2.4. Fasting plasma triglycerides a

2.4. Fasting plasma triglycerides and free fatty acids
Fasting plasma concentration of triglycerides was measured by a commercial Ltype
triglyceride kit (Wako Diagnostics, Richmond, VA, USA). Non-esterified free fatty
acids levels were quantitatively determined by an enzymatic colorimetric method
(λmax=546 nm, Zen-bio, Research Triangle, NC, USA).
2.5. Gene expression analysis in stromal vascular fraction (SVF) of AT
Isolation of SVF of epididymal AT and gene expression analysis by quantitative
reverse transcriptase polymerase chain reaction were conducted as previously
described [26]. In brief, epididymal AT were minced and filtered through a cell
strainer and lysed, and the SVF was collected after centrifugation. Total RNA of SVF was
extracted and genomic DNA contamination was removed using the RNeasy Mini Kit
(Qiagen, Valencia, CA, USA) according to the manufacturer’s protocol. Gene expression
of Tnfa, Il6, Nos2, and Emr1 was analyzed by reverse-transcriptase real-time polymerase
chain reaction using commercial TaqMan Gene Expression Assays (Applied Biosystems,
Foster City, CA, USA), normalized to Gapdh as an endogenous control. Information of
the Taqman probes used in this study was reported previously [26]. Gene expression
was analyzed according to the delta Ct (ΔΔC
T) method normalized to Gapdh, and
expression levels were calculated as 2−ΔΔC
T.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.4 การถือศีลอดพลาสมาระดับไตรกลีเซอไรด์และกรดไขมันอิสระความเข้มข้นของพลาสมาถือศีลอดของระดับไตรกลีเซอไรด์ถูกวัด โดย Ltype พาณิชย์ชุดของไตรกลีเซอไรด์ (Wako วินิจฉัย ริชมอนด์ VA สหรัฐอเมริกา) ไม่ esterified ไขมันฟรีระดับกรด quantitatively ถูกกำหนด โดยวิธีการเทียบเคียงเอนไซม์ในระบบ(Λmax = 546 nm เซนชีวภาพ งานวิจัยสามเหลี่ยม NC, USA)2.5 วิเคราะห์นิพจน์ยีนใน stromal หลอดเลือดเศษ (SVF) ATแยก SVF epididymal AT และวิเคราะห์นิพจน์ยีน โดยเชิงปริมาณปฏิกิริยาลูกโซ่พอลิเมอเรส transcriptase กลับได้ดำเนินเป็นก่อนหน้านี้อธิบาย [26] สังเขป epididymal AT สับ และกรองผ่านเซลล์เครื่องร่อน และ lysed และรวบรวมไว้หลังจาก centrifugation SVF เป็นอาร์เอ็นเอรวม SVFแยก และ genomic DNA ปนถูกเอาออกโดยใช้ชุดมินิ RNeasy(Qiagen, Valencia, CA, USA) ตามโพรโทคอลของบริษัทผู้ผลิต แสดงออกของยีนของ Tnfa, Il6, Nos2 และ Emr1 ถูกวิเคราะห์ โดยพอลิเมอเรสแบบเรียลไทม์กลับ transcriptaseปฏิกิริยาลูกโซ่ที่ใช้เชิงพาณิชย์ TaqMan ยีนนิพจน์ Assays (Biosystems ใช้ฟอสเตอร์ซิตี้ CA, USA), ตามปกติ Gapdh เป็นตัวควบคุม endogenous ข้อมูลของคลิปปากตะเข้ Taqman ที่ใช้ในการศึกษานี้ได้รายงานก่อนหน้านี้ [26] แสดงออกของยีนได้วิเคราะห์ตามเดลต้า Ct (ΔΔCT) ตามปกติการ Gapdh วิธี และมีคำนวณนิพจน์ระดับเป็น 2−ΔΔCต.

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.4 การถือศีลอดไตรกลีเซอไรด์พลาสม่าและกรดไขมันอิสระการถือศีลอดความเข้มข้นในพลาสมาของไตรกลีเซอไรด์วัดโดย Ltype พาณิชย์ชุดไตรกลีเซอไรด์(วินิจฉัย Wako ริชมอนด์, VA, USA) Non-esterified ฟรีไขมันระดับกรดได้รับการพิจารณาในเชิงปริมาณโดยวิธีการสีเอนไซม์(λmax = 546 นาโนเมตรเซนชีวภาพ Research Triangle, NC, USA). 2.5 การวิเคราะห์การแสดงออกของยีนในส่วนของหลอดเลือด stromal (SVF) ของเอทีแยกSVF ของ epididymal AT และการวิเคราะห์การแสดงออกของยีนโดยปริมาณเอนไซม์ปฏิกิริยาลูกโซ่โพลิเมอร์ได้ดำเนินการในขณะที่ก่อนหน้านี้อธิบาย[26] ในช่วงสั้น ๆ epididymal ที่ถูกสับและกรองผ่านมือถือเครื่องกรองและlysed และ SVF ถูกเก็บรวบรวมหลังจากการหมุนเหวี่ยง รวมอาร์เอ็นเอของ SVF ถูกสกัดและการปนเปื้อนดีเอ็นเอจะถูกลบออกโดยใช้ RNeasy Mini Kit (Qiagen, วาเลนเซีย, CA, USA) ตามโปรโตคอลของผู้ผลิต การแสดงออกของยีนของ Tnfa, Il6, Nos2 และ Emr1 วิเคราะห์ย้อนกลับ transcriptase เวลาจริงโพลิเมอร์ปฏิกิริยาลูกโซ่ที่ใช้ในเชิงพาณิชย์ยีนTaqMan ตรวจการแสดงออก (Applied Biosystems, ฟอสเตอร์ซิตี, แคลิฟอร์เนีย, สหรัฐอเมริกา) ปกติ Gapdh เป็นการควบคุมภายนอก ข้อมูลของยานสำรวจ TaqMan ที่ใช้ในการศึกษาครั้งนี้ได้รับการรายงานก่อนหน้านี้ [26] การแสดงออกของยีนได้รับการวิเคราะห์ตามเดลต้ากะรัต (ΔΔC T) วิธีการปกติจะ Gapdh และระดับการแสดงออกที่ถูกคำนวณเป็น2 ΔΔCตัน

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.4 . ระดับน้ำไตรกลีเซอไรด์และกรดไขมันอิสระ
ระดับน้ำวัดความเข้มข้นของไตรกลีเซอไรด์โดย ltype
พาณิชย์ไตรกลีเซอไรด์ Kit ( Wako วินิจฉัย , Richmond , VA , USA ) ไม่ esterified ฟรีระดับกรดไขมัน
เชิงปริมาณที่กำหนดโดยมีเอนไซม์
พระชานุ ( λ max = 546 นาโนเมตร ไบโอเซน สามเหลี่ยมวิจัย , NC , USA ) .
2.5การวิเคราะห์การแสดงออกของยีนใน stromal หลอดเลือดส่วน svf ) ที่แยก svf
ดัน และการแสดงออกของยีนจากการวิเคราะห์โดยปริมาณ
reverse transcriptase โดยปฏิกิริยาลูกโซ่โพลีเมอร์เรส มีวัตถุประสงค์เป็นก่อนหน้านี้
อธิบาย [ 26 ] ในช่วงสั้น ๆ ดันที่ถูกสับและกรองผ่านกระชอนและเซลล์
lysed และ svf เก็บข้อมูลหลังการปั่นเหวี่ยง รวม svf ถูก
.การสกัดและการปนเปื้อนดีเอ็นเอถูกใช้ rneasy Mini Kit
( เพิ่ม , Valencia , CA , USA ) ตามขั้นตอนของผู้ผลิต การแสดงออกของยีนของ tnfa il6 nos2
, , , และ emr1 โดยใช้ reverse transcriptase polymerase chain reaction โดยใช้เวลาจริง
taqman พาณิชย์การแสดงออกของยีน ( Applied Biosystems )
, Foster City , CA , USA )ปกติจะ gapdh เป็นการควบคุมภายนอก . ข้อมูล taqman
ฟิวส์ที่ใช้ในการศึกษา คือ รายงานก่อนหน้านี้ [ 26 ]
วิเคราะห์การแสดงออกของยีนตามปากแม่น้ำ CT ( ΔΔ C
T ) ปกติจะ gapdh และ
ระดับการแสดงออกได้เป็น 2 −ΔΔ C
T