะของพวกเขาแลกเปลี่ยนในสภาพแวดล้อมที่ เลือกคุณสมบัติของพีเอเอชจะนำเสนอ
ในตารางที่ 1 ทั้งหมดที่เดียวตัวถูกละลาย isotherms การดูดซับโดย
สีขาวเน่าเชื้อรา (CW-1) ที่ได้รับการปรับสมดุลโดยใช้ชุด
เทคนิคที่อธิบายไว้ในที่อื่น [23] ในช่วงสั้น ๆความเข้มข้นเริ่มต้น
ตั้งแต่ 0.20-25 mg / l เพื่อเหม็นจาก 0.002
ถึง 2.5 mg / l เพื่อ acenaphthene, 0.008-1.7 mg / l เพื่อฟลูออรีน,
จาก 0.001 ถึง 1mg / ลิตรเพื่อ phenanthrene และจาก 0.0002 ไป
0.1 mg / l เพื่อไพรี แต่ละไอโซเทอมประกอบด้วยความเข้มข้น
10 จุดแต่ละจุดรวมทั้งการควบคุมและการสอบเทียบก็วิ่ง
ในที่ซ้ำกัน การแก้ปัญหาพื้นหลังประกอบด้วย 001 โมล / ลิตร CaCl2,
และ 200 mg / l nan3 ในการยับยั้งการย่อยสลายของการแก้ปัญหา.
ขวด 8 มล. เต็มไปด้วยซอร์เบตแก้ปัญหาเพื่อลด
ปริมาณช่องว่างเหนือของเหลวของขวดและปิดผนึกด้วยอลูมิเนียม foillined หมวก
กรูเทฟลอน เพื่อหลีกเลี่ยงการระเหยของซอร์เบตแล้ว
สบายใจในความมืดเป็นเวลา 3 วันที่ 25 ± 0.5 ◦ c เพื่อเข้าถึงสมดุลชัดเจน.
การแก้ปัญหาที่ถูกแยกออกโดยการหมุนเหวี่ยงที่ 4000rpm
เวลา 15 นาที ความเข้มข้นของความสมดุลที่ถูกวัดโดยใช้
โคของเหลวสมรรถนะสูง (HPLC, agilent 1200)
ด้วย 4.6mm × 150mm ขั้นตอนการย้อนกลับคอลัมน์ xdb-c18 และเครื่องตรวจจับแสง
(fld) โดยใช้ acetonitrile น้ำ (v: v, 90 / 10)
เป็นเฟสเคลื่อนที่ที่อัตราการไหลของ 1ml/min บุคคล
ความยาวคลื่นกระตุ้นของแนพทาลี acenaphthene, ฟลูออรีน,
phenanthrene และไพรีเป็น 240, 240, 220, 244 และ 237 นาโนเมตรในขณะที่ความยาวคลื่น
ปล่อยตามลำดับมี 360, 360, 315, 360 และ 385
นาโนเมตร เพราะการดูดซับน้อยที่สุดโดยขวดและการสูญเสียเล็กน้อย
โดยการระเหยการย่อยสลายและสลาย
sorbed จำนวนที่คำนวณได้จากความแตกต่างระหว่างมวล
ความเข้มข้นที่กำหนดโดยไม่ต้องดูดซับและมีการดูดซับน้ำในการแก้ปัญหา
.
ทุกการทดลองการดูดซับการแข่งขันของ phenanthrene
ไพรีและได้ดำเนินการที่ 25 ± 0.5 ◦ค การทดลองการดูดซับสองตัวถูกละลาย
รวมถึงการดูดซับของไพรี 0.5 mg / l เป็น phenanthrene
ร่วมตัวถูกละลายและดูดซับของ phenanthrene 0.05 mg / l
ไพรีเป็นร่วมตัวถูกละลาย ขั้นตอนที่เหลือของการดูดซับการแข่งขัน
การทดลองได้ดำเนินการในลักษณะเดียวกันตามที่อธิบายไว้ในการทดลองการดูดซับ
เดียวตัวถูกละลาย.
2.4 ดูดซับและย่อยสลายการทดลอง
วัฒนธรรม 4 วันของเชื้อราสีขาวเน่า (CW-1) ที่ได้รับจากบริสุทธิ์
วัฒนธรรมเกี่ยวกับการปลูกใน 200ml ของน้ำซุปมาร์ตินได้รับการหดหาย
ในขวดรูปกรวยผ่านการฆ่าเชื้อของ 500 มล. และถูกนำมาใช้สำหรับการฉีดวัคซีน
ห้ากลุ่มได้รับการออกแบบ (i) น้ำซุปมาร์ตินได้โดยไม่ต้อง
เชื้อราถูกนำมาใช้กับการควบคุมที่ว่างเปล่า (ii) เชื้อราความร้อนฆ่ามาร์ติน
น้ำซุปถูกนำมาใช้เป็นตัวควบคุมเพื่อศึกษาผลของน้ำซุปมาร์ติน
(ในทางตรงกันข้ามกับความร้อนฆ่าเชื้อราในการแก้ปัญหาน้ำของชุดการทดลองการดูดซับ
) ( iii) เห็ดสดน้ำซุปมาร์ติน (สารอาหารที่รวมโซลูชั่น
) (iv) อยู่เชื้อราน้ำฆ่าเชื้อ (ไม่รวมอาหาร) และ
(v) การมีชีวิตอยู่ในน้ำซุปรามาร์ตินได้โดยไม่ต้องน้ำตาล เหล่านี้ทดลอง
กลุ่มถูกนำมาใช้ในการตรวจสอบการมีส่วนร่วมของดูดซับและย่อยสลาย
ที่จะกำจัดของพีเอเอชสารอาหารภายใต้เงื่อนไขที่แตกต่าง
แก้ปัญหา 20 มล. มีความเข้มข้น 1.0 mg / l
phenanthrene และ 0.1 mg / l ไพรีถูกเพิ่มเข้าไปในขวด 40 มล. .
ซ้ำตัวอย่างที่ถูกเตรียมไว้สำหรับแต่ละกลุ่มรวมทั้งสาม
กลุ่มทดลองและกลุ่มควบคุมที่สอง นอกจากนี้หลังจากการของการแก้ปัญหา
ขวด 40 มล. ถูกปิดผนึกด้วยอลูมิเนียมฟอยล์เรียงรายเทฟลอน
กรูหมวกเพื่อหลีกเลี่ยงการระเหยของซอร์เบตแล้วไม่สบายใจใน
มืดเป็นเวลา 7 วันที่ 25 ± 0.5 ◦คที่มีการเติมอากาศเพื่อ 2min ในแต่ละวัน หลังจาก
7 วันของวัฒนธรรมขวดถูกหมุนเหวี่ยงที่ 4000rpm เป็นเวลา 15 นาที.
ใสจะถูกลบออกและเจือจางด้วย CH3CN (1:1) และ
พีเอเอชที่เหลือในการแก้ปัญหาที่ถูกตรวจพบโดย HPLC-fld แล้ว
สารละลายในขวดที่ถูกวมากที่สุดเท่าที่เป็นไปได้และ
พีเอเอชที่เหลือในชีวมวลของเชื้อราถูกสกัดโดย ultrasonication
30 นาทีด้วย 10mlmixture ของอะซิโตนและเฮกเซน (1:1 v: v) ใน
3 สกัดต่อเนื่อง สารสกัดถูกรวบรวมและระเหย
เกือบแห้งโดยใช้เครื่องระเหยแบบหมุนและ re-ละลายใน 5ml ของ
เฮกเซนตามด้วยขั้นตอนการทำความสะอาดขึ้นผ่าน 2.5 กรัมซิลิกา
คอลัมน์เจลที่มีส่วนผสม 15ml ของเฮกเซนและไดคลอโรมีเทน
ถูกสร้างขึ้นมาโดยการรวม 1 กรัม kh2po4, 0.5 กรัม MgSO4 · 7H2O 10 กรัมกลูโคส
และ 10 กรัมเปปโตนใน 1 ลิตรของน้ำกลั่น-กลั่นปราศจากไอออนวัฒนธรรมของเหลว
สั่น วัฒนธรรมแผ่น 17 g / l วุ้นถูกบันทึกอยู่ในมาร์ติน
น้ำซุปแก้ปัญหาวัฒนธรรมของเหลว สองวัฒนธรรมสื่อที่ใช้สำหรับการแยกเชื้อรา
จากชิ้นไม้ การเจริญเติบโตของเชื้อแบคทีเรียและ Actinomyces
ถูก จำกัด ในสื่อสองวัฒนธรรมในขณะที่เชื้อรามีอิทธิพลไม่ค่อย
หลายเชื้อราหาย แต่เฉพาะจำพวก
จากนี้ยังไม่ได้รับการกำหนดไว้ การแยกของเชื้อราในช่วงสั้น
ได้รับการดังต่อไปนี้ทั้งหมดของอุปกรณ์และภาชนะที่ผ่านการฆ่าเชื้อ,
และขั้นตอนการทดลองทั้งหมดถูกดำเนินการภายใต้เงื่อนไข
ปลอดเชื้อ แรกอาณานิคมสีขาวบนชิ้นไม้เป็น
เลือกและลายวงผ่านการฆ่าเชื้อและจากนั้นเลือกการบ่ม
ได้ดำเนินการโดยวัฒนธรรมแผ่นที่ 28 ◦ C เป็นเวลา 3 วันในการพัฒนา
อาณานิคมใหม่ ต่อมาอาณานิคมสีขาวใหม่
เลือกสำหรับการเตรียมการแก้ปัญหาการหยุดชะงักด้วยน้ำฆ่าเชื้อ
ซึ่ง pipetted วัฒนธรรมต่อไปโดยวิธีการแพร่กระจายแผ่น.
หลายอาณานิคมสีขาวเหล่านี้ถูกจัดเตรียมไว้สำหรับการศึกษาลักษณะทางสัณฐานวิทยา
อาณานิคมที่มีเส้นใยสีขาวที่มีความอุดมสมบูรณ์เส้นใย
และมากมายของ conidiophores ในการแก้ปัญหาวัฒนธรรมได้รับเลือก.
เชื้อราที่ได้รับจึง (CW-1) มีเชื้อใน 500ml กรวย
ขวดที่มีการแก้ปัญหาวัฒนธรรม 200ml หลังจาก 3 วันวัฒนธรรม
แก้ปัญหาด้วยเชื้อราแบ่งออกเป็นสามขวดรูปกรวยและแก้ปัญหาวัฒนธรรม
สด 200ml ถูกบันทึกอยู่ในแต่ละขวด หลังจากสาม
รอบชีวมวลเชื้อราถูกเก็บรวบรวมจากการแก้ปัญหาวัฒนธรรม
และล้างด้วยน้ำกลั่น-กลั่นปราศจากไอออนลบที่เหลือ
ของการแก้ปัญหาวัฒนธรรม ชีวมวลเป็นเชื้อราทำความสะอาดเตาอบแห้ง
ที่ 60 ◦ C เป็นเวลา 48 ชั่วโมง ชีวมวลเชื้อราแห้งบดแล้ว
ผ่านตะแกรง 0.154mm สำหรับการใช้งาน ในทางกลับกันบางชีวมวลเชื้อรา
สดถูกนำมาใช้สำหรับการเพาะเลี้ยงขยายต่อไปและ
เตรียมพร้อมสำหรับการดูดซับและย่อยสลายการทดลอง.
2.2 ลักษณะของสีขาวเน่าเชื้อรา
ธาตุ (c, H, n) การวิเคราะห์ชีวมวลของเชื้อราได้ดำเนิน
โดยใช้การวิเคราะห์ 112chnelemental อี (เทอร์โมฟินนิกัน).
สเปกตรัม ftir ถูกบันทึกไว้ในภูมิภาค 4000-400cm-1 สำหรับ kbrpellet
โดย ftir Spectrophotometer Nicolet (รุ่น 560) ที่มีความละเอียดของ
1.0cm-1.
2.3ชุดทดลองการดูดซับ
ห้าพีเอเอช (แนพทาลี acenaphthene, ฟลูออรีน, phenanthrene
และไพรี) ถูกเลือกให้เป็นแบบ sorbates เนื่องจาก
สถานะของพวกเขาแลกเปลี่ยนในสภาพแวดล้อมที่ เลือกคุณสมบัติของพีเอเอชจะนำเสนอ
ในตารางที่ 1 ทั้งหมดที่เดียวตัวถูกละลาย isotherms การดูดซับโดย
สีขาวเน่าเชื้อรา (CW-1) ที่ได้รับการปรับสมดุลโดยใช้ชุด
เทคนิคที่อธิบายไว้ในที่อื่น [23] ในช่วงสั้น ๆความเข้มข้นเริ่มต้น
ตั้งแต่ 0.20-25 mg / l เพื่อเหม็นจาก 0.002
ถึง 2.5 mg / l เพื่อ acenaphthene, 0.008-1.7 mg / l เพื่อฟลูออรีน,
จาก 0.001 ถึง 1mg / ลิตรเพื่อ phenanthrene และจาก 0.0002 ไป
0.1 mg / l เพื่อไพรี แต่ละไอโซเทอมประกอบด้วยความเข้มข้น
10 จุดแต่ละจุดรวมทั้งการควบคุมและการสอบเทียบก็วิ่ง
ในที่ซ้ำกัน การแก้ปัญหาพื้นหลังประกอบด้วย 001 โมล / ลิตร CaCl2,
และ 200 mg / l nan3 ในการยับยั้งการย่อยสลายของการแก้ปัญหา.
ขวด 8 มล. เต็มไปด้วยซอร์เบตแก้ปัญหาเพื่อลด
ปริมาณช่องว่างเหนือของเหลวของขวดและปิดผนึกด้วยอลูมิเนียม foillined หมวก
กรูเทฟลอน เพื่อหลีกเลี่ยงการระเหยของซอร์เบตแล้ว
สบายใจในความมืดเป็นเวลา 3 วันที่ 25 ± 0.5 ◦ c เพื่อเข้าถึงสมดุลชัดเจน.
การแก้ปัญหาที่ถูกแยกออกโดยการหมุนเหวี่ยงที่ 4000rpm
เวลา 15 นาที ความเข้มข้นของความสมดุลที่ถูกวัดโดยใช้
โคของเหลวสมรรถนะสูง (HPLC, agilent 1200)
ด้วย 4.6mm × 150mm ขั้นตอนการย้อนกลับคอลัมน์ xdb-c18 และเครื่องตรวจจับแสง
(fld) โดยใช้ acetonitrile น้ำ (v: v, 90 / 10)
เป็นเฟสเคลื่อนที่ที่อัตราการไหลของ 1ml/min บุคคล
ความยาวคลื่นกระตุ้นของแนพทาลี acenaphthene, ฟลูออรีน,
phenanthrene และไพรีเป็น 240, 240, 220, 244 และ 237 นาโนเมตรในขณะที่ความยาวคลื่น
ปล่อยตามลำดับมี 360, 360, 315, 360 และ 385
นาโนเมตร เพราะการดูดซับน้อยที่สุดโดยขวดและการสูญเสียเล็กน้อย
โดยการระเหยการย่อยสลายและสลาย
sorbed จำนวนที่คำนวณได้จากความแตกต่างระหว่างมวล
ความเข้มข้นที่กำหนดโดยไม่ต้องดูดซับและมีการดูดซับน้ำในการแก้ปัญหา
.
ทุกการทดลองการดูดซับการแข่งขันของ phenanthrene
ไพรีและได้ดำเนินการที่ 25 ± 0.5 ◦ค การทดลองการดูดซับสองตัวถูกละลาย
รวมถึงการดูดซับของไพรี 0.5 mg / l เป็น phenanthrene
ร่วมตัวถูกละลายและดูดซับของ phenanthrene 0.05 mg / l
ไพรีเป็นร่วมตัวถูกละลาย ขั้นตอนที่เหลือของการดูดซับการแข่งขัน
การทดลองได้ดำเนินการในลักษณะเดียวกันตามที่อธิบายไว้ในการทดลองการดูดซับ
เดียวตัวถูกละลาย.
2.4 ดูดซับและย่อยสลายการทดลอง
วัฒนธรรม 4 วันของเชื้อราสีขาวเน่า (CW-1) ที่ได้รับจากบริสุทธิ์
วัฒนธรรมเกี่ยวกับการปลูกใน 200ml ของน้ำซุปมาร์ตินได้รับการหดหาย
ในขวดรูปกรวยผ่านการฆ่าเชื้อของ 500 มล. และถูกนำมาใช้สำหรับการฉีดวัคซีน
ห้ากลุ่มได้รับการออกแบบ (i) น้ำซุปมาร์ตินได้โดยไม่ต้อง
เชื้อราถูกนำมาใช้กับการควบคุมที่ว่างเปล่า (ii) เชื้อราความร้อนฆ่ามาร์ติน
น้ำซุปถูกนำมาใช้เป็นตัวควบคุมเพื่อศึกษาผลของน้ำซุปมาร์ติน
(ในทางตรงกันข้ามกับความร้อนฆ่าเชื้อราในการแก้ปัญหาน้ำของชุดการทดลองการดูดซับ
) ( iii) เห็ดสดน้ำซุปมาร์ติน (สารอาหารที่รวมโซลูชั่น
) (iv) อยู่เชื้อราน้ำฆ่าเชื้อ (ไม่รวมอาหาร) และ
(v) การมีชีวิตอยู่ในน้ำซุปรามาร์ตินได้โดยไม่ต้องน้ำตาล เหล่านี้ทดลอง
กลุ่มถูกนำมาใช้ในการตรวจสอบการมีส่วนร่วมของดูดซับและย่อยสลาย
ที่จะกำจัดของพีเอเอชสารอาหารภายใต้เงื่อนไขที่แตกต่าง
แก้ปัญหา 20 มล. มีความเข้มข้น 1.0 mg / l
phenanthrene และ 0.1 mg / l ไพรีถูกเพิ่มเข้าไปในขวด 40 มล. .
ซ้ำตัวอย่างที่ถูกเตรียมไว้สำหรับแต่ละกลุ่มรวมทั้งสาม
กลุ่มทดลองและกลุ่มควบคุมที่สอง นอกจากนี้หลังจากการของการแก้ปัญหา
ขวด 40 มล. ถูกปิดผนึกด้วยอลูมิเนียมฟอยล์เรียงรายเทฟลอน
กรูหมวกเพื่อหลีกเลี่ยงการระเหยของซอร์เบตแล้วไม่สบายใจใน
มืดเป็นเวลา 7 วันที่ 25 ± 0.5 ◦คที่มีการเติมอากาศเพื่อ 2min ในแต่ละวัน หลังจาก
7 วันของวัฒนธรรมขวดถูกหมุนเหวี่ยงที่ 4000rpm เป็นเวลา 15 นาที.
ใสจะถูกลบออกและเจือจางด้วย CH3CN (1:1) และ
พีเอเอชที่เหลือในการแก้ปัญหาที่ถูกตรวจพบโดย HPLC-fld แล้ว
สารละลายในขวดที่ถูกวมากที่สุดเท่าที่เป็นไปได้และ
พีเอเอชที่เหลือในชีวมวลของเชื้อราถูกสกัดโดย ultrasonication
30 นาทีด้วย 10mlmixture ของอะซิโตนและเฮกเซน (1:1 v: v) ใน
3 สกัดต่อเนื่อง สารสกัดถูกรวบรวมและระเหย
เกือบแห้งโดยใช้เครื่องระเหยแบบหมุนและ re-ละลายใน 5ml ของ
เฮกเซนตามด้วยขั้นตอนการทำความสะอาดขึ้นผ่าน 2.5 กรัมซิลิกา
คอลัมน์เจลที่มีส่วนผสม 15ml ของเฮกเซนและไดคลอโรมีเทน
การแปล กรุณารอสักครู่..
สื่อวัฒนธรรม (ซุปมาร์ติน กลางใช้สำหรับเชื้อรา)
โดยรวม 1 g KH2PO4, 0.5 g MgSO4·7H2O น้ำตาลกลูโคส 10 กรัม,
และ peptone 10 กรัมในน้ำ distilled–deionized ของเหลว 1 L
จับวัฒนธรรม สำหรับวัฒนธรรมจาน agar 17 g/L ถูกเพิ่มเข้าไปมาร์ติน
โซลูชันวัฒนธรรมน้ำซุป ใช้สำหรับสื่อวัฒนธรรมสอง
แยกเชื้อราจากชิ้นไม้ เจริญเติบโตของแบคทีเรีย actinomyces
มีจำกัดสื่อวัฒนธรรมสอง ขณะที่เชื้อรา
ผลไม่ค่อย เชื้อราต่าง ๆ ได้กู้คืน แต่เฉพาะสกุล
จากเหล่านี้ไม่ได้กำหนดไว้ แยกเชื้อราย่อ
มีดังนี้: อุปกรณ์และบรรจุภัณฑ์ทั้งหมดถูก sterilized,
และขั้นตอนการทดลองทั้งหมดได้ดำเนินการภายใต้
เงื่อนไขเข้มข้น เริ่มแรก เป็นโคโลนีสีขาวบนชิ้นไม้
เลือก และลายวน sterilized และคณะทันตแพทยศาสตร์แล้วเลือก
ทำตามวัฒนธรรมแผ่นที่ 28 ◦C สำหรับ 3 วัน
พัฒนาอาณานิคมใหม่ ต่อ โคโลสีขาวใหม่ถูก
สำหรับเตรียมแก้ปัญหาระงับน้ำ sterilized,
ซึ่งถูก pipetted สำหรับแพร่กระจายวัฒนธรรมเพิ่มเติมโดยวิธีจาน
หลายของอาณานิคมเหล่านี้สีขาวถูกเตรียมสำหรับสัณฐาน
ศึกษา อาณานิคมกับ mycelium สีขาวกับ mycelia มากมาย
และ conidiophores ในการแก้ปัญหาวัฒนธรรมมากมายเลือก
เชื้อราจึง ได้รับ (ตามน้ำหนักจริง-1) ได้ inoculated ในทรงกรวยขนาด 500 มล.
หนาวที่ประกอบด้วยการพัฒนาวัฒนธรรมองค์กร 200mL หลังจาก 3 วัน วัฒนธรรม
ด้วยเชื้อราถูกแบ่งออกเป็นสามทรงกรวยน้ำ และ
โซลูชันวัฒนธรรมสด 200 มล.เพิ่มจะหนาวแต่ละ หลังจากที่สาม
รอบ ชีวมวลเชื้อราได้รวบรวมจากการแก้ปัญหาวัฒนธรรม,
และล้าง ด้วยน้ำ distilled–deionized เอาสารตกค้าง
โซลูชันวัฒนธรรม ชีวมวลสะอาดเชื้อราถูกเตาอบแห้ง
ที่ 60 ◦C สำหรับ 48 h ชีวมวลเชื้อราแห้งถูก pulverized แล้ว
ผ่านตะแกรง 0.154 มม.ใช้ บนมืออื่น ๆ บาง
ชีวมวลเชื้อราที่อยู่ใช้สำหรับต่อขยายวัฒนธรรม และ
เตรียมไว้สำหรับ biosorption และ biodegradation ทดลอง
2.2 คุณสมบัติของเชื้อราขาว-rot
ได้ดำเนินการวิเคราะห์ธาตุ (C, H, N) ของชีวมวลเชื้อรา
ใช้ตัววิเคราะห์ 112CHNelemental เอ (เทอร์โม Finnigan) .
FTIR แรมสเป็คตราถูกบันทึกในภูมิภาค 4000–400cm−1 ใน KBrpellet การ
โดยเครื่องทดสอบกรดการ Nicolet FTIR ด่าง (รุ่น 560) กับการ
ของ 1.0cm−1.
2.3 ชุดทดลองดูด
PAHs ห้า (แนฟทาลีน acenaphthene, fluorene ฟีแนนทรีน
และไพรีน) ถูกเลือกเป็นรุ่น sorbates เนื่องจากการขึ้น
อยู่ในสภาพแวดล้อม คุณสมบัติเลือกของ PAHs
แสดงในตารางที่ 1 Isotherms ตัวเดียวดูดโดย
ขาว-rot เชื้อรา (น้ำหนักจริง-1) ได้รับใช้ equilibration ชุด
เทคนิคอธิบายอื่น ๆ [23] สังเขป ความเข้มข้นเริ่มต้น
อยู่ในช่วงจาก 0.20 ถึง 25 mg/L ในแนฟทาลีน จาก 0.002
ใน 2.5 mg/L สำหรับ acenaphthene จาก 0.008 ถึง 1.7 mg/L สำหรับ fluorene,
จาก 0.001 ให้ 1 mg/L สำหรับฟีแนนทรีน และ 0.0002 การ
0.1 mg/L สำหรับไพรีน Isotherm แต่ละประกอบด้วยความเข้มข้น 10
จุด รันแต่ละจุด รวมทั้งควบคุมและสอบเทียบ
ในซ้ำ แก้ปัญหาพื้นหลังประกอบด้วย 0โมล 01 L CaCl2,
และ 200 mg/L NaN3 ยับยั้ง biodegradation ของโซลูชัน
vials 8 mL เต็มไป ด้วยการแก้ไข sorbate ลด
วอลุ่ม headspace ของ vials และปิดผนึก ด้วยอลูมิเนียม foillined
หมวกสกรูเทฟลอนเพื่อหลีกเลี่ยงการระเหยของ sorbate แล้ว
นั้นกระตุ้นทำในมืด 3 วันที่ 25±0.5 ◦C ถึงสมดุลชัดเจน
โซลูชันถูกคั่น ด้วย centrifugation ที่ 4000 รอบต่อนาที
สำหรับ 15 นาที ความเข้มข้นสมดุลถูกวัดโดยใช้
หลอมเหลว chromatography (HPLC, Agilent 1200)
กับ 4.6 มม.× 150 มม.ระยะกลับ XDB-C18 คอลัมน์และ
จับ fluorescence (FLD) ใช้ acetonitrile–water (v: v, 90/10)
เป็นเฟสเคลื่อนที่อัตราการไหล 1 มิลลิลิตร/นาที ละ
ความยาวคลื่นในการกระตุ้นของแนฟทาลีน acenaphthene, fluorene,
ฟีแนนทรีนไพรีนนำ 240, 240, 220, 244 และ 237 nm,
ขณะปล่อยก๊าซแต่ละความยาวคลื่น 360, 360, 315, 360
และ 385 nm เนื่องจากดูดน้อยที่สุด โดย vials และระยะ
สูญเสีย โดยการระเหย biodegradation และ photodegradation,
sorbed ยอดเงินถูกคำนวณ โดยความแตกต่างโดยรวมระหว่าง
ระบุความเข้มข้นโดยไม่มีการดูดซับ และดูดซับในอควี
โซลูชั่นการ
ทดลองแข่งขันดูดทั้งหมดของฟีแนนทรีน และ
ไพรีนได้ดำเนินการใน 25±0.5 ◦C Bi-ตัวดูดทดลอง
รวมดูดของไพรีนกับฟีแนนทรีน 0.5 mg/L เป็น
ร่วมตัวและดูดของฟีแนนทรีนกับไพรีน 0.05 mg/L
เป็นตัวร่วม ขั้นตอนเหลือของดูดแข่งขัน
ทดลองได้กระทำเหมือนตามที่อธิบายไว้ใน
ดูดตัวเดียวทดลอง
2.4 ทดลอง Biosorption และ biodegradation
วัฒนธรรม 4 วันของเชื้อราขาว-rot (ตามน้ำหนักจริง-1) ได้รับจากบริสุทธิ์
วัฒนธรรมปลูกประมาณ 200mL ของซุปมาร์ตินถูก homogenized
ใน 500 mL ทรงกรวยหนาว sterilized และใช้สำหรับ inoculating.
5 กลุ่มได้รับการออกแบบ: (i) มาร์ตินซุปโดย
ใช้เป็นตัวควบคุมว่าง เชื้อรา (ii) ความร้อนฆ่าเชื้อรามาร์ติน
ซุป ถูกใช้เป็นตัวควบคุมเพื่อศึกษาผลของมาร์ตินซุป
(ตรงข้ามความร้อนฆ่าเชื้อราในโซลูชั่นอควีชุด
ทดลองดูด); (iii) เชื้อราสดมาร์ตินซุป (สารรวม
โซลูชัน); (iv) เชื้อราสด sterilized น้ำ (ไม่ มีอาหาร); and
(v) อาศัยเชื้อรามาร์ตินซุป โดยกลูโคส ทดลองเหล่านี้
กลุ่มถูกใช้เพื่อตรวจสอบการจัดสรร biosorption
และ biodegradation เพื่อเอาของ PAHs ภายใต้สารต่าง ๆ
เงื่อนไข โซลูชั่น 20 mL มีความเข้มข้นของ 1.0 mg/L
ฟีแนนทรีนและไพรีน 0.1 mg/L ถูกเพิ่มเพื่อ vials 40 mL ในการ
Replicate อย่างถูกเตรียมไว้สำหรับแต่ละกลุ่ม รวมสาม
กลุ่มทดลองและควบคุมสอง หลังจากการเพิ่มของโซลูชัน,
vials 40 mL ถูกปิดผนึก ด้วยอลูมิเนียมฟอยล์เส้นเทฟลอน
น็อตหมวกเพื่อหลีกเลี่ยงการระเหยของ sorbate แล้ว นั้นกระตุ้นทำในการ
มืด 7 วันที่ 25±0.5 ◦C กับ aeration สำหรับ 2 นาทีแต่ละวัน หลังจาก
7 วันวัฒนธรรม vials ถูก centrifuged ที่ 4000 รอบต่อนาทีสำหรับ 15 นาที
supernatant ถูกเอาออก และผสมกับ CH3CN (1:1), และ
PAHs เหลือในการแก้ปัญหาถูกตรวจพบ โดย HPLC–FLD แล้ว
การแก้ปัญหาใน vials ถูก decanted มากที่สุด และ
PAHs เหลือในชีวมวลเชื้อราถูกสกัด โดย ultrasonication
ใน 30 นาทีมีการ 10mLmixture ของอะซีโตนเฮกเซน (1:1, v: v) สำหรับ
สกัดต่อเนื่อง 3 สารสกัดถูกทางถูกพู และหายไป
เกือบแห้งใช้โรตารี่ evaporator และละลายใน 5 mL ของใหม่
เฮกเซน ตาม ด้วยการล้างขั้นตอนผ่านนส่วน 2.5g
คอลัมน์เจล 15mL ส่วนผสมของเฮกเซนและ dichloromethane
โดยรวม 1 g KH2PO4, 0.5 g MgSO4·7H2O น้ำตาลกลูโคส 10 กรัม,
และ peptone 10 กรัมในน้ำ distilled–deionized ของเหลว 1 L
จับวัฒนธรรม สำหรับวัฒนธรรมจาน agar 17 g/L ถูกเพิ่มเข้าไปมาร์ติน
โซลูชันวัฒนธรรมน้ำซุป ใช้สำหรับสื่อวัฒนธรรมสอง
แยกเชื้อราจากชิ้นไม้ เจริญเติบโตของแบคทีเรีย actinomyces
มีจำกัดสื่อวัฒนธรรมสอง ขณะที่เชื้อรา
ผลไม่ค่อย เชื้อราต่าง ๆ ได้กู้คืน แต่เฉพาะสกุล
จากเหล่านี้ไม่ได้กำหนดไว้ แยกเชื้อราย่อ
มีดังนี้: อุปกรณ์และบรรจุภัณฑ์ทั้งหมดถูก sterilized,
และขั้นตอนการทดลองทั้งหมดได้ดำเนินการภายใต้
เงื่อนไขเข้มข้น เริ่มแรก เป็นโคโลนีสีขาวบนชิ้นไม้
เลือก และลายวน sterilized และคณะทันตแพทยศาสตร์แล้วเลือก
ทำตามวัฒนธรรมแผ่นที่ 28 ◦C สำหรับ 3 วัน
พัฒนาอาณานิคมใหม่ ต่อ โคโลสีขาวใหม่ถูก
สำหรับเตรียมแก้ปัญหาระงับน้ำ sterilized,
ซึ่งถูก pipetted สำหรับแพร่กระจายวัฒนธรรมเพิ่มเติมโดยวิธีจาน
หลายของอาณานิคมเหล่านี้สีขาวถูกเตรียมสำหรับสัณฐาน
ศึกษา อาณานิคมกับ mycelium สีขาวกับ mycelia มากมาย
และ conidiophores ในการแก้ปัญหาวัฒนธรรมมากมายเลือก
เชื้อราจึง ได้รับ (ตามน้ำหนักจริง-1) ได้ inoculated ในทรงกรวยขนาด 500 มล.
หนาวที่ประกอบด้วยการพัฒนาวัฒนธรรมองค์กร 200mL หลังจาก 3 วัน วัฒนธรรม
ด้วยเชื้อราถูกแบ่งออกเป็นสามทรงกรวยน้ำ และ
โซลูชันวัฒนธรรมสด 200 มล.เพิ่มจะหนาวแต่ละ หลังจากที่สาม
รอบ ชีวมวลเชื้อราได้รวบรวมจากการแก้ปัญหาวัฒนธรรม,
และล้าง ด้วยน้ำ distilled–deionized เอาสารตกค้าง
โซลูชันวัฒนธรรม ชีวมวลสะอาดเชื้อราถูกเตาอบแห้ง
ที่ 60 ◦C สำหรับ 48 h ชีวมวลเชื้อราแห้งถูก pulverized แล้ว
ผ่านตะแกรง 0.154 มม.ใช้ บนมืออื่น ๆ บาง
ชีวมวลเชื้อราที่อยู่ใช้สำหรับต่อขยายวัฒนธรรม และ
เตรียมไว้สำหรับ biosorption และ biodegradation ทดลอง
2.2 คุณสมบัติของเชื้อราขาว-rot
ได้ดำเนินการวิเคราะห์ธาตุ (C, H, N) ของชีวมวลเชื้อรา
ใช้ตัววิเคราะห์ 112CHNelemental เอ (เทอร์โม Finnigan) .
FTIR แรมสเป็คตราถูกบันทึกในภูมิภาค 4000–400cm−1 ใน KBrpellet การ
โดยเครื่องทดสอบกรดการ Nicolet FTIR ด่าง (รุ่น 560) กับการ
ของ 1.0cm−1.
2.3 ชุดทดลองดูด
PAHs ห้า (แนฟทาลีน acenaphthene, fluorene ฟีแนนทรีน
และไพรีน) ถูกเลือกเป็นรุ่น sorbates เนื่องจากการขึ้น
อยู่ในสภาพแวดล้อม คุณสมบัติเลือกของ PAHs
แสดงในตารางที่ 1 Isotherms ตัวเดียวดูดโดย
ขาว-rot เชื้อรา (น้ำหนักจริง-1) ได้รับใช้ equilibration ชุด
เทคนิคอธิบายอื่น ๆ [23] สังเขป ความเข้มข้นเริ่มต้น
อยู่ในช่วงจาก 0.20 ถึง 25 mg/L ในแนฟทาลีน จาก 0.002
ใน 2.5 mg/L สำหรับ acenaphthene จาก 0.008 ถึง 1.7 mg/L สำหรับ fluorene,
จาก 0.001 ให้ 1 mg/L สำหรับฟีแนนทรีน และ 0.0002 การ
0.1 mg/L สำหรับไพรีน Isotherm แต่ละประกอบด้วยความเข้มข้น 10
จุด รันแต่ละจุด รวมทั้งควบคุมและสอบเทียบ
ในซ้ำ แก้ปัญหาพื้นหลังประกอบด้วย 0โมล 01 L CaCl2,
และ 200 mg/L NaN3 ยับยั้ง biodegradation ของโซลูชัน
vials 8 mL เต็มไป ด้วยการแก้ไข sorbate ลด
วอลุ่ม headspace ของ vials และปิดผนึก ด้วยอลูมิเนียม foillined
หมวกสกรูเทฟลอนเพื่อหลีกเลี่ยงการระเหยของ sorbate แล้ว
นั้นกระตุ้นทำในมืด 3 วันที่ 25±0.5 ◦C ถึงสมดุลชัดเจน
โซลูชันถูกคั่น ด้วย centrifugation ที่ 4000 รอบต่อนาที
สำหรับ 15 นาที ความเข้มข้นสมดุลถูกวัดโดยใช้
หลอมเหลว chromatography (HPLC, Agilent 1200)
กับ 4.6 มม.× 150 มม.ระยะกลับ XDB-C18 คอลัมน์และ
จับ fluorescence (FLD) ใช้ acetonitrile–water (v: v, 90/10)
เป็นเฟสเคลื่อนที่อัตราการไหล 1 มิลลิลิตร/นาที ละ
ความยาวคลื่นในการกระตุ้นของแนฟทาลีน acenaphthene, fluorene,
ฟีแนนทรีนไพรีนนำ 240, 240, 220, 244 และ 237 nm,
ขณะปล่อยก๊าซแต่ละความยาวคลื่น 360, 360, 315, 360
และ 385 nm เนื่องจากดูดน้อยที่สุด โดย vials และระยะ
สูญเสีย โดยการระเหย biodegradation และ photodegradation,
sorbed ยอดเงินถูกคำนวณ โดยความแตกต่างโดยรวมระหว่าง
ระบุความเข้มข้นโดยไม่มีการดูดซับ และดูดซับในอควี
โซลูชั่นการ
ทดลองแข่งขันดูดทั้งหมดของฟีแนนทรีน และ
ไพรีนได้ดำเนินการใน 25±0.5 ◦C Bi-ตัวดูดทดลอง
รวมดูดของไพรีนกับฟีแนนทรีน 0.5 mg/L เป็น
ร่วมตัวและดูดของฟีแนนทรีนกับไพรีน 0.05 mg/L
เป็นตัวร่วม ขั้นตอนเหลือของดูดแข่งขัน
ทดลองได้กระทำเหมือนตามที่อธิบายไว้ใน
ดูดตัวเดียวทดลอง
2.4 ทดลอง Biosorption และ biodegradation
วัฒนธรรม 4 วันของเชื้อราขาว-rot (ตามน้ำหนักจริง-1) ได้รับจากบริสุทธิ์
วัฒนธรรมปลูกประมาณ 200mL ของซุปมาร์ตินถูก homogenized
ใน 500 mL ทรงกรวยหนาว sterilized และใช้สำหรับ inoculating.
5 กลุ่มได้รับการออกแบบ: (i) มาร์ตินซุปโดย
ใช้เป็นตัวควบคุมว่าง เชื้อรา (ii) ความร้อนฆ่าเชื้อรามาร์ติน
ซุป ถูกใช้เป็นตัวควบคุมเพื่อศึกษาผลของมาร์ตินซุป
(ตรงข้ามความร้อนฆ่าเชื้อราในโซลูชั่นอควีชุด
ทดลองดูด); (iii) เชื้อราสดมาร์ตินซุป (สารรวม
โซลูชัน); (iv) เชื้อราสด sterilized น้ำ (ไม่ มีอาหาร); and
(v) อาศัยเชื้อรามาร์ตินซุป โดยกลูโคส ทดลองเหล่านี้
กลุ่มถูกใช้เพื่อตรวจสอบการจัดสรร biosorption
และ biodegradation เพื่อเอาของ PAHs ภายใต้สารต่าง ๆ
เงื่อนไข โซลูชั่น 20 mL มีความเข้มข้นของ 1.0 mg/L
ฟีแนนทรีนและไพรีน 0.1 mg/L ถูกเพิ่มเพื่อ vials 40 mL ในการ
Replicate อย่างถูกเตรียมไว้สำหรับแต่ละกลุ่ม รวมสาม
กลุ่มทดลองและควบคุมสอง หลังจากการเพิ่มของโซลูชัน,
vials 40 mL ถูกปิดผนึก ด้วยอลูมิเนียมฟอยล์เส้นเทฟลอน
น็อตหมวกเพื่อหลีกเลี่ยงการระเหยของ sorbate แล้ว นั้นกระตุ้นทำในการ
มืด 7 วันที่ 25±0.5 ◦C กับ aeration สำหรับ 2 นาทีแต่ละวัน หลังจาก
7 วันวัฒนธรรม vials ถูก centrifuged ที่ 4000 รอบต่อนาทีสำหรับ 15 นาที
supernatant ถูกเอาออก และผสมกับ CH3CN (1:1), และ
PAHs เหลือในการแก้ปัญหาถูกตรวจพบ โดย HPLC–FLD แล้ว
การแก้ปัญหาใน vials ถูก decanted มากที่สุด และ
PAHs เหลือในชีวมวลเชื้อราถูกสกัด โดย ultrasonication
ใน 30 นาทีมีการ 10mLmixture ของอะซีโตนเฮกเซน (1:1, v: v) สำหรับ
สกัดต่อเนื่อง 3 สารสกัดถูกทางถูกพู และหายไป
เกือบแห้งใช้โรตารี่ evaporator และละลายใน 5 mL ของใหม่
เฮกเซน ตาม ด้วยการล้างขั้นตอนผ่านนส่วน 2.5g
คอลัมน์เจล 15mL ส่วนผสมของเฮกเซนและ dichloromethane
การแปล กรุณารอสักครู่..
วัฒนธรรมขนาดกลาง(มาร์ตินน้ำซุป,ที่มีทางเลือกขนาดกลางสำหรับเห็ด)
ไม่ได้โดยการรวม 1 กรัม KH 2 po4 , 0.5 G mgso 4 7 H 2 O , 10 G กลูโคส,
และ 10 กรัมเนื้อยุ่ยเมื่อถูกเพพซินใน 1 ลิตรกลั่น - deionized น้ำสำหรับผสมน้ำยาทำความสะอาด
เขย่าวัฒนธรรม. สำหรับวัฒนธรรมแผ่น 17 สาหร่ายทะเล/ L G ถูกเพิ่มในโซลูชันผสมน้ำยาทำความสะอาดวัฒนธรรม
ซุปมาร์ตินได้ สองวัฒนธรรมสื่อที่ถูกนำไปใช้เพื่อการแยก
เห็ดจากชิ้นไม้ อัตราการเติบโตของแบคทีเรียและ actinomyces
ตามมาตรฐานมีการจำกัดการใช้งานในสื่อทั้งสองวัฒนธรรมในขณะที่เห็ดมี
แทบจะไม่ได้รับอิทธิพล เห็ดหลายแห่งได้รับการกู้คืนแต่เอื้องเฉพาะ
จากนี้ไม่ได้รับการกำหนดไว้ ระบบขจัดเสียงรบกวนของเห็ดในบทสรุป
มีลักษณะเป็นดังต่อไปนี้:อุปกรณ์และ ภาชนะ บรรจุทั้งหมดได้รับเชื้อแล้ว
และขั้นตอนการทดลองทั้งหมดที่เป็นไปตามเงื่อนไข
aseptic ในครั้งแรกอาณานิคมสีขาวบนชิ้นไม้เป็น
ตามมาตรฐานเลือกและมีลายด้วยการต่อพ่วงไปฆ่าเชื้อได้ทั้งใบและผู้ประกอบการสามารถเลือก
ซึ่งจะช่วยได้ดำเนินการโดยวัฒนธรรมแผ่นที่ 28 ◦c สำหรับ 3 วันเพื่อ
ซึ่งจะช่วยพัฒนาเมืองขึ้นใหม่ ต่อมาอาณานิคมสีขาวใหม่ได้
ที่เลือกไว้สำหรับการเตรียมตัวก่อนโซลูชันระบบกันสะเทือนแบบพร้อมด้วยน้ำเชื้อ
ซึ่งเป็น pipetted สำหรับวัฒนธรรมเพิ่มเติมโดยใช้วิธีการแผ่นกระจายตัวอยู่โดยรอบ.
หลายแห่งของอาณาจักรสีขาวนี้ได้เตรียมความพร้อมสำหรับการศึกษาเกี่ยวกับวิชาว่าด้วยรูปร่างลักษณะ
ที่นิคมพร้อมด้วยสีขาวพร้อมด้วยมากมาย mycelium mycelia
และเต็มไปด้วย conidiophores ในวัฒนธรรมเป็นโซลูชันที่เลือก.
ที่เห็ดจึงได้รับ( CW 1 ) inoculated ใน 500 มล.ทรงกรวย
กระติกน้ำ 200 มล.วัฒนธรรมประกอบด้วยโซลูชัน. หลังจากผ่านไป 3 วันนับแต่วันวัฒนธรรม
ซึ่งจะช่วยโซลูชันที่มีเชื้อราก็แบ่งออกเป็นสามใบลูกปืนหลายรูปทรงกรวยและ
โซลูชัน 200 มล.สดทางวัฒนธรรมได้ถูกเพิ่มลงใน ภาชนะ เก็บน้ำแต่ละห้อง หลังจากที่ทั้งสาม
รอบเชื้อราจากชีวมวลได้จากการเก็บข้อมูลจากการใช้โซลูชันทางวัฒนธรรม
และล้างด้วยน้ำกลั่น - deionized เพื่อลบโซลูชันคราบ
ของวัฒนธรรมที่ได้ พลังงานชีวมวลเชื้อราทำความสะอาดที่มีเตาอบแห้ง
ที่ 60 ◦c สำหรับ 48 ชั่วโมง เชื้อราจากชีวมวลน้ำให้แห้งเป็น pulverized แล้ว
ผ่านตะแกรง 0.154 มม.สำหรับการใช้งาน ในอีกด้านหนึ่งนั้นได้จากชีวมวล
สดเชื้อราบางส่วนได้ถูกใช้เพื่อการขยายสัญญาณเสียงเพิ่มเติมและวัฒนธรรม
เตรียมตัวให้พร้อมสำหรับการทดลองและ biosorption biodegradation .
2.2 แสดงลักษณะของสีขาว - ผุเห็ด
ธาตุ( C , H , n )ทำการวิเคราะห์ของเชื้อราจากชีวมวลมี
การใช้ที่ EA 112 chnelemental Security Analyzer (แบบร้อน finnigan ). N บางชนิดและ Spectra ที่บันทึกอยู่ใน 4000 - 400 ซม. - 1 ภูมิภาค สำหรับ kbrpellet
โดย nicolet บางชนิดและใช้ใน(รุ่น 560 )พร้อมด้วย
ซึ่งจะช่วยความละเอียด 1.0 ซม. - 1 . N 2.3 .การทดลอง sorption ชุดข้อมูล
ห้า pahs (สารแนฟ - ธะลีน acenaphthene fluorene phenanthrene
และ pyrene )ได้รับเลือกให้เป็น sorbates รุ่นเนื่องจากมีการแพร่หลาย
ของพวกเขาใน สภาพแวดล้อม การใช้งาน คุณสมบัติที่เลือกของ pahs มี
ซึ่งจะช่วยนำเสนอในตารางที่ 1 isotherms sorption single - solute ทั้งหมดโดยเห็ด
สีขาว - ผุ( CW 1 )ได้โดยใช้ชุดข้อมูล equilibration
เทคนิคที่อธิบายไว้ในที่อื่นๆ[ 23 ] ในบทสรุปเริ่มต้นความเข้มข้น
and Ranged Discount Promotion จาก 0.20 ถึง 25 มก./ลิตรสำหรับสารแนฟ - ธะลีน,จาก 0.002
ถึง 2.5 มก./ลิตรสำหรับ acenaphthene ,จาก 0.008 ถึง 1.7 มก./ลิตรสำหรับ fluorene ,
จาก 0.001 ถึง 1 มก./ลิตรสำหรับ phenanthrene และจาก 0.0002 เพื่อ
0.1 มก./ลิตรสำหรับ pyrene . isotherm แต่ละห้องประกอบไปด้วยความเข้มข้น 10
จุดแต่ละจุดรวมถึงการปรับเทียบและการควบคุมที่ถูกใช้งาน
ในที่ซ้ำกัน โซลูชันพื้นหลังที่ประกอบด้วย 001 Website : www . mol / L cacl2 ,
และ 200 mg / L น่าน 3 ในการยับยั้งการที่ biodegradation ของโซลูชัน.
8 - มล. vials ก็เต็มไปด้วย sorbate ด้วยโซลูชันเพื่อลด
ที่ headspace เล่มของ vials และปิดผนึกด้วยอะลูมิเนียม foillined
( Teflon tape )รอบๆเกลียวขันสกรูฝาปิดเพื่อป้องกันไม่ให้ระเหยของ sorbate ,และ
ซึ่งจะช่วยลอกในที่มืดสำหรับ 3 วันนับแต่วันที่ 25 ± 0.5 ◦c เพื่อเข้าถึงยังปรากฏสู่สมดุล.
โซลูชันที่ถูกแยกโดยผลิตที่ 4000 รอบต่อนาที
สำหรับ 15 นาทีที่เข้าสู่จุดสมดุลความเข้มข้นมีวัดโดยใช้
ซึ่งจะช่วยให้ ประสิทธิภาพ สูง chromatography ผสมน้ำยาทำความสะอาด( hplc ,, Agilent , 1200 )
ด้วย 4.6 มม. x 150 มม.ย้อนกลับขั้นตอน xdb - C 18 คอลัมน์และ
คุณสมบัติฟลูเรซ - เซ็นซอุปกรณ์ตรวจจับ( fld )โดยใช้ acetonitrile - น้ำ( V : V , 90/10 )
เป็นมือถือที่ขั้นตอนที่อัตราไหลของ 1 มล./นาที
ตามมาตรฐานแบบเฉพาะรายได้ความยาวคลื่นที่ใช้ไดนาโม)ด้วยไฟฟ้าของสารแนฟ - ธะลีน acenaphthene fluorene
phenanthrene และ pyrene เป็น 240240220244 และ 237 nm
ในขณะที่ความยาวคลื่นที่ใช้การปล่อยคลื่นตามลำดับเป็น 360360315360 และ 385 นิวตันเมตร
เพราะของ sorption น้อยที่สุดโดย vials
ซึ่งจะช่วยสร้างความเสียหายและไม่ได้โดยการระเหย biodegradation และ photodegradation
จำนวน sorbed ที่จะคำนวณโดยความแตกต่างระหว่างมวลชน
การรวมกลุ่มไม่มากนักโดยไม่ sorbent และพร้อมด้วย sorbent
ซึ่งจะช่วยในการทดลองโซลูชัน.
sorption ในการแข่งขันทั้งหมดที่เกิดจากน้ำของ phenanthrene และ
pyrene มีที่ 25 ± 0.5 ◦c Bi - solute sorption
รวมถึงการทดลอง sorption ของ pyrene พร้อมด้วย 0.5 มก./ L phenanthrene เป็น
ซึ่งจะช่วยให้ความร่วมมือและ solute sorption ของ phenanthrene พร้อมด้วย 0.05 มก./ L pyrene
เป็นความร่วมมือ - solute . ขั้นตอนที่เหลืออยู่ของ sorption
ตามมาตรฐานในการแข่งขันได้การทดลองนั้นดำเนินการทางเดียวกับที่อธิบายไว้สำหรับ
เดี่ยว - solute sorption การทดลอง.
2.4 biosorption และ biodegradation
ซึ่งจะช่วยการทดลองที่ 4 - วันวัฒนธรรมของสีขาว - ผุเห็ด( CW 1 )ได้รับจากบริสุทธิ์
วัฒนธรรมเกิดขึ้นอยู่ประมาณ 200 มล.ของมาร์ตินน้ำซุปก็สดพร่องมันเนยเป็น
ในที่ฆ่าเชื้อได้ทรงกรวยกระติกน้ำ 500 มล.,และเคยถูกใช้สำหรับ inoculating .
ห้ากลุ่มได้รับการออกแบบมา:( i )มาร์ตินน้ำซุปโดยไม่
เห็ดพิษได้เคยถูกใช้เป็น ภาพ การควบคุม( ii )ความร้อน - ฆ่าเชื้อรา Martin
ซึ่งจะช่วยน้ำซุป,ถูกใช้เป็นการควบคุมไปยังการศึกษาที่มีผลบังคับใช้ของมาร์ตินน้ำซุป
(ในทางตรงกันข้ามกับความร้อน - ฆ่าเชื้อราในที่เกิดจากน้ำโซลูชันของชุดข้อมูล
sorption ทดลอง);( iii )สดเห็ดมาร์ตินน้ำซุป(รวมสารอาหาร
โซลูชัน);( IV )สดเห็ดฆ่าเชื้อน้ำ(ไม่มีสารอาหาร);และ
( V )สดเห็ดมาร์ตินน้ำซุปโดยไม่มีน้ำตาลกลูโคสใน. ทดลองเหล่านี้
ตามมาตรฐานกลุ่มจะถูกใช้ในการสืบสวนสอบสวนการบริจาคของเงื่อนไข
และ biodegradation เพื่อการกำจัดของ pahs ภายใต้ สารอาหารอื่น
biosorption 20 - มล.โซลูชันที่มีความเข้มข้นของ 1.0 มก./ L
phenanthrene และ 0.1 มก./ลิตร pyrene ถูกเพิ่มลงใน 40 - มล. vials .
ลอกเลียนตัวอย่างได้เตรียมความพร้อมในแต่ละกลุ่มรวมถึงสาม
ทดลองและกลุ่มสองการควบคุม. หลังจากการเพิ่มของโซลูชัน
40 - มล. vials ถูกปิดผนึกไว้ด้วยอะลูมิเนียมฟอยล์ที่เรียงรายไปด้วยต้นไม้( Teflon tape )รอบๆเกลียว
สกรูฝาปิดเพื่อป้องกัน sorbate ของระเหย,แล้วลอกสีเข้ม
ซึ่งจะช่วยในการใช้งาน 7 วันที่ 25 - - ± 0.5 ◦c ด้วยผึ่งลมสำหรับ 2 นาทีแต่ละวัน. หลังจาก
7 - วันของวัฒนธรรม vials ได้ centrifuged ที่ 4000 รอบต่อนาทีสำหรับ 15 นาที
supernatant ได้ถูกลบออกแล้วและเจือจางกับบริษัทช 3 CN ( 1 : 1 )และ
pahs ตกค้างในโซลูชันที่มีการตรวจพบโดย hplc - fld. จากนั้น
ตามมาตรฐานโซลูชันใน vials เป็น decanted มากเท่าที่เป็นไปได้และ
ซึ่งจะช่วยในส่วนที่เหลือ pahs เชื้อราจากชีวมวลได้ถูกแยกออกมาโดย ultrasonication
สำหรับ 30 นาทีพร้อมด้วย 10 mlmixture ของอะซีโตนและ solvent production unit ( 1 : 1 , V : V )สำหรับ
3 อย่างต่อเนื่อง(. สารสกัดจากสาหร่ายที่มีกลุ่มและนมข้นจืด
ซึ่งจะช่วยในการซักแห้งโดยใช้ evaporator แบบหมุนเกือบและอีกครั้งที่ละลายได้ใน 5 มล.
solvent production unit ตามด้วยวิธีการทำความสะอาดที่ผ่านซิลิกา 2.5 G
คอลัมน์:เจลพร้อมด้วย 15 มล.ผสมผสานของ dichloromethane และ solvent production unit
ไม่ได้โดยการรวม 1 กรัม KH 2 po4 , 0.5 G mgso 4 7 H 2 O , 10 G กลูโคส,
และ 10 กรัมเนื้อยุ่ยเมื่อถูกเพพซินใน 1 ลิตรกลั่น - deionized น้ำสำหรับผสมน้ำยาทำความสะอาด
เขย่าวัฒนธรรม. สำหรับวัฒนธรรมแผ่น 17 สาหร่ายทะเล/ L G ถูกเพิ่มในโซลูชันผสมน้ำยาทำความสะอาดวัฒนธรรม
ซุปมาร์ตินได้ สองวัฒนธรรมสื่อที่ถูกนำไปใช้เพื่อการแยก
เห็ดจากชิ้นไม้ อัตราการเติบโตของแบคทีเรียและ actinomyces
ตามมาตรฐานมีการจำกัดการใช้งานในสื่อทั้งสองวัฒนธรรมในขณะที่เห็ดมี
แทบจะไม่ได้รับอิทธิพล เห็ดหลายแห่งได้รับการกู้คืนแต่เอื้องเฉพาะ
จากนี้ไม่ได้รับการกำหนดไว้ ระบบขจัดเสียงรบกวนของเห็ดในบทสรุป
มีลักษณะเป็นดังต่อไปนี้:อุปกรณ์และ ภาชนะ บรรจุทั้งหมดได้รับเชื้อแล้ว
และขั้นตอนการทดลองทั้งหมดที่เป็นไปตามเงื่อนไข
aseptic ในครั้งแรกอาณานิคมสีขาวบนชิ้นไม้เป็น
ตามมาตรฐานเลือกและมีลายด้วยการต่อพ่วงไปฆ่าเชื้อได้ทั้งใบและผู้ประกอบการสามารถเลือก
ซึ่งจะช่วยได้ดำเนินการโดยวัฒนธรรมแผ่นที่ 28 ◦c สำหรับ 3 วันเพื่อ
ซึ่งจะช่วยพัฒนาเมืองขึ้นใหม่ ต่อมาอาณานิคมสีขาวใหม่ได้
ที่เลือกไว้สำหรับการเตรียมตัวก่อนโซลูชันระบบกันสะเทือนแบบพร้อมด้วยน้ำเชื้อ
ซึ่งเป็น pipetted สำหรับวัฒนธรรมเพิ่มเติมโดยใช้วิธีการแผ่นกระจายตัวอยู่โดยรอบ.
หลายแห่งของอาณาจักรสีขาวนี้ได้เตรียมความพร้อมสำหรับการศึกษาเกี่ยวกับวิชาว่าด้วยรูปร่างลักษณะ
ที่นิคมพร้อมด้วยสีขาวพร้อมด้วยมากมาย mycelium mycelia
และเต็มไปด้วย conidiophores ในวัฒนธรรมเป็นโซลูชันที่เลือก.
ที่เห็ดจึงได้รับ( CW 1 ) inoculated ใน 500 มล.ทรงกรวย
กระติกน้ำ 200 มล.วัฒนธรรมประกอบด้วยโซลูชัน. หลังจากผ่านไป 3 วันนับแต่วันวัฒนธรรม
ซึ่งจะช่วยโซลูชันที่มีเชื้อราก็แบ่งออกเป็นสามใบลูกปืนหลายรูปทรงกรวยและ
โซลูชัน 200 มล.สดทางวัฒนธรรมได้ถูกเพิ่มลงใน ภาชนะ เก็บน้ำแต่ละห้อง หลังจากที่ทั้งสาม
รอบเชื้อราจากชีวมวลได้จากการเก็บข้อมูลจากการใช้โซลูชันทางวัฒนธรรม
และล้างด้วยน้ำกลั่น - deionized เพื่อลบโซลูชันคราบ
ของวัฒนธรรมที่ได้ พลังงานชีวมวลเชื้อราทำความสะอาดที่มีเตาอบแห้ง
ที่ 60 ◦c สำหรับ 48 ชั่วโมง เชื้อราจากชีวมวลน้ำให้แห้งเป็น pulverized แล้ว
ผ่านตะแกรง 0.154 มม.สำหรับการใช้งาน ในอีกด้านหนึ่งนั้นได้จากชีวมวล
สดเชื้อราบางส่วนได้ถูกใช้เพื่อการขยายสัญญาณเสียงเพิ่มเติมและวัฒนธรรม
เตรียมตัวให้พร้อมสำหรับการทดลองและ biosorption biodegradation .
2.2 แสดงลักษณะของสีขาว - ผุเห็ด
ธาตุ( C , H , n )ทำการวิเคราะห์ของเชื้อราจากชีวมวลมี
การใช้ที่ EA 112 chnelemental Security Analyzer (แบบร้อน finnigan ). N บางชนิดและ Spectra ที่บันทึกอยู่ใน 4000 - 400 ซม. - 1 ภูมิภาค สำหรับ kbrpellet
โดย nicolet บางชนิดและใช้ใน(รุ่น 560 )พร้อมด้วย
ซึ่งจะช่วยความละเอียด 1.0 ซม. - 1 . N 2.3 .การทดลอง sorption ชุดข้อมูล
ห้า pahs (สารแนฟ - ธะลีน acenaphthene fluorene phenanthrene
และ pyrene )ได้รับเลือกให้เป็น sorbates รุ่นเนื่องจากมีการแพร่หลาย
ของพวกเขาใน สภาพแวดล้อม การใช้งาน คุณสมบัติที่เลือกของ pahs มี
ซึ่งจะช่วยนำเสนอในตารางที่ 1 isotherms sorption single - solute ทั้งหมดโดยเห็ด
สีขาว - ผุ( CW 1 )ได้โดยใช้ชุดข้อมูล equilibration
เทคนิคที่อธิบายไว้ในที่อื่นๆ[ 23 ] ในบทสรุปเริ่มต้นความเข้มข้น
and Ranged Discount Promotion จาก 0.20 ถึง 25 มก./ลิตรสำหรับสารแนฟ - ธะลีน,จาก 0.002
ถึง 2.5 มก./ลิตรสำหรับ acenaphthene ,จาก 0.008 ถึง 1.7 มก./ลิตรสำหรับ fluorene ,
จาก 0.001 ถึง 1 มก./ลิตรสำหรับ phenanthrene และจาก 0.0002 เพื่อ
0.1 มก./ลิตรสำหรับ pyrene . isotherm แต่ละห้องประกอบไปด้วยความเข้มข้น 10
จุดแต่ละจุดรวมถึงการปรับเทียบและการควบคุมที่ถูกใช้งาน
ในที่ซ้ำกัน โซลูชันพื้นหลังที่ประกอบด้วย 001 Website : www . mol / L cacl2 ,
และ 200 mg / L น่าน 3 ในการยับยั้งการที่ biodegradation ของโซลูชัน.
8 - มล. vials ก็เต็มไปด้วย sorbate ด้วยโซลูชันเพื่อลด
ที่ headspace เล่มของ vials และปิดผนึกด้วยอะลูมิเนียม foillined
( Teflon tape )รอบๆเกลียวขันสกรูฝาปิดเพื่อป้องกันไม่ให้ระเหยของ sorbate ,และ
ซึ่งจะช่วยลอกในที่มืดสำหรับ 3 วันนับแต่วันที่ 25 ± 0.5 ◦c เพื่อเข้าถึงยังปรากฏสู่สมดุล.
โซลูชันที่ถูกแยกโดยผลิตที่ 4000 รอบต่อนาที
สำหรับ 15 นาทีที่เข้าสู่จุดสมดุลความเข้มข้นมีวัดโดยใช้
ซึ่งจะช่วยให้ ประสิทธิภาพ สูง chromatography ผสมน้ำยาทำความสะอาด( hplc ,, Agilent , 1200 )
ด้วย 4.6 มม. x 150 มม.ย้อนกลับขั้นตอน xdb - C 18 คอลัมน์และ
คุณสมบัติฟลูเรซ - เซ็นซอุปกรณ์ตรวจจับ( fld )โดยใช้ acetonitrile - น้ำ( V : V , 90/10 )
เป็นมือถือที่ขั้นตอนที่อัตราไหลของ 1 มล./นาที
ตามมาตรฐานแบบเฉพาะรายได้ความยาวคลื่นที่ใช้ไดนาโม)ด้วยไฟฟ้าของสารแนฟ - ธะลีน acenaphthene fluorene
phenanthrene และ pyrene เป็น 240240220244 และ 237 nm
ในขณะที่ความยาวคลื่นที่ใช้การปล่อยคลื่นตามลำดับเป็น 360360315360 และ 385 นิวตันเมตร
เพราะของ sorption น้อยที่สุดโดย vials
ซึ่งจะช่วยสร้างความเสียหายและไม่ได้โดยการระเหย biodegradation และ photodegradation
จำนวน sorbed ที่จะคำนวณโดยความแตกต่างระหว่างมวลชน
การรวมกลุ่มไม่มากนักโดยไม่ sorbent และพร้อมด้วย sorbent
ซึ่งจะช่วยในการทดลองโซลูชัน.
sorption ในการแข่งขันทั้งหมดที่เกิดจากน้ำของ phenanthrene และ
pyrene มีที่ 25 ± 0.5 ◦c Bi - solute sorption
รวมถึงการทดลอง sorption ของ pyrene พร้อมด้วย 0.5 มก./ L phenanthrene เป็น
ซึ่งจะช่วยให้ความร่วมมือและ solute sorption ของ phenanthrene พร้อมด้วย 0.05 มก./ L pyrene
เป็นความร่วมมือ - solute . ขั้นตอนที่เหลืออยู่ของ sorption
ตามมาตรฐานในการแข่งขันได้การทดลองนั้นดำเนินการทางเดียวกับที่อธิบายไว้สำหรับ
เดี่ยว - solute sorption การทดลอง.
2.4 biosorption และ biodegradation
ซึ่งจะช่วยการทดลองที่ 4 - วันวัฒนธรรมของสีขาว - ผุเห็ด( CW 1 )ได้รับจากบริสุทธิ์
วัฒนธรรมเกิดขึ้นอยู่ประมาณ 200 มล.ของมาร์ตินน้ำซุปก็สดพร่องมันเนยเป็น
ในที่ฆ่าเชื้อได้ทรงกรวยกระติกน้ำ 500 มล.,และเคยถูกใช้สำหรับ inoculating .
ห้ากลุ่มได้รับการออกแบบมา:( i )มาร์ตินน้ำซุปโดยไม่
เห็ดพิษได้เคยถูกใช้เป็น ภาพ การควบคุม( ii )ความร้อน - ฆ่าเชื้อรา Martin
ซึ่งจะช่วยน้ำซุป,ถูกใช้เป็นการควบคุมไปยังการศึกษาที่มีผลบังคับใช้ของมาร์ตินน้ำซุป
(ในทางตรงกันข้ามกับความร้อน - ฆ่าเชื้อราในที่เกิดจากน้ำโซลูชันของชุดข้อมูล
sorption ทดลอง);( iii )สดเห็ดมาร์ตินน้ำซุป(รวมสารอาหาร
โซลูชัน);( IV )สดเห็ดฆ่าเชื้อน้ำ(ไม่มีสารอาหาร);และ
( V )สดเห็ดมาร์ตินน้ำซุปโดยไม่มีน้ำตาลกลูโคสใน. ทดลองเหล่านี้
ตามมาตรฐานกลุ่มจะถูกใช้ในการสืบสวนสอบสวนการบริจาคของเงื่อนไข
และ biodegradation เพื่อการกำจัดของ pahs ภายใต้ สารอาหารอื่น
biosorption 20 - มล.โซลูชันที่มีความเข้มข้นของ 1.0 มก./ L
phenanthrene และ 0.1 มก./ลิตร pyrene ถูกเพิ่มลงใน 40 - มล. vials .
ลอกเลียนตัวอย่างได้เตรียมความพร้อมในแต่ละกลุ่มรวมถึงสาม
ทดลองและกลุ่มสองการควบคุม. หลังจากการเพิ่มของโซลูชัน
40 - มล. vials ถูกปิดผนึกไว้ด้วยอะลูมิเนียมฟอยล์ที่เรียงรายไปด้วยต้นไม้( Teflon tape )รอบๆเกลียว
สกรูฝาปิดเพื่อป้องกัน sorbate ของระเหย,แล้วลอกสีเข้ม
ซึ่งจะช่วยในการใช้งาน 7 วันที่ 25 - - ± 0.5 ◦c ด้วยผึ่งลมสำหรับ 2 นาทีแต่ละวัน. หลังจาก
7 - วันของวัฒนธรรม vials ได้ centrifuged ที่ 4000 รอบต่อนาทีสำหรับ 15 นาที
supernatant ได้ถูกลบออกแล้วและเจือจางกับบริษัทช 3 CN ( 1 : 1 )และ
pahs ตกค้างในโซลูชันที่มีการตรวจพบโดย hplc - fld. จากนั้น
ตามมาตรฐานโซลูชันใน vials เป็น decanted มากเท่าที่เป็นไปได้และ
ซึ่งจะช่วยในส่วนที่เหลือ pahs เชื้อราจากชีวมวลได้ถูกแยกออกมาโดย ultrasonication
สำหรับ 30 นาทีพร้อมด้วย 10 mlmixture ของอะซีโตนและ solvent production unit ( 1 : 1 , V : V )สำหรับ
3 อย่างต่อเนื่อง(. สารสกัดจากสาหร่ายที่มีกลุ่มและนมข้นจืด
ซึ่งจะช่วยในการซักแห้งโดยใช้ evaporator แบบหมุนเกือบและอีกครั้งที่ละลายได้ใน 5 มล.
solvent production unit ตามด้วยวิธีการทำความสะอาดที่ผ่านซิลิกา 2.5 G
คอลัมน์:เจลพร้อมด้วย 15 มล.ผสมผสานของ dichloromethane และ solvent production unit
การแปล กรุณารอสักครู่..
ภาษาอื่น ๆ
การสนับสนุนเครื่องมือแปลภาษา: กรีก, กันนาดา, กาลิเชียน, คลิงออน, คอร์สิกา, คาซัค, คาตาลัน, คินยารวันดา, คีร์กิซ, คุชราต, จอร์เจีย, จีน, จีนดั้งเดิม, ชวา, ชิเชวา, ซามัว, ซีบัวโน, ซุนดา, ซูลู, ญี่ปุ่น, ดัตช์, ตรวจหาภาษา, ตุรกี, ทมิฬ, ทาจิก, ทาทาร์, นอร์เวย์, บอสเนีย, บัลแกเรีย, บาสก์, ปัญจาป, ฝรั่งเศส, พาชตู, ฟริเชียน, ฟินแลนด์, ฟิลิปปินส์, ภาษาอินโดนีเซี, มองโกเลีย, มัลทีส, มาซีโดเนีย, มาราฐี, มาลากาซี, มาลายาลัม, มาเลย์, ม้ง, ยิดดิช, ยูเครน, รัสเซีย, ละติน, ลักเซมเบิร์ก, ลัตเวีย, ลาว, ลิทัวเนีย, สวาฮิลี, สวีเดน, สิงหล, สินธี, สเปน, สโลวัก, สโลวีเนีย, อังกฤษ, อัมฮาริก, อาร์เซอร์ไบจัน, อาร์เมเนีย, อาหรับ, อิกโบ, อิตาลี, อุยกูร์, อุสเบกิสถาน, อูรดู, ฮังการี, ฮัวซา, ฮาวาย, ฮินดี, ฮีบรู, เกลิกสกอต, เกาหลี, เขมร, เคิร์ด, เช็ก, เซอร์เบียน, เซโซโท, เดนมาร์ก, เตลูกู, เติร์กเมน, เนปาล, เบงกอล, เบลารุส, เปอร์เซีย, เมารี, เมียนมา (พม่า), เยอรมัน, เวลส์, เวียดนาม, เอสเปอแรนโต, เอสโทเนีย, เฮติครีโอล, แอฟริกา, แอลเบเนีย, โคซา, โครเอเชีย, โชนา, โซมาลี, โปรตุเกส, โปแลนด์, โยรูบา, โรมาเนีย, โอเดีย (โอริยา), ไทย, ไอซ์แลนด์, ไอร์แลนด์, การแปลภาษา.
- play football
- ลูกผักชี
- A high level of consumption of red chili
- continuation inจิตวิทยาเกสตัลต์ psycholo
- เมื่อพิจารณาแล้วจะเห็นว่าเป็นเอกสารที่สา
- ทับทิมเมื่อกล่าวถึง "ทับทิม" อาจดูเป็นผล
- The celebratory customs associated in va
- เพราะบริษัทของคุณตรงกับความสามรถที่ฉันทำ
- มันจะส่งผลเสียแก่เด็ก
- i never becomes so emotional attachments
- หนังเรื่องนี้มีครบทุกรสทั้ง
- Specification
- Cnidarians are carnivores that use tenta
- ปีศาจแดง'' แมนเชสเตอร์ ยูไนเต็ด ทีมดังจา
- due to
- are you sad
- Things are rough around here, but I thin
- หกโมงครึ่ง
- The polyp stage, often a colony of inter
- Now I'm in Tokyo
- กระเพรา
- What time do you want to
- I understand you I'm not angry.
- หนังเรื่องนี้มีครบทุกรสทั้งรัก
