V-PCR amplification testThe amplifi

V-PCR amplification test
The amplification reactions were performed in 50 μl reaction mixtures containing 0.1 mM of each dexoynucteotide,
15 pmol of each primer, 50 mM KCl, 10 mM Tris-Hcl (pH = 9), 2 mM MgCl2,10%dimethyl sulfoxide , 1.5 U of Taq DNA polymerase and 40 ng of template DNA. The PCR reaction was carried out in a
PCR programmed thermocycler using the thermal profiles: initial cycle 94°C for 2 min, followed by a further 35 cycles: denaturation
at 94°C for 40s; annealing at 60°C for 40s, extension by polymerase at 72°C for 40 s, and a final 5-min elongation
period at 72°C. The PCR products were detected and their size estimated by electrophoresis of 10 μl of each
amplification mixture in 1% agarose gels in 1% Tris-borate- EDTA with known molecular weight standards
. Gels were stained with 0.5 mg ml–1 ethidium bromide.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ทดสอบขยาย V-PCRดำเนินปฏิกิริยาขยายในน้ำยาผสมปฏิกิริยา μl 50 ที่ประกอบด้วย 0.1 มม.ของแต่ละ dexoynucteotidepmol 15 แต่ละพื้น 50 mM KCl ทริสเรทติ้ง Hcl 10 มม. (ค่า pH = 9), 2 มม. MgCl2, 10% dimethyl sulfoxide, 1.5 U Taq DNA พอลิเมอเรสและ 40 ng ของแม่แบบดีเอ็นเอ ปฏิกิริยา PCR ถูกดำเนินการในการPCR โปรแกรม thermocycler โดยใช้โพรไฟล์ความร้อน: การเริ่มต้นวงจร 94° C สำหรับ 2 นาที ตาม ด้วยเป็นรอบ 35: denaturationที่ 94° C สำหรับยุค 40 การอบเหนียวที่ 60° C ในยุค 40 ขยาย โดยพอลิเมอเรสที่ 72° C สำหรับ 40 s และ elongation 5 นาทีสุดท้ายรอบระยะเวลาที่ 72Â องศาเซลเซียส ตรวจพบผลิตภัณฑ์ PCR และขนาดโดยประมาณ โดย electrophoresis μl 10 ของแต่ละขยายผสมในเจ agarose 1% 1% ในทริสเรทติ้ง-borate-EDTA ด้วยมาตรฐานที่ทราบน้ำหนักโมเลกุล. เจมีสี ด้วย 0.5 มิลลิกรัมโบรไมด์ ethidium ml-1

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การทดสอบการขยาย V-PCR
ปฏิกิริยาขยายได้ดำเนินการในผสมปฏิกิริยา 50 ไมโครลิตรที่มี 0.1 มิลลิของแต่ละ dexoynucteotide,
15 pmol ของแต่ละไพรเมอร์, 50 มิลลิ KCl, 10 mM Tris-Hcl (pH = 9), 2 มิลลิ MgCl2,10% dimethyl sulfoxide 1.5 U ของ Taq ดีเอ็นเอโพลิเมอร์และ 40 ng ของแม่แบบดีเอ็นเอ ปฏิกิริยา PCR ได้ดำเนินการใน
โปรแกรมเครื่อง thermocycler PCR โดยใช้รูปแบบความร้อน: รอบแรก 94 ° C เป็นเวลา 2 นาทีตามด้วยอีก 35 รอบ: denaturation
ที่ 94 ° C 40; อบที่ 60 ° C เป็นเวลา 40 ขยายโดยโพลิเมอร์ที่ 72 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 40 วินาที, และการยืดตัวสุดท้าย 5 นาที
ในช่วงเวลาที่ 72A ° C ผลิตภัณฑ์พีซีอาร์ได้รับการตรวจพบและขนาดของพวกเขาประเมินโดย electrophoresis 10 ไมโครลิตรของแต่ละ
ส่วนผสมขยาย 1% เจล agarose 1% EDTA Tris-borate- มาตรฐานน้ำหนักโมเลกุลที่รู้จักกัน
. เจลถูกย้อมด้วย 0.5 มิลลิกรัมต่อมิลลิลิตร-1 ethidium โบรไมด์

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

แบบทดสอบ v-pcr
( ปฏิกิริยาการใน 50 μ L ปฏิกิริยาของผสมที่มี 0.1 มิลลิเมตรของแต่ละ dexoynucteotide
15 , pmol แต่ละ primer KCl 50 มม. หรือ 10 มม. HCL ( pH = 9 ) , 2 มม. mgcl2,10 % เต๊ะ 1.5 U ของดีเอ็นเอพอลิเมอเรสได้ดีและ 40 นาโนดีเอ็นเอแม่แบบ การตรวจปฏิกิริยาถูกหามออกใน
PCR โดยใช้ความร้อน : โปรไฟล์โปรแกรมเทอร์มอไซเคล ์เริ่มต้นรอบ 94 ° C เป็นเวลา 2 นาที ตามด้วยอีก 3 รอบ : 94 ° C (
ที่ 40 60 องศา C ; อบอ่อนที่อุณหภูมิ 40 , การส่งเสริมโดยการ 72 °องศาเซลเซียสนาน 40 วินาที และสุดท้ายการยืดระยะเวลา 5 นาทีที่ 72 ° C
ผลิตภัณฑ์ PCR ตรวจพบและขนาดโดยประมาณ โดยวิธีอิเล็กโทรโฟรีซีสของ 10 μ l
แต่ละส่วนผสมในเจล ( 1% , 1% โดยบอเรต - EDTA ด้วยรู้จักโมเลกุลน้ำหนักมาตรฐาน

เจลใช้ย้อม 0.5 มิลลิกรัม ml ( 1 ทิเดียมโบรไมด์ .