Biological samples were prepared fr

Biological samples were prepared from fresh pig liver homogenized in potassium phosphate buffer (0.1 M) (1:5 v/w). The samples were centrifuged at 1000 × g for 10 min and the supernatants were collected. To simulate the conditions of a genuine enzyme kinetics study, potassium phosphate were added together with a volume of nicotineamide adenine dinucleotide phosphate/nicotineamide adenine dinucleotide (NADPH/NADH) mix to a final concentration of 0.1 M and 1 mM, respectively (concentration of the stock solutions were 2 M and 20 mM, respectively). The enzymatic reactions were terminated by adding an equal volume of acetonitrile (ACN) to the sample mixture, also resulting in partial protein precipitation. Samples were centrifuged and the supernatant was diluted 10 times with water before analysis. 10 μL of analytes and internal standards were added to 200 μL of the sample before the final dilution step to give concentrations according to what is stated in following sections.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

มีเตรียมตัวอย่างทางชีวภาพจากตับหมูสด homogenized ในโพแทสเซียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (0.1 M) (1:5 v/w) ตัวอย่างได้จากที่ 1000 × g 10 นาที และ supernatants ถูกเก็บรวบรวม เพื่อจำลองสภาพของการศึกษาจลนพลศาสตร์ของเอนไซม์แท้ โพแทสเซียมฟอสเฟตเพิ่มพร้อมกับปริมาณของส่วนผสม nicotineamide คือ dinucleotide ฟอสเฟต/nicotineamide คือ dinucleotide (NADPH/NADH) เข้มข้น 0.1 M และ 1 มม. สุดท้ายตามลำดับ (ความเข้มข้นของการละลายได้ 20 มม. และ 2 เมตรตามลำดับ) ปฏิกิริยาของเอนไซม์ที่ถูกเลิกจ้าง โดยการเพิ่มปริมาณเท่ากับ (ACN) acetonitrile ผสมตัวอย่าง ยัง ส่งผลในการตกตะกอนโปรตีนบางส่วน ได้จากตัวอย่าง และ supernatant ถูกเจือจาง 10 เท่า ด้วยน้ำก่อนวิเคราะห์ ΜL 10 analytes และมาตรฐานภายในถูกเพิ่มไปยัง μL 200 ตัวอย่างก่อนขั้นตอนสุดท้ายเจือจางให้ความเข้มข้นตามระบุไว้ในส่วนต่อไป

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ตัวอย่างทางชีวภาพที่เตรียมจากตับหมูสดปั่นในบัฟเฟอร์โพแทสเซียมฟอสเฟต (0.1 M) (1: 5 V / w) ตัวอย่างถูกหมุนเหวี่ยงที่ 1000 ×กรัมเป็นเวลา 10 นาทีและ supernatants ถูกเก็บรวบรวม เพื่อจำลองสภาพของการศึกษาเอนไซม์จลนศาสตร์ของแท้โพแทสเซียมฟอสเฟตเข้าด้วยกันกับปริมาณของ nicotineamide adenine dinucleotide ฟอสเฟต / nicotineamide dinucleotide adenine (NADPH / NADH) ผสมกับความเข้มข้นสุดท้าย 0.1 M และ 1 มิลลิตามลำดับ (ความเข้มข้นของ โซลูชั่นหุ้น 2 M และ 20 มิลลิเมตรตามลำดับ) ปฏิกิริยาของเอนไซม์ถูกยกเลิกโดยการเพิ่มปริมาตรที่เท่ากันของ acetonitrile (ACN) ที่ผสมตัวอย่างนอกจากนี้ยังมีผลในการตกตะกอนโปรตีนบางส่วน ตัวอย่างที่ถูกปั่นและสารละลายเจือจาง 10 ครั้งด้วยน้ำก่อนที่จะวิเคราะห์ 10 ไมโครลิตรของวิเคราะห์และมาตรฐานภายในถูกเพิ่มเข้าไปใน 200 ไมโครลิตรของกลุ่มตัวอย่างก่อนขั้นตอนเจือจางสุดท้ายที่จะให้ความเข้มข้นตามสิ่งที่ระบุไว้ในส่วนต่อไปนี้