Fig. 1. Phylogenetic tree derived f

Fig. 1. Phylogenetic tree derived from nearly complete 16S rDNA gene sequences
showing relationships between the strain A21 and the related type species of the
genus Paenibacillus.

In this study, we isolated a bacterial strain (A21) from the snow
covered high altitude area in Tibet, China, that showed high antagonistic
activity against several plant fungal diseases, especially
gray mold diseases caused by B. cinerea. It displayed an obvious
halo on lichen polysaccharides plates by congo red staining, indicating
a strong glucanase activity. However, glucanase activity
has not been detected in S. lydicus A01. Combining two biocontrol
factors can have synergistic antifungal effects and thus enhance
fungal resistance in plants or microorganisms. For example, combined
expression of chitinase and b-1,3-glucanase genes in rice
increased resistance against Rhizoctonia solani (Sridevi et al.,
2008). Heterologous expression of chitinase from Trichoderma harzianum
in natamycin-producing strain S. lydicus A01 increased its
antagonistic effect on B. cinerea and Fusarium oxysporum f. spp
(Wu et al., 2013a,b).
To improve the antifungal activity of S. lydicus A01, we cloned
and expressed the glucanase gene from strain A21 under the S. erythraea
ermE⁄ promoter in S. lydicus A01, generating the recombinant
strain S. lydicus AG01. We also investigated the glucanase
activity and antifungal capacity of S. lydicus AG01, as well as its
inhibitory effects on spore germination and mycelial growth of B.
cinerea.

2. Materials and methods
2.1. Strains and plasmids
S. lydicus A01 (CGMCC 1653) was isolated from suburban vegetable
field soil, and identified as S. lydicus based on the 16S
rDNA sequences and phenotypic comparison (Lu et al., 2008).
The GenBank accession number for 16S rDNA of S. lydicus strain
A01 is EF532323. Strain A21 (CGMCC 10708) was isolated from
the snow covered high altitude area in Tibet, China. The fungal
pathogen B. cinerea was deposited in the Institute of Plant and
Environment Protection, Beijing Academy of Agriculture and
Forestry Sciences, Beijing, China (Lu et al., 2008). Escherichia coli
strains DH5a and ET12567 (pUZ8002) were used as the cloning
host and donor for conjugal transformation, respectively. The integration
vector pIB139, which harbored the ermE⁄ promoter from
vector pSET152 containing U31 int and attP (Wilkinson et al.,
2002), was used to introduce glucanase gene into S. lydicus.
Plasmid pUC19 was used for routine cloning and sub cloning
experiments. Conjugation and regeneration were performed
according to Kitani et al. (2000) and Paranthaman and
Dharmalingam (2003). The transformants were selected by
60 lgmL1 apramycin and further confirmed by PCR analysis with
the specific primers of glucanase gene. Synthesis of oligonucleotide
primers and DNA sequencing of PCR products were performed by Invitrogen Biotechnology (China).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

Fig. 1 Phylogenetic tree มาเกือบสมบูรณ์ 16S rDNA ยีนลำดับแสดงความสัมพันธ์ระหว่างสายพันธุ์ A21 และเกี่ยวข้องชนิดพันธุ์สกุล Paenibacillusในการศึกษานี้ เราแยกต่างหากต้องใช้แบคทีเรีย (A21) จากหิมะครอบคลุมพื้นที่สูงในทิเบต จีน ที่พบสูงเป็นปรปักษ์กิจกรรมจากหลายพืชโรคเชื้อรา โดยเฉพาะอย่างยิ่งเกิดจาก cinerea เกิดโรคแม่สีเทา แสดงความชัดเจนhalo ในไลเคน polysaccharides แผ่น โดยย้อมสีคองโกเรด แสดงกิจกรรมการคัดแข็งแรง อย่างไรก็ตาม กิจกรรมคัดไม่พบใน S. lydicus A01 รวมสอง biocontrolปัจจัยที่สามารถมีผลต้านเชื้อราพลัง และเพิ่มดังนั้นต้านเชื้อราในพืชหรือจุลินทรีย์ รวมตัวอย่างค่าของ b-1,3-คัดและ chitinase ยีนในข้าวเพิ่มความต้านทานต่อ Rhizoctonia solani (Sridevi et al.,ปี 2008) ค่า heterologous ของ chitinase จาก Trichoderma harzianumในผลิต natamycin ต้องใช้ S. lydicus A01 เพิ่มความต่อต้านผลเกิด cinerea และ Fusarium oxysporum f. เบียส(Wu et al., 2013a, b)การปรับปรุงกิจกรรมการต้านเชื้อราของ S. lydicus A01 เราโคลนและแสดงยีนคัดจาก A21 ต้องใช้ภายใต้ S. erythraeaเสนอเงื่อนไข ermE⁄ ใน lydicus S. A01 สร้างวททชสายพันธุ์ S. lydicus AG01 นอกจากนี้เรายังสอบสวนการคัดกิจกรรมและความสามารถต้านเชื้อราของ S. lydicus AG01 ตลอดจนการลิปกลอสไขผลการงอกของสปอร์และการเจริญเติบโต mycelial ของบีcinerea2. วัสดุและวิธีการ2.1. สายพันธุ์ และ plasmidsS. lydicus A01 (CGMCC 1653) ถูกแยกจากผักชานเมืองฟิลด์ดิน และเป็น S. lydicus ตาม 16SrDNA ลำดับและเปรียบเทียบไทป์ (Lu et al., 2008)เลขทะเบียน GenBank สำหรับ 16S rDNA ของ S. lydicus ต้องใช้A01 เป็น EF532323 สายพันธุ์ A21 (CGMCC 10708) ถูกแยกต่างหากจากหิมะปกคลุมพื้นที่สูงในทิเบต จีน เชื้อราการศึกษา B. cinerea ฝากเงินในสถาบันโรงงาน และป้องกันสิ่งแวดล้อม วิทยาลัยเกษตรปักกิ่ง และวนศาสตร์วิทยาศาสตร์ ปักกิ่ง จีน (Lu et al., 2008) Escherichia coliสายพันธุ์ DH5a และ ET12567 (pUZ8002) ใช้เป็นการโคลนโฮสต์และผู้บริจาคสำหรับการแปลง conjugal ตามลำดับ การรวมpIB139 เวกเตอร์ซึ่งโปรโมเตอร์ ermE⁄ จาก harboredเวกเตอร์ pSET152 มี U31 int และ attP (Wilkinson et al.,2002), ที่ใช้แนะนำยีนคัดเป็น S. lydicusใช้สำหรับประจำโคลนและโคลนย่อย plasmid pUC19การทดลอง ทำ conjugation และฟื้นฟูตาม Kitani et al. (2000) และ Paranthaman และDharmalingam (2003) Transformants ถูกเลือก60 lgmL 1 apramycin และยืนยัน โดย PCR มีการวิเคราะห์เพิ่มเติมไพรเมอร์เฉพาะของยีนคัด การสังเคราะห์ oligonucleotideไพรเมอร์และลำดับดีเอ็นเอของผลิตภัณฑ์ PCR ถูกดำเนินการ โดยเทคโนโลยีชีวภาพ Invitrogen (จีน)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

รูปที่ 1 ต้นไม้วิวัฒนาการมาจากเกือบสมบูรณ์ 16S rDNA ยีน ลำดับ
แสดงความสัมพันธ์ระหว่างความเครียด a21 และที่เกี่ยวข้องกับประเภทของชนิดของพืชสกุล paenibacillus


ในการศึกษานี้เราแยกสายพันธุ์แบคทีเรีย ( a21 ) จากหิมะที่ปกคลุมพื้นที่สูง
พื้นที่ทิเบต ประเทศจีน ว่า พบกิจกรรมปฏิปักษ์
สูงกับหลายโรงงาน โรคเชื้อรา โดยเฉพาะอย่างยิ่ง
สีเทาโมลด์ โรคที่เกิดจาก พ. ขาว . มันแสดงรัศมีชัดเจนในไรด์แผ่นครับ

โดยคองโกเรด staining แสดงกิจกรรมกลูแข็งแรง อย่างไรก็ตาม กลูกิจกรรม
ตรวจไม่พบใน S . lydicus a01 . การรวมสองไบโอคอนโทรล
ปัจจัย สามารถ มี ผล ในการส่งเสริม และดังนั้นจึง เพิ่มความต้านทานในพืชหรือจุลินทรีย์เชื้อรา
. ตัวอย่างเช่นรวม
การแสดงออกของยีนไคติเนส และยีนในข้าว b-1,3-glucanase
เพิ่มความต้านทานต่อเชื้อรา ( sridevi et al . ,
2008 ) การแสดงออกของยีนไคติเนสจาก Trichoderma harzianum
ด้วยตัวเองในการผลิตสายพันธุ์ S lydicus นาตาไมซิน a01 เพิ่มขึ้นผลปฏิปักษ์ของ
บนขาวและ Fusarium oxysporum F และ B .
( Wu et al . , 2013A , B )
เพื่อปรับปรุงฤทธิ์ต้านราของเอส a01 lydicus ,เราโคลน
และแสดงยีนกลู a21 ความเครียดภายใต้ S . erythraea
erme ⁄โปรโมเตอร์ใน S . lydicus a01 , สร้างรีคอมบิแนนท์
สายพันธุ์ S lydicus ag01 . เรายังสืบสวนกลู
กิจกรรมและความสามารถใน ag01 S . lydicus รวมทั้งผลการยับยั้งการงอกของสปอร์

ขาว และเจริญของ B .

2 วัสดุและวิธีการ
2.1 . สายพันธุ์และพลาสมิด
เอส lydicus a01 ( cgmcc 1365 ) ที่แยกได้จากดินแปลงผัก
ชานเมือง และระบุว่าเป็น S (
lydicus ขึ้นอยู่กับชนิดและเปรียบเทียบคุณสมบัติ ( Lu et al . , 2008 ) .
หมายเลขภาคยานุวัติ 5% สำหรับ 16S rDNA ของ S . lydicus เมื่อย
a01 เป็น ef532323 . สายพันธุ์ a21 ( cgmcc 10708 ) ถูกแยกจาก
หิมะปกคลุมพื้นที่สูงในทิเบต , จีน เชื้อ fungal
Bขาวฝากในสถาบันพืชและ
คุ้มครองสิ่งแวดล้อม , ปักกิ่งสถาบันการเกษตรและป่าไม้
วิทยาศาสตร์ , ปักกิ่ง , จีน ( Lu et al . , 2008 ) เชื้อ Escherichia coli สายพันธุ์และ
dh5a et12567 ( puz8002 ) ถูกใช้เป็นโคลน
โฮสต์และผู้บริจาคแต่งงานการเปลี่ยนแปลงตามลำดับ การรวมเวกเตอร์ pib139
ซึ่งพักอยู่ใน erme ⁄โปรโมเตอร์จาก
เวกเตอร์ pset152 ที่มี int และ u31 attp ( Wilkinson et al . ,
2002 ) , ถูกใช้เพื่อแนะนำยีนกลู lydicus ใน S .
พลาส puc19 ใช้รูทีนย่อยโคลนและโคลน
การทดลอง การงอกและการ
ตาม Kitani et al . ( 2000 ) และ paranthaman และ
dharmalingam ( 2003 ) พลาสมิดจำนวน
60 lgml  1 และ apramycin ยืนยันเพิ่มเติมโดยการวิเคราะห์ PCR กับ
ไพร์เมอร์จำเพาะของยีนกลู . การสังเคราะห์และการหาลำดับเบสของดีเอ็นเอซึ่ง
ผลิตภัณฑ์ PCR DNA ได้เทคโนโลยีชีวภาพ Invitrogen ( จีน )