Plates were coated with BS1-IgG dil

Plates were coated with BS1-IgG diluted to 5 mg m lÿ1 in 50 mmol lÿ1 carbonate bicarbonate buffer, pH 9
6, and incubated for 3 h. Plates were blocked with 1% (w/v) BSA in carbonate bicarbonate buffer (200 ml per well) and incubated
for 1 h. Samples, standards and marker wells (i.e. a blank (PBST) and a positive control containing a BS1 Lform suspension at a protein concentration of 1
7 mg m lÿ1) were loaded in duplicate. After overnight incubation at 4 C, 0
3 mg m lÿ1 BS1-IgG-biotin was added and incubated for 3 h. This was followed by streptavidin-alkaline phosphatase
(Amersham Pharmacia Biotech UK, Little Chal font, UK) diluted to 1/1000 and incubated for 1 h.
The substrate, 2 mg mlÿ1 p-nitrophenol phosphate (Sigma,
Poole, UK) in 0
1 mol l
ÿ1 glycine buffer with 1 mmol l
ÿ1
MgCl2 and 1 mmol l
ÿ1 ZnCl2, pH 10
4, was added. The
reaction was developed in the dark at room temperature for
approximately 20±40 min and plates then read at 405 nm
(MRX Microplate reader; KPL). The positive/negative
threshold was the mean absorbance of control wells ‡4
standard deviations (C ‡ 4 S.D.; Sutula et al. 1986).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

แผ่นถูกเคลือบ ด้วย BS1 IgG เจือจางการ lÿ1 ม 5 มิลลิกรัมใน 50 โมล lÿ1 คาร์บอเนตไบคาร์บอเนตบัฟเฟอร์ pH 9 6 และได้รับการกกสำหรับบล็อกแบบ 1% (w/v) บีเอสเอในบัฟเฟอร์ไบคาร์บอเนตคาร์บอเนต (200 มิลลิลิตรต่อ) และได้รับการกก 3 h. แผ่นสำหรับตัวอย่างที่ 1 h. มาตรฐานและเครื่องหมายหลุม (เช่นว่างเปล่า (PBST) และควบคุมบวกที่ประกอบด้วยการระงับ BS1 Lform ที่ความเข้มข้นของโปรตีนของ lÿ1 m 7 มก. 1) ถูกโหลดในรายการซ้ำ หลังจากบ่มข้ามคืนที่ 4 C, 0 lÿ1 m 3 มก.เพิ่ม BS1-IgG-ไบโอติน และรับการกก 3 ชม แล้ว streptavidin อัลคาไลน์ฟอสฟา(Amersham ฟาร์ชีวภาพ UK, Chal น้อยอักษร UK) เจือจาง 1/1000 และ 1 ชม.ได้รับการกกพื้นผิว ฟอสเฟต p-nitrophenol mlÿ1 2 มิลลิกรัม (Sigmaพูล สหราชอาณาจักร) ใน 0 1 mol lบัฟเฟอร์ glycine ÿ1 กับ 1 มิลลิโมลต่อลิตรÿ1MgCl2 และ 1 มิลลิโมลต่อลิตรÿ1 ZnCl2, pH 10 4 ถูก การปฏิกิริยาที่ได้รับการพัฒนาในมืดที่อุณหภูมิห้องประมาณ 20±40 นาทีและแผ่นอ่านแล้วที่ 405 nm(อ่าน MRX Microplate KPL) บวกเป็นค่าลบเกณฑ์คือ ค่าเฉลี่ยของหลุมควบคุม 4ค่าเบี่ยงเบนมาตรฐาน (C 4 S.D. Sutula et al. 1986)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

แผ่นถูกเคลือบด้วย BS1-IgG ลดลงเหลือ 5 มิลลิกรัม M lÿ1ใน 50 มิลลิโมลlÿ1บัฟเฟอร์ไบคาร์บอเนตคาร์บอเนตค่า pH 9 6 และบ่มเป็นเวลา 3 ชั่วโมง แผ่นถูกบล็อกด้วย 1% (w / v) บีเอสเอในบัฟเฟอร์ไบคาร์บอเนตคาร์บอเนต (200 มิลลิลิตรต่อกัน) และบ่ม
เป็นเวลา 1 ชั่วโมง ตัวอย่างมาตรฐานและเครื่องหมายหลุม (เช่นว่าง (PBST) และการควบคุมในเชิงบวกที่มีการระงับ BS1 Lform ที่มีความเข้มข้นของโปรตีน 1 7 มก. ม. lÿ1) ได้รับการโหลดในที่ซ้ำกัน หลังจากการบ่มค้างคืนที่ 4? C, 0? 3 มก. ม. lÿ1 BS1-IgG-ไบโอตินได้รับการเพิ่มและบ่มเป็นเวลา 3 ชั่วโมง นี้ตามมาด้วยสเตอัลคาไลน์ฟอสฟา
(Amersham Pharmacia ไบโอเทคสหราชอาณาจักรอักษรเล็ก ๆ น้อย ๆ Chal สหราชอาณาจักร) ลดลงเหลือ 1/1000 และบ่มเป็นเวลา 1 ชั่วโมง.
สารตั้งต้น, 2 มิลลิกรัมmlÿ1 P-nitrophenol ฟอสเฟต (Sigma,
พูล, สหราชอาณาจักร) ใน 0 ? 1 mol L
Y1 บัฟเฟอร์ glycine 1 มิลลิโมลต่อลิตร
Y1
MgCl2 และ 1 มิลลิโมลต่อลิตร
Y1 ZnCl2 ค่า pH 10? 4 ถูกเพิ่มเข้ามา
ปฏิกิริยาได้รับการพัฒนาในความมืดที่อุณหภูมิห้อง
ประมาณ 20 ± 40 นาทีและแผ่นแล้วอ่านที่ 405 นาโนเมตร
(MRX ไมโครอ่าน; KPL) บวก / เป็นลบ
เกณฑ์การดูดกลืนแสงเป็นค่าเฉลี่ยของการควบคุมหลุม ?? 4
ส่วนเบี่ยงเบนมาตรฐาน (C ?? 4 SD; Sutula et al, 1986).

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

จานถูกเคลือบด้วย bs1 IgG ประมาณ 5 mg M L ÿ 1 ใน 50 mmol l ÿคาร์บอเนต ไบคาร์บอเนตบัฟเฟอร์ pH 1 , 96 และบ่ม 3 . จานที่ถูกบล็อกด้วย 1% ( w / v ) คาร์บอเนต ไบคาร์บอเนตบัฟเฟอร์ ( ขนาด 200 มล. ) ต่อด้วย ) และ1 . ตัวอย่าง มาตรฐานและเครื่องหมายเวลส์ ( คือว่าง ( pbst ) และบวกกับการควบคุมที่มี bs1 lform แขวนลอยที่ความเข้มข้นของสารละลายโปรตีน 17 mg M L ÿ 1 ) ถูกโหลดในที่ซ้ำกัน หลังจากคืนบ่มที่อุณหภูมิ 4 C , 3 mg M L ÿ 1 bs1 IgG biotin คือเพิ่มและบ่มเป็นเวลา 3 ชั่วโมง นี้ตามด้วย streptavidin อัลคาไลน์ ฟอสฟาเตส( ที่มุ่งมั่นเทคโนโลยีชีวภาพอังกฤษหน่อยค่ะ font , UK ) ประมาณ 1 / 1000 และบ่มเป็นเวลา 1 ชั่วโมงพื้นผิว , 2 มิลลิกรัมต่อมิลลิลิตรÿ 1 p-nitrophenol ฟอสเฟต ( ซิกม่าพูล , UK ) ใน 1 โมล ล.ÿ 1 ที่มีบัฟเฟอร์ 1 mmol lÿ 1ชุด 1 mmol lÿ zncl2 อ 1 , 104 , เพิ่ม ที่ปฏิกิริยาที่ถูกพัฒนาขึ้นในที่มืดที่อุณหภูมิห้องประมาณ 20 ± 40 นาทีและแผ่นแล้วอ่านที่ 405 nm( MRX พื้นที่ภาคเหนือของประเทศไทยอ่าน ; ชิ้น ) บวก / ลบเกณฑ์ก็หมายถึงค่าควบคุม‡ 4 บ่อส่วนเบี่ยงเบนมาตรฐาน ( S.D . ‡ 4 C ; sutula et al . 1986 )