was added to the transfection reagent/DNA mixture and kept at room tem การแปล - was added to the transfection reagent/DNA mixture and kept at room tem ไทย วิธีการพูด

was added to the transfection reage

was added to the transfection reagent/DNA mixture and kept at room temperature for 40 min before added to the cell monolayer. The transfection efficiency and the intensity of GFP in each cell were recorded by flow cytometry analysis and fluorescent microscopy at 24-hour post transfection.
Flow Cytometry Analysis
Transfected cells were washed with PBS and harvested in 1 mL of PBS. The signal of eGFP was then analyzed at least 10000 cells using FL-1 filter by FACS Calibur flow cytometer (BD Biosciences, MA, USA).
Preparation of Liposome
The fluorescent SRB dye-loaded liposomes were prepared by a hydration/freezing and thawing/extrusion method [24]. The mixture of DPPC, DPPG, and cholesterol in a molar ratio of 45:5:50 was dissolved in a solution of 6 ml chloroform, 1 ml methanol, and dried in a rotary evaporator. The dried lipid film was hydrated by the addition of 3 ml of 0.15 M SRB solution (in 0.02 M HEPES, pH 7.5, osmolality 530 mmol/kg). The lipid solution was processed with 5 freeze and thaw cycles, and then dependent on the final size of the liposomes desired, the liposomes were sequentially extruded by passing through a mini high- pressure extruder (Avanti Polar Lipids, Inc., AL, USA) with different pore-sizes (400, 200, and then 100 mm) of polycarbonate membrane (Whatman, NJ, USA). Unencapsulated SRB was removed by gel filtration using a Sephadex G-50 column with Tris-buffered saline (TBS: 0.02 M Tris with 0.15 M NaCl, 0.01% NaN3, pH 7.5) containing sucrose (osmolality 530 mmol/kg). Finally, the size of the liposomes was confirmed by a dynamic light-scattering measurement using a nanosizer 90ZS (Malvern Instruments, Worcestershire, UK).
Treatment of Liposome with Curcumin
Liposome diluted in TBS (50 mM Tris base and 150 mM NaCl, osmolality 530 mmol/kg) was incubated with various concentrations of curcumin, DMSO (negative control), or 15 mM n-octylglucoside (n-OG), a detergent serving as positive control, at room temperature for one hour. The leakage of Sulforhodamine B (SRB) fluorescence was detected by Spectra- Max M2e Microplate Reader (Molecular Devices, Inc., California, United States) at excitation wavelength of 490 nm.
To test whether influenza virus can reverse the curcumin’s effect on liposome, we added 2 different doses of influenza virus particles (2000 PFU and 10 000 PFU) to curcumin and SRB-loaded liposomes, and then detected fluorescence after 1 h incubation.
Time Course Assay of Curcumin Pre-treatment
PR8 virus particles (2000 pfu) were mixed with 30 mM of curcumin in 200 ml. At 0, 5, 10, 20, 40, 60 min after curcumin treatment, an aliquot of 5 ml was added to MDCK cells in a well containing 495 ml infectious medium to make the curcumin concentration below viral inhibitory effect (i.e. 0.3 mM). The infectivity of PR8 was determined by the standard plaque assay to determine the infectivity of influenza virus.
Characterization of Curcumin Effect on Plaque Formation Ability
PR8 virus particles (2000 pfu) were pre-incubated with 30 mM (unless otherwise stated) of curcumin at room temperature for one hour. Subsequently, the curcumin-virus mixture was diluted with fresh infectious medium to the concentration of 6 mM, 3 mM,
1.5 mM and kept at room temperature for one hour followed by the standard plaque assay.
Replication of Curcumin-treated Viruses in Embryonated Eggs
The experiment protocol was approved by the Committee on the Ethics of Animal Experiments of National Chung Hsing University (Approval No: 97-91). The Embryonated hen’s eggs were purchased from the Livestock Research Institute, Chunan, Taiwan and incubated in hatchery until 10-day-old. Fifty or 5000 pfu of PR8 viruses were incubated with 30 mM of curcumin in a total volume of 500 ml infectious medium. One hour after incubation, inoculums were injected into the allantoic sac of embryonated hen’s eggs. Treated eggs were incubated in 37uC incubator for 18 or 24 hours, the yield of virus progeny was determined by HA test.
Statistical Analysis
All data were calculated by Microsoft Excel. Results from at least three independent experiments were reported as mean values 6 mean of standard deviations (S.E.M.).
Results
Curcumin blocked HA Activity of Newcastle Disease Virus (NDV)
In our previous study, curcumin treatment abrogated the HA activity of the IAV subtypes H1N1 and H6N1 [10]. In this study, we treated paramyxovirus NDV, another virus that displays HA activity, with curcumin to determine if its effect is specific to the influenza virus. We incubated 4 HA units of NDV with various concentrations of curcumin for 60 min at room temperature and then assessed red blood cell (RBC) agglutination. Results showed that curcumin pretreatment (at concentrations of 31.2 mM or higher) inhibited the binding of NDV to chicken RBCs, as indicated by the spot-like appearance of non-hemagglutinated cells (Fig. 1A).
Curcumin Inhibits Plaque Formation in Enveloped Viruses
It was indicated that curcumin modifies the lipid bilayer and influences membrane protein function [22]. The viral envelope is membranous structure; therefore, a time-of-drug addition test was employed to determine whether curcumin can also inhibit other enveloped viruses. Accordingly to the cytotoxicity test, 30 mM of curcumin slightly inhibit the growth of vero cells (Fig. S1), and therefore 10 mM curcumin was used for this assay. As indicated in Fig. 1B, including of curcumin throughout the time of infection (i.e. full-time treatment) completely abrogated the infectivity of two flaviviruses, JEV and Dengue (type 2; DV-II). Noticeably, addition of curcumin upon the viral attachment (i.e. co-treatment) pro- nouncedly inhibited both JEV and DV-II plaque formation; to a similar extent of full-time treatment. In contrast, no effect was observed, when curcumin was added after viral entry. These findings are consistent with the effect on influenza virus that curcumin blocks the virus infectivity by direct or indirect interfering the function of envelope protein. Since HA activity of NDV was also inhibited by curcumin, we then wonder whether curcumin generally affects the infectivity of enveloped viruses.
Since IAV, NDV and flavivirus analyzed in this assay were all RNA viruses, one enveloped DNA virus, pseudorabies virus (PRV swine herpes virus) was then used to test the possibility. The effect of curcumin on the infectivity of enveloped viruses was evaluated by the plaque formation assay. As shown in Fig. 2A, as with that of
0/5000
จาก: -
เป็น: -
ผลลัพธ์ (ไทย) 1: [สำเนา]
คัดลอก!
เพิ่มส่วนผสม transfection รีเอเจนต์/ดีเอ็นเอ และเก็บไว้ที่อุณหภูมิห้องสำหรับ 40 นาทีก่อนเพิ่ม monolayer เซลล์ บันทึกประสิทธิภาพ transfection และความเข้มของ GFP ในแต่ละเซลล์ โดยเซลล์การวิเคราะห์การไหล และ microscopy เรืองแสงตลอด 24 ชั่วโมงที่ลงรายการบัญชีการ transfection
วิเคราะห์เซลล์ไหล
Transfected เซลล์ถูกล้าง ด้วย PBS และเก็บเกี่ยวผลผลิต 1 mL ของ PBS แล้วถูกวิเคราะห์สัญญาณของ eGFP น้อย 10000 เซลล์ใช้ FL 1 กรอง ด้วย FACS Calibur กระแส cytometer (เวลาออก BD, MA, USA) .
เตรียม Liposome
SRB ฟลูออเรสโหลดย้อม liposomes ถูกเตรียม โดยวิธีการไล่น้ำ/แช่แข็งและบริการรับ thawing อัดเล็ก [24] ส่วนผสมของ DPPC, DPPG และไขมันในอัตราส่วนสบของ 45:5:50 ถูกละลายในโซลูชันของคลอโรฟอร์ม 6 ml เมทานอล 1 ml และแห้งใน evaporator โรตารี่ ฟิล์มแห้งไขมันถูก hydrated ด้านนอก 3 ml ของ SRB 0.15 M (ใน 0.02 M HEPES, pH 7.5, osmolality 530 mmol/kg) การแก้ปัญหากระบวนประมวลผล 5 ตรึงรอบ thaw แล้วขึ้นอยู่กับขนาดสุดท้ายของ liposomes ต้อง liposomes ถูก extruded โดยผ่านการ extruder ความดันสูงขนาดเล็ก (เรียนโรสขั้วโลกโครงการ Inc., AL สหรัฐอเมริกา) มีขนาดรูพรุนที่แตกต่างกันตามลำดับ (400, 200 และ 100 มม.) ของเมมเบรนโพลีคาร์บอเนต (Whatman, NJ สหรัฐอเมริกา) Unencapsulated SRB ถูกเอาออก โดยคอลัมน์ Sephadex G-50 ด้วยน้ำเกลือที่ทริสเรทติ้ง buffered กรองเจ (TBS: 0.02 M ตรีกับ 0.15 M NaCl, 0.01% NaN3 ค่า pH 75) ประกอบด้วยซูโครส (osmolality 530 mmol/kg) สุดท้าย ขนาดของ liposomes ได้รับการยืนยัน โดยการวัดแสง scattering แบบไดนามิกที่ใช้ nanosizer 90ZS (เครื่องมัลเวิร์น วูสเตอร์เชอร์ UK) .
รักษาของ Liposome กับเคอร์
Liposome ผสมใน TBS (ฐานตรี 50 มม.และ 150 มม. NaCl, osmolality 530 mmol/kg) เป็น incubated กับความเข้มข้นต่าง ๆ ของเคอร์คูมิน DMSO (ลบควบคุม), หรือ 15 มม. n-octylglucoside (n-ออก), ผงซักฟอกที่เสิร์ฟเป็นบวกควบคุม ที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลาหนึ่งชั่วโมง การรั่วไหลของ fluorescence Sulforhodamine B (SRB) พบสูงสุดแรมสเป็คตรา M2e Microplate Reader (โมเลกุลอุปกรณ์ Inc. แคลิฟอร์เนีย สหรัฐอเมริกา) ที่ความยาวคลื่นในการกระตุ้นของ 490 nm.
การทดสอบไวรัสไข้หวัดใหญ่สามารถย้อนกลับผลของเคอร์คูมิน liposome เราเพิ่มปริมาณ 2 แตกต่างกันของอนุภาคไวรัสไข้หวัดใหญ่ (2000 PFU และ PFU 10 000) เคอร์คูมินและโหลด SRB liposomes และตรวจพบ fluorescence หลัง 1 h คณะทันตแพทยศาสตร์แล้ว
เวลาหลักสูตรวิเคราะห์ของเคอร์คูมินก่อนรักษา
อนุภาคไวรัส PR8 (2000 pfu) ถูกผสมกับ 30 มม.ของเคอร์ใน 200 ml ที่ 0, 5, 10, 20, 40 60 นาทีหลังจากรักษาเคอร์คูมิน เป็นส่วนลงตัวของ 5 ml ถูกเพิ่มไปยังเซลล์ MDCK ในกลางติดเชื้อ 495 ml มีดีให้เคอร์คูมินความเข้มข้นต่ำกว่าผลลิปกลอสไขไวรัส (เช่น 0.3 มิลลิเมตร) Infectivity ของ PR8 กำหนด โดยวิเคราะห์หินปูนมาตรฐานกำหนด infectivity ของไวรัสไข้หวัดใหญ่
จำแนกของเคอร์คูมินมีผลต่อความสามารถในการก่อตัวของหินปูน
อนุภาคไวรัส PR8 (2000 pfu) ได้ก่อน incubated 30 มม. (เว้นแต่ระบุไว้เป็นอย่างอื่น) ของเคอร์คูมินที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลาหนึ่งชั่วโมง ในเวลาต่อมา ส่วนผสมเคอร์คูมินไวรัสถูกผสมกับกลางติดเชื้อสดเพื่อความเข้มข้น 6 มม. 3 มม.,
1.5 มม. และเก็บไว้ที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลาหนึ่งชั่วโมงตาม ด้วยการวิเคราะห์หินปูนมาตรฐาน
จำลองแบบเคอร์คูมินถือว่าไวรัสในไข่ Embryonated
โพรโทคอลการทดลองได้รับการอนุมัติ โดยคณะกรรมการจริยธรรมของสัตว์ Experiments ของชาติ Chung Hsing มหาวิทยาลัย (ไม่มีการอนุมัติ: 97-91) ไข่ของไก่ Embryonated ที่ซื้อจาก สถาบันการวิจัยปศุสัตว์ Chunan ไต้หวัน และ incubated ในโรงเพาะจนถึงอายุ 10 วัน สิบหรือ 5000 pfu ไวรัส PR8 ถูก incubated กับ 30 มม.ของเคอร์คูมินในปริมาณรวมของกลางติดเชื้อ 500 ml หนึ่งชั่วโมงหลังจากบ่ม inoculums ถูกฉีดเข้าไปใน sac allantoic ของไข่ไก่ embryonated ไข่บำบัดถูก incubated ในการบ่มเพาะวิสาหกิจ 37uC 18 หรือ 24 ชั่วโมง ผลตอบแทนของลูกหลานที่ไวรัสถูกกำหนด โดย test. ฮา
วิเคราะห์สถิติ
ข้อมูลทั้งหมดที่ถูกคำนวณ ด้วย Microsoft Excel มีรายงานผลจากการทดลองอิสระน้อยสามเป็นค่าเฉลี่ยค่าเฉลี่ยส่วนเบี่ยงเบนมาตรฐาน (S.E.M.) 6
ผล
เคอร์บล็อกฮากิจกรรมของนิวคาสเซิลโรคไวรัส (NDV)
ในการศึกษาก่อนหน้านี้ของเรา เคอร์คูมินรักษา abrogated กิจกรรม HA ของ subtypes IAV H1N1 และ H6N1 [10] ในการศึกษานี้ เรารับ paramyxovirus NDV ไวรัสอื่นที่แสดงฮากิจกรรม เคอร์คูมินเพื่อดูว่า มีผลเฉพาะไวรัสไข้หวัดใหญ่ เรา incubated 4 ฮาหน่วย NDV กับความเข้มข้นต่าง ๆ ของเคอร์คูมินสำหรับ 60 นาทีที่อุณหภูมิห้องแล้ว ประเมิน agglutination เม็ดเลือดแดง (RBC) ผลพบว่าเคอร์คูมินที่ pretreatment (ที่ความเข้มข้นของ 312 มม. หรือสูงกว่า) ห้ามผูกของ NDV RBCs ไก่ ตามที่ระบุ โดยลักษณะคล้ายจุดของ hemagglutinated ไม่ใช่เซลล์ (Fig. 1A) .
เคอร์คูมินยับยั้งหินปูนก่อตัวในไวรัสขัด
มันเผยว่า เคอร์ bilayer กระบวนการปรับเปลี่ยน และมีผลต่อเมมเบรนโปรตีนฟังก์ชัน [22] ซองจดหมายไวรัสมีโครงสร้าง membranous ดังนั้น การทดสอบเวลาของยานี้ถูกว่าจ้างเพื่อกำหนดว่า เคอร์คูมินสามารถยับยั้งไวรัสอื่น ๆ enveloped ตาม การทดสอบ cytotoxicity, 30 มม.ของเคอร์คูมินเล็กน้อยยับยั้งการเติบโตของเซลล์ vero (ฟิก S1), และดังนั้น เคอร์ 10 มม.ใช้สำหรับการทดสอบนี้ ตามที่ระบุใน Fig. 1B รวมถึงของเคอร์คูมินตลอดเวลาของการติดเชื้อ (เช่น รักษาแบบเต็มเวลา) ทั้งหมด abrogated infectivity ของสอง flaviviruses, JEV และไข้เลือดออก (ชนิด 2 DV-II) อย่างเห็นได้ชัด แห่งเคอร์ตามแนบไวรัส (เช่นร่วมรักษา) pro-nouncedly ห้ามก่อหินปูน JEV และ DV II ในกรณีคล้ายกันรักษาเต็มเวลา ในทางตรงกันข้าม ไม่ถูกสังเกต เมื่อเคอร์ถูกเพิ่มเข้ามาหลังจากรายการไวรัส ผลการวิจัยเหล่านี้จะสอดคล้องกับลักษณะพิเศษในไวรัสไข้หวัด เคอร์คูมินที่บล็อก infectivity ไวรัส โดยตรง หรือทางอ้อมส่งผลกระทบต่อการทำงานของโปรตีนซองจดหมาย เนื่องจากกิจกรรม HA ของ NDV ถูกห้าม โดยเคอร์คูมิน เราแล้วสงสัยว่า เคอร์คูมินโดยทั่วไปมีผลต่อ infectivity ของขัดไวรัส
IAV ตั้งแต่ NDV และ flavivirus วิเคราะห์ในการทดสอบนี้มีทั้งหมดอาร์เอ็นเอไวรัส หนึ่งขัดดีเอ็นเอไวรัส ไวรัส pseudorabies (PRV สุกรไวรัส herpes) แล้วใช้การทดสอบเป็นไปได้ ผลของเคอร์คูมิน infectivity ไวรัสขัดถูกประเมิน โดยการทดสอบการก่อหินปูน ตามที่แสดงใน Fig. 2A เช่นเดียวกับที่
การแปล กรุณารอสักครู่..
ผลลัพธ์ (ไทย) 2:[สำเนา]
คัดลอก!
was added to the transfection reagent/DNA mixture and kept at room temperature for 40 min before added to the cell monolayer. The transfection efficiency and the intensity of GFP in each cell were recorded by flow cytometry analysis and fluorescent microscopy at 24-hour post transfection.
Flow Cytometry Analysis
Transfected cells were washed with PBS and harvested in 1 mL of PBS. The signal of eGFP was then analyzed at least 10000 cells using FL-1 filter by FACS Calibur flow cytometer (BD Biosciences, MA, USA).
Preparation of Liposome
The fluorescent SRB dye-loaded liposomes were prepared by a hydration/freezing and thawing/extrusion method [24]. The mixture of DPPC, DPPG, and cholesterol in a molar ratio of 45:5:50 was dissolved in a solution of 6 ml chloroform, 1 ml methanol, and dried in a rotary evaporator. The dried lipid film was hydrated by the addition of 3 ml of 0.15 M SRB solution (in 0.02 M HEPES, pH 7.5, osmolality 530 mmol/kg). The lipid solution was processed with 5 freeze and thaw cycles, and then dependent on the final size of the liposomes desired, the liposomes were sequentially extruded by passing through a mini high- pressure extruder (Avanti Polar Lipids, Inc., AL, USA) with different pore-sizes (400, 200, and then 100 mm) of polycarbonate membrane (Whatman, NJ, USA). Unencapsulated SRB was removed by gel filtration using a Sephadex G-50 column with Tris-buffered saline (TBS: 0.02 M Tris with 0.15 M NaCl, 0.01% NaN3, pH 7.5) containing sucrose (osmolality 530 mmol/kg). Finally, the size of the liposomes was confirmed by a dynamic light-scattering measurement using a nanosizer 90ZS (Malvern Instruments, Worcestershire, UK).
Treatment of Liposome with Curcumin
Liposome diluted in TBS (50 mM Tris base and 150 mM NaCl, osmolality 530 mmol/kg) was incubated with various concentrations of curcumin, DMSO (negative control), or 15 mM n-octylglucoside (n-OG), a detergent serving as positive control, at room temperature for one hour. The leakage of Sulforhodamine B (SRB) fluorescence was detected by Spectra- Max M2e Microplate Reader (Molecular Devices, Inc., California, United States) at excitation wavelength of 490 nm.
To test whether influenza virus can reverse the curcumin’s effect on liposome, we added 2 different doses of influenza virus particles (2000 PFU and 10 000 PFU) to curcumin and SRB-loaded liposomes, and then detected fluorescence after 1 h incubation.
Time Course Assay of Curcumin Pre-treatment
PR8 virus particles (2000 pfu) were mixed with 30 mM of curcumin in 200 ml. At 0, 5, 10, 20, 40, 60 min after curcumin treatment, an aliquot of 5 ml was added to MDCK cells in a well containing 495 ml infectious medium to make the curcumin concentration below viral inhibitory effect (i.e. 0.3 mM). The infectivity of PR8 was determined by the standard plaque assay to determine the infectivity of influenza virus.
Characterization of Curcumin Effect on Plaque Formation Ability
PR8 virus particles (2000 pfu) were pre-incubated with 30 mM (unless otherwise stated) of curcumin at room temperature for one hour. Subsequently, the curcumin-virus mixture was diluted with fresh infectious medium to the concentration of 6 mM, 3 mM,
1.5 mM and kept at room temperature for one hour followed by the standard plaque assay.
Replication of Curcumin-treated Viruses in Embryonated Eggs
The experiment protocol was approved by the Committee on the Ethics of Animal Experiments of National Chung Hsing University (Approval No: 97-91). The Embryonated hen’s eggs were purchased from the Livestock Research Institute, Chunan, Taiwan and incubated in hatchery until 10-day-old. Fifty or 5000 pfu of PR8 viruses were incubated with 30 mM of curcumin in a total volume of 500 ml infectious medium. One hour after incubation, inoculums were injected into the allantoic sac of embryonated hen’s eggs. Treated eggs were incubated in 37uC incubator for 18 or 24 hours, the yield of virus progeny was determined by HA test.
Statistical Analysis
All data were calculated by Microsoft Excel. Results from at least three independent experiments were reported as mean values 6 mean of standard deviations (S.E.M.).
Results
Curcumin blocked HA Activity of Newcastle Disease Virus (NDV)
In our previous study, curcumin treatment abrogated the HA activity of the IAV subtypes H1N1 and H6N1 [10]. In this study, we treated paramyxovirus NDV, another virus that displays HA activity, with curcumin to determine if its effect is specific to the influenza virus. We incubated 4 HA units of NDV with various concentrations of curcumin for 60 min at room temperature and then assessed red blood cell (RBC) agglutination. Results showed that curcumin pretreatment (at concentrations of 31.2 mM or higher) inhibited the binding of NDV to chicken RBCs, as indicated by the spot-like appearance of non-hemagglutinated cells (Fig. 1A).
Curcumin Inhibits Plaque Formation in Enveloped Viruses
It was indicated that curcumin modifies the lipid bilayer and influences membrane protein function [22]. The viral envelope is membranous structure; therefore, a time-of-drug addition test was employed to determine whether curcumin can also inhibit other enveloped viruses. Accordingly to the cytotoxicity test, 30 mM of curcumin slightly inhibit the growth of vero cells (Fig. S1), and therefore 10 mM curcumin was used for this assay. As indicated in Fig. 1B, including of curcumin throughout the time of infection (i.e. full-time treatment) completely abrogated the infectivity of two flaviviruses, JEV and Dengue (type 2; DV-II). Noticeably, addition of curcumin upon the viral attachment (i.e. co-treatment) pro- nouncedly inhibited both JEV and DV-II plaque formation; to a similar extent of full-time treatment. In contrast, no effect was observed, when curcumin was added after viral entry. These findings are consistent with the effect on influenza virus that curcumin blocks the virus infectivity by direct or indirect interfering the function of envelope protein. Since HA activity of NDV was also inhibited by curcumin, we then wonder whether curcumin generally affects the infectivity of enveloped viruses.
Since IAV, NDV and flavivirus analyzed in this assay were all RNA viruses, one enveloped DNA virus, pseudorabies virus (PRV swine herpes virus) was then used to test the possibility. The effect of curcumin on the infectivity of enveloped viruses was evaluated by the plaque formation assay. As shown in Fig. 2A, as with that of
การแปล กรุณารอสักครู่..
ผลลัพธ์ (ไทย) 3:[สำเนา]
คัดลอก!
ถูกเพิ่มเข้ามาสำหรับรีเอเจนต์ / ดีเอ็นเอผสมและเก็บไว้ที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 40 นาทีก่อนที่จะเพิ่มไปยังเซลล์อย่าง . ใช้สำหรับประสิทธิภาพและความเข้มของ GFP ในแต่ละเซลล์ได้ถูกบันทึกไว้โดยการวิเคราะห์การเรืองแสงและกล้องจุลทรรศน์ ( ที่โพสต์สำหรับบริการการวิเคราะห์การไหล
.
( transfected เซลล์ถูกล้างด้วย pbs และเก็บเกี่ยวใน 1 มิลลิลิตรของ PBSสัญญาณของ egfp จากนั้นวิเคราะห์อย่างน้อย 10 , 000 เซลล์โดยใช้ fl-1 กรองโดยการใช้โมโน facs คาลิเบอร์ ( BD BIOSCIENCES , MA , USA )

ไปการเตรียมไลโปโซมสีเรืองแสงโหลด ไลโปโซมเตรียมโดย hydration / แช่แข็งและละลาย / รีดวิธี [ 24 ] ส่วนผสมของ dppc dppg , และคอเลสเตอรอลในอัตราส่วนโดยโมลของ 45:5:50 ถูกละลายในสารละลาย 6 ml คลอโรฟอร์ม1 มิลลิลิตร เมทานอล และแห้งในเครื่องระเหยแบบหมุน ไขมันแห้งฟิล์ม hydrated โดยนอกเหนือจาก 3 มิลลิลิตร สารละลาย 0.15 เมตร MPB ( 0.02 M ฮีเปส , pH 7.5 , ค่าออสโมลาลิตี้ 530 มิลลิโมล / กิโลกรัม ) สารละลายไขมันแปรรูปแช่แข็งและละลายกับ 5 รอบสุดท้ายแล้วขึ้นอยู่กับขนาดของตัวที่ต้องการที่ถูกอัดประจุอัตโนมัติโดยผ่าน mini เครื่องความดันสูง ( polar lipids AVANTI , Inc . USA ) ที่มีขนาดรูพรุนแตกต่างกัน ( 400 , 200 และ 100 มิลลิเมตร ) แผ่นโพลีคาร์บอเนต ( whatman , NJ , USA ) unencapsulated SRB ถูกลบออกโดยการกรองโดยใช้ Sephadex G-50 เจลคอลัมน์ที่มีบริษัทในน้ำเกลือ ( TBS : 0.02 M ทริสกับ 0.15 M NaCl nan3 0.01 % pH 75 ) ที่มีน้ำตาลซูโครส ( โมลาลิตี้ 530 มิลลิโมล / กิโลกรัม ) ในที่สุดขนาดของไลโปโซมที่ได้รับการยืนยันโดยการวัดการกระจายแสงแบบไดนามิกโดยใช้ nanosizer 90zs ( Malvern ใน Worcestershire , สหราชอาณาจักร ) .
รักษาไลโปโซมกับขมิ้นชัน
ไลโปโซมเจือจางใน TBS ( ฐานุ 50 มม. และขนาด 150 มม. ค่าออสโมลาลิตี้ 530 มิลลิโมล / กิโลกรัม ) เป็นเชื้อที่มีความเข้มข้นต่าง ๆ ของคิวมินDMSO ( ดิน ) หรือ 15 มม. n-octylglucoside ( n-og ) , ผงซักฟอกให้ควบคุมบวกที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลาหนึ่งชั่วโมง การรั่วของซัลฟอร์โฮดามีนบี ( SRB ) เรืองแสงที่ตรวจพบโดยให้พื้นที่ภาคเหนือของประเทศไทย แม็กซ์อ่าน m2e ( อุปกรณ์ , Inc , California , สหรัฐอเมริกากระตุ้นโมเลกุล ) ที่ความยาวคลื่น 290 nm .
เพื่อทดสอบว่าไวรัสไข้หวัดใหญ่สามารถย้อนกลับผลของเคอร์คิวมินในไลโปโซม เราเพิ่ม 2 โดส ที่แตกต่างกันของอนุภาคไวรัสไข้หวัดใหญ่ ( 2000 พีเอฟยู และ 10 000 พีเอฟยู ) ขมิ้นชันและ srb โหลด ไลโปโซม และตรวจพบว่าเรืองแสงหลังจาก 1 ชั่วโมง การบ่ม แน่นอนเวลาการทดสอบของเคอร์คิวมินก่อน

pr8 รักษาอนุภาคไวรัส ( 2000 พีเอฟยู ) ได้แก่ ผสมกับ 30 มม. ของเคอร์คิวมินใน 200 มิลลิลิตร ที่อุณหภูมิ 0 , 5 , 10 , 20 , 40 ,60 นาทีหลังจากขมิ้นชันรักษาเป็นส่วนลงตัวของ 5 ml เติม mdck เซลล์ในบ่อน้ำที่มี 495 ml ติดเชื้อปานกลางเพื่อให้ขมิ้นชันเข้มข้นด้านล่างผลยับยั้งไวรัส ( คือ 0.3 มม. ) มีการติดเชื้อของ pr8 ถูกกำหนดโดยการทดสอบจุลินทรีย์มาตรฐานเพื่อตรวจสอบการติดเชื้อของไวรัสไข้หวัดใหญ่
คุณสมบัติของผลเคอร์คิวมินในการสะสมคราบจุลินทรีย์ความสามารถ
pr8 อนุภาคไวรัส ( 2000 พีเอฟยู ) ก่อนแยก 30 มม. ( เว้นแต่ระบุเป็นอย่างอื่น ) ของขมิ้นชันที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลาหนึ่งชั่วโมง ต่อมา , ขมิ้นชันผสมเจือจางด้วยโรคติดเชื้อไวรัส ( สด ความเข้มข้น 6 มม. 3 มม.
1.5 มม. และเก็บไว้ที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลาหนึ่งชั่วโมงตามด้วยการทดสอบจุลินทรีย์ มาตรฐานการรักษาไวรัสในเคอร์คิวมิน

ผู้รบกวนการทดลองขั้นตอนที่ได้รับการอนุมัติโดยคณะกรรมการจริยธรรมการทดลองในสัตว์ทดลองของมหาวิทยาลัยแห่งชาติ ( อนุมัติ : 97-91 ) ที่วงจรชีวิตไข่ไก่ถูกซื้อจากปศุสัตว์ สถาบันวิจัย ชูนาน ไต้หวัน และบ่มในโรงเพาะฟักจน 10 วัน เก่าห้าสิบหรือ 5000 พีเอฟยูของ pr8 ไวรัสถูกบ่มด้วย 30 มม. ของเคอร์คิวมินในปริมาณ 500 ml ) ปานกลาง หนึ่งชั่วโมงหลังจากระยะเวลา 18 ชั่วโมงถูกฉีดเข้าไปในถุง allantoic ของวงจรชีวิตของแม่ไก่ไข่ เลี้ยงไข่เลี้ยงในตู้ 37uc 18 หรือ 24 ชั่วโมง ผลผลิตของพันธุ์ไวรัสถูกกำหนดจากการทดสอบ ฮา

การวิเคราะห์ทางสถิติข้อมูลที่คำนวณด้วย Microsoft Excel ผลลัพธ์ที่ได้จากอย่างน้อยสามการทดลองอิสระมีรายงานเป็นค่าของส่วนเบี่ยงเบนมาตรฐาน 6 หมายถึง ค่าเฉลี่ย ( s.e.m. )

กดบล็อกฮาผลกิจกรรมของ นิวคาสเซิล โรคไวรัส ( ndv )
ในการศึกษาของเรา ที่สำคัญการรักษา abrogated ฮา กิจกรรมของ iav ชนิดย่อย H1N1 และ h6n1 [ 10 ] ในการศึกษานี้เราถือว่า ndv พารามิกโซไวรัส ,ไวรัสอื่นที่แสดงกิจกรรมฮา กับขมิ้นชันเพื่อตรวจสอบว่า ผลของมันคือเฉพาะไข้หวัดใหญ่ไวรัส เราบ่ม 4 ฮาหน่วย ndv ที่มีความเข้มข้นต่าง ๆ ของขมิ้นชัน 60 นาที ที่อุณหภูมิห้อง จากนั้นประเมินเซลล์เม็ดเลือดแดง ( RBC ) การจับกลุ่ม ผลการวิจัยพบว่า เคอร์คิวมิน ( ที่เพิ่มความเข้มข้นของ 312 มม. ขึ้นไป ) สามารถยับยั้งการเกาะ ndv กับไก่ rbcs , ตามที่ระบุโดยจุดเช่นที่ปรากฏบน hemagglutinated เซลล์ ( รูปที่ 1A ) .
ขมิ้นชันยับยั้งการเกิดหินปูนใน enveloped ไวรัส
พบว่าเคอร์คูมินปรับเปลี่ยน bilayer ไขมันและอิทธิพลของฟังก์ชันโปรตีนเมมเบรน [ 22 ] ซองจดหมายไวรัสเป็นโครงสร้างเยื่อบุผิว ดังนั้นเวลาของการทดสอบ นอกจากนี้การใช้เพื่อตรวจสอบว่า ที่สำคัญยังสามารถยับยั้งการอื่น ๆที่ห่อหุ้มไวรัส ตามต่อทดสอบ 30 มม. ของเคอร์คิวมินเล็กน้อย ยับยั้งการเจริญเติบโตของเวโรเซลล์ ( รูปที่ S1 ) ดังนั้น 10 มม. ขมิ้นชันใช้วิธีนี้ ที่แสดงในรูปที่ 1 บี รวมทั้งของเคอร์คิวมินตลอดเวลาของการติดเชื้อ ( เช่นเต็มเวลาการรักษา ) abrogated อย่างสมบูรณ์และพยาธิวิทยาของผู้ใหญ่ jev 2 , 1 ( ประเภท 2 dv-ii ) เห็นได้ชัดจากขมิ้นชันต่อสิ่งที่แนบไวรัส ( เช่น Co รักษา ) โปร - nouncedly ยับยั้งทั้ง jev และการพัฒนาจุลินทรีย์ dv-ii ; ในระดับที่คล้ายกันของเต็มเวลาการรักษา ในทางตรงกันข้ามไม่มีผลกระทบพบว่าเมื่อกดที่ถูกเพิ่มเข้ามาหลังจากไวรัสเข้าข้อมูลเหล่านี้สอดคล้องกับผลต่อไวรัสไข้หวัดใหญ่ที่กดบล็อกไวรัสการติดเชื้อโดยตรงหรือทางอ้อม รบกวนการทำงานของโปรตีนซองจดหมาย ตั้งแต่ฮากิจกรรมของ ndv ถูกยับยั้งโดยเคอร์คิวมิน เราก็สงสัยว่า ขมิ้นชันโดยทั่วไปมีผลต่อการติดเชื้อของ enveloped ไวรัส .
ตั้งแต่ iav ndv , และวิเคราะห์ในวิธีนี้คือไวรัสไวรัสอาร์เอ็นเอทั้งหมดตัวห่อหุ้มไวรัสดีเอ็นเอ pseudorabies ( PRV สุกรไวรัสไวรัสเริม ) ถูกใช้เพื่อทดสอบความเป็นไปได้ ผลของเคอร์คิวมินในการติดเชื้อของ enveloped ไวรัส ที่ประเมินโดยการสะสมคราบจุลินทรีย์แบคทีเรีย ดังแสดงในรูปที่ 2A , เช่นเดียวกับที่ของ
การแปล กรุณารอสักครู่..
 
ภาษาอื่น ๆ
การสนับสนุนเครื่องมือแปลภาษา: กรีก, กันนาดา, กาลิเชียน, คลิงออน, คอร์สิกา, คาซัค, คาตาลัน, คินยารวันดา, คีร์กิซ, คุชราต, จอร์เจีย, จีน, จีนดั้งเดิม, ชวา, ชิเชวา, ซามัว, ซีบัวโน, ซุนดา, ซูลู, ญี่ปุ่น, ดัตช์, ตรวจหาภาษา, ตุรกี, ทมิฬ, ทาจิก, ทาทาร์, นอร์เวย์, บอสเนีย, บัลแกเรีย, บาสก์, ปัญจาป, ฝรั่งเศส, พาชตู, ฟริเชียน, ฟินแลนด์, ฟิลิปปินส์, ภาษาอินโดนีเซี, มองโกเลีย, มัลทีส, มาซีโดเนีย, มาราฐี, มาลากาซี, มาลายาลัม, มาเลย์, ม้ง, ยิดดิช, ยูเครน, รัสเซีย, ละติน, ลักเซมเบิร์ก, ลัตเวีย, ลาว, ลิทัวเนีย, สวาฮิลี, สวีเดน, สิงหล, สินธี, สเปน, สโลวัก, สโลวีเนีย, อังกฤษ, อัมฮาริก, อาร์เซอร์ไบจัน, อาร์เมเนีย, อาหรับ, อิกโบ, อิตาลี, อุยกูร์, อุสเบกิสถาน, อูรดู, ฮังการี, ฮัวซา, ฮาวาย, ฮินดี, ฮีบรู, เกลิกสกอต, เกาหลี, เขมร, เคิร์ด, เช็ก, เซอร์เบียน, เซโซโท, เดนมาร์ก, เตลูกู, เติร์กเมน, เนปาล, เบงกอล, เบลารุส, เปอร์เซีย, เมารี, เมียนมา (พม่า), เยอรมัน, เวลส์, เวียดนาม, เอสเปอแรนโต, เอสโทเนีย, เฮติครีโอล, แอฟริกา, แอลเบเนีย, โคซา, โครเอเชีย, โชนา, โซมาลี, โปรตุเกส, โปแลนด์, โยรูบา, โรมาเนีย, โอเดีย (โอริยา), ไทย, ไอซ์แลนด์, ไอร์แลนด์, การแปลภาษา.

Copyright ©2024 I Love Translation. All reserved.

E-mail: