Folch methodThe tissue is homogeniz

Folch method

The tissue is homogenized with chloroform/methanol (2/1) to a final volume 20 times the volume of the tissue sample (1 g in 20 ml of solvent mixture). After dispersion, the whole mixture is agitated during 15-20 min in an orbital shaker at room temperature.

The homogenate is either filtrated (funnel with a folded filter paper) or centrifuged to recover the liquid phase.

The solvent is washed with 0.2 volume (4 ml for 20 ml) of water or better 0.9% NaCl solution. After vortexing some seconds, the mixture is centrifuged at low speed (2000 rpm) to separate the two phases. Remove the upper phase by siphoning and kept it to analyze gangliosides or small organic polar molecules. If necessary (need of removing labelled molecules...), rinse the interface one or two times with methanol/water (1/1) without mixing the whole preparation.

After centrifugation and siphoning of the upper phase, the lower chloroform phase containing lipids is evaporated under vacuum in a rotary evaporator or under a nitrogen stream if the volume is under 2-3 ml.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

วิธีการ Folchเนื้อเยื่อเป็น homogenized เป็นกลุ่ม ด้วยคลอโรฟอร์ม/เมทานอล (2/1) กับปริมาตรสุดท้าย 20 เท่าปริมาตรของตัวอย่างเนื้อเยื่อ (g 1 ใน 20 ml ส่วนผสมตัวทำละลาย) หลังจากกระจายตัว ส่วนผสมทั้งหมดเป็นนั้นกระตุ้นทำระหว่าง 15-20 นาทีในการเชคเกอร์ของวงโคจรที่อุณหภูมิห้องHomogenate เป็นแบบ filtrated (กรวย ด้วยกระดาษกรองพับ) หรือ centrifuged กู้เฟสของเหลว ตัวทำละลายเป็นน้ำล้าง ด้วยปริมาณ 0.2 (4 ml สำหรับ 20 ml) ของน้ำหรือ 0.9% NaCl อ่าน หลังจากวินาทีที่บาง vortexing ผสมเป็น centrifuged ที่ความเร็วต่ำ (2000 รอบต่อนาที) เพื่อแยกเฟสสอง เอาบนเฟส โดยการยักย้ายถ่ายเท และเก็บไปวิเคราะห์ gangliosides หรืออินทรีย์ขั้วของโมเลกุลขนาดเล็ก ถ้าจำเป็น (จำเป็นต้องเอาโมเลกุลมัน...), ล้างอินเทอร์เฟซหนึ่ง หรือสองครั้ง กับเมทานอล/น้ำ (1/1) โดยไม่ต้องผสมเตรียมทั้งหมด Centrifugation และยักย้ายถ่ายเทของขั้นตอนด้านบน ระยะคลอโรฟอร์มต่ำที่ประกอบด้วยโครงการจะหายไปภาย ใต้สุญญากาศใน evaporator โรตารี่ หรือภาย ใต้กระแสไนโตรเจนถ้าระดับเสียง ต่ำกว่า 2-3 ml

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

วิธี Folch เนื้อเยื่อยิ่งหดหายด้วยคลอโรฟอร์ม / เมทานอล (2/1) ไปยังเล่มสุดท้าย 20 เท่าปริมาณของตัวอย่างเนื้อเยื่อ (1 กรัมใน 20 มิลลิลิตรผสมตัวทำละลาย) หลังจากกระจายส่วนผสมทั้งหมดจะไม่สบายใจในช่วง 15-20 นาทีในเครื่องปั่นโคจรที่อุณหภูมิห้อง. homogenate เป็นทั้งกรอง (ช่องทางที่มีกระดาษกรองพับ) หรือหมุนเหวี่ยงที่จะกู้คืนของเหลว. ตัวทำละลายจะล้างด้วย 0.2 ปริมาณ ( 4 มล. 20 มล.) น้ำหรือดีกว่า 0.9% การแก้ปัญหาโซเดียมคลอไรด์ หลังจาก vortexing วินาทีบางส่วนผสมที่มีการหมุนเหวี่ยงที่ความเร็วต่ำ (2,000 รอบต่อนาที) ที่จะแยกสองขั้นตอน นำขั้นตอนบนโดยดูดและเก็บมันไว้ในการวิเคราะห์ gangliosides เล็กหรือโมเลกุลอินทรีย์ขั้วโลก ถ้าจำเป็น (จำเป็นต้องเอาโมเลกุลที่มีข้อความ ... ), ล้างอินเตอร์เฟซที่หนึ่งหรือสองครั้งด้วยเมทานอล / น้ำ (1/1) โดยไม่ต้องผสมเตรียมทั้ง. หลังจากการหมุนเหวี่ยงและการถ่ายเทของเฟสบนเฟสคลอโรฟอร์มที่มีไขมันต่ำ จะระเหยภายใต้สุญญากาศในเครื่องระเหยแบบหมุนหรือภายใต้กระแสไนโตรเจนถ้าปริมาณการอยู่ภายใต้ 2-3 มล

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ฟอล์ชวิธี

เนื้อเยื่อที่เป็นโฮโม / เมทานอลคลอโรฟอร์ม ( 2 / 1 ) ท้ายเล่ม 20 เท่าของปริมาตรของตัวอย่างเนื้อเยื่อ ( 1 กรัม ในตัวทำละลายผสม 20 มิลลิลิตร ) หลังจากการกระจายส่วนผสมทั้งหมดกำลังปั่นป่วนในช่วง 15-20 นาที ในการปั่นโคจรที่อุณหภูมิห้อง .

จะให้ปริมาณผลิต ( กรวยกับพับกระดาษกรอง ) หรือระดับกู้เฟสของเหลว

ตัวทำละลายคือล้างด้วย 0.2 ( 4 ml ปริมาณ 20 ml ) ของน้ำ หรือ 0.9% NaCl สารละลาย หลังจาก vortexing บางวินาที ส่วนผสมระดับที่ความเร็วต่ำ ( 2000 รอบต่อนาที ) เพื่อแยกทั้งสองส่วน เอาเฟสด้านบนโดยดูดและเก็บมันวิเคราะห์จับตัวหรือโมเลกุลมีขั้วเล็ก อินทรีย์ ถ้าจำเป็น ( ต้องเอาป้ายโมเลกุล . . . . . . . )ล้างการเชื่อมต่อหนึ่งหรือสองครั้งด้วยเมทานอลต่อน้ำ ( 1 / 1 ) โดยไม่ต้องผสม การเตรียมการทั้งหมด

หลังจากปั่นและดูดของเฟสบน , ล่าง ( ระยะที่มีไขมันจะระเหยภายใต้สุญญากาศ เครื่องระเหยแบบหมุน หรืออยู่ในกระแส ถ้าปริมาณไนโตรเจนอยู่ 2-3 มล.