To assay for the activities of AKR

To assay for the activities of AKR and SDR, a reaction mixture consisting of 25 mM potassium phosphate buffer (pH 7.0), 40 mM furfural, 0.4mMNADPH, and 20 ml AKR (1.3mg/ml) or SDR (1.3mg/
ml) (total reaction volume, 0.5 ml) was prepared as described previously [18]. Notably, furfural is poorly soluble in water at room temperature. However, 40 mM furfural does dissolve in water at higher temperatures (37 C and above); thus, furfural used for assays described in this study were dissolved in pre-warmed water or reaction buffer, and kept warmin thewater bath during assays. The assay was conducted at 40 C and activity wasmeasured by the rate of NADPH oxidation to NADPþ at 340 nm using a DU800 spectrophotometer (Beckman Coulter Inc., Brea, CA). A circulating water bath was connected directly to the cuvette compartment of the spectrophotometer to maintain reaction temperature at 37 C. The reaction was initiated by the addition of AKR or SDR to the mixture and decrease in absorbance was monitored every 10 s for 3 min. The initial velocity of the reaction is defined as the slope of the initial linear portion of the resulting curve. One unit of enzyme activity is defined as the number of micromoles of NADPH oxidized per minute, and the specific activity is defined as the number of
micromoles of NADPH oxidized per minute per milligram protein. Protein concentrations were determined using the Bradford reagent according to the manufacturer's protocol (Amresco®, Solon,
OH), using bovine serum albumin as a standard.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

การ assay สำหรับกิจกรรมของ AKR และ SDR ปฏิกิริยาส่วนผสมประกอบด้วย 25 มม.โพแทสเซียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (pH 7.0), 40 มม. furfural, 0.4mMNADPH และ 20 ml AKR (1.3 mg/ml) หรือ SDR (1.3 มิลลิกรัม /มล.) (รวมปฏิกิริยาปริมาตร 0.5 ml) เตรียมไว้ตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ [18] ยวด furfural จะละลายไม่ดีในน้ำที่อุณหภูมิห้อง อย่างไรก็ตาม 40 มม. furfural ละลายในน้ำที่อุณหภูมิสูง (37 C ขึ้นไป); , furfural ใช้ assays ที่อธิบายไว้ในการศึกษานี้ไม่ละลายในน้ำก่อน warmed หรือบัฟเฟอร์ปฏิกิริยา และเก็บน้ำ thewater warmin ระหว่าง assays ต่าง ๆ การทดสอบวิธีที่ wasmeasured 40 C และกิจกรรม โดยอัตราการออกซิเดชัน NADPH เพื่อ NADPþ ที่ 340 nm โดยใช้เครื่องทดสอบกรดด่างเป็น DU800 (Beckman Coulter Inc., Brea, CA) น้ำน้ำหมุนเวียนถูกเชื่อมต่อโดยตรงกับช่อง cuvette ของเครื่องทดสอบกรดด่างเพื่อรักษาอุณหภูมิปฏิกิริยาที่ 37 เซลเซียส เริ่มปฏิกิริยา โดยเพิ่ม AKR หรือ SDR เพื่อผสม และมีการตรวจสอบลดลง absorbance ทุก 10 s ใน 3 นาที ความเร็วเริ่มต้นของปฏิกิริยาเป็น defined เป็นความชันของเส้นส่วนเริ่มต้นของโค้งได้ หน่วยหนึ่งของเอนไซม์ defined เป็นจำนวน micromoles ของ NADPH ออกซิไดซ์ต่อนาที และกิจกรรม specific defined เป็นจำนวนmicromoles ของ NADPH ออกซิไดซ์ต่อนาทีต่อโปรตีน milligram ความเข้มข้นของโปรตีนถูกกำหนดใช้รีเอเจนต์แบรดฟอร์ดตามของโพรโทคอล (Amresco ® Solonโอ้), ใช้วัว serum albumin เป็นมาตรฐาน

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

เพื่อทดสอบสำหรับกิจกรรมของ AKR และ SDR, ผสมปฏิกิริยาประกอบด้วย 25 มิลลิโพแทสเซียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (pH 7.0) 40 มิลลิเฟอร์ฟูรัล, 0.4mMNADPH และ 20 มล. AKR (1.3mg / ml) หรือ SDR (1.3mg /
ml) (ปริมาตรปฏิกิริยารวม 0.5 มล.) ได้จัดทำขึ้นตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ [18] ยวดเฟอร์ฟูรัลคือไม่ดีที่ละลายในน้ำที่อุณหภูมิห้อง อย่างไรก็ตาม 40 มิลลิเฟอร์ฟูรัลไม่ละลายในน้ำที่อุณหภูมิสูง (37 C และสูงกว่า?); จึงเฟอร์ฟูรัลที่ใช้สำหรับการวิเคราะห์ที่อธิบายไว้ในการศึกษาครั้งนี้ได้รับการละลายในน้ำอุ่นก่อนหรือบัฟเฟอร์ปฏิกิริยาและเก็บไว้ warmin อาบน้ำในระหว่างการตรวจ thewater การทดสอบได้ดำเนินการที่ 40 องศาเซลเซียสและกิจกรรม wasmeasured โดยอัตราของการเกิดออกซิเดชัน NADPH เพื่อNADPþที่ 340 นาโนเมตรโดยใช้ spectrophotometer DU800 (Beckman Coulter อิงค์เบรีย, CA) อ่างน้ำหมุนเวียนได้รับการเชื่อมต่อโดยตรงกับช่อง cuvette ของ spectrophotometer เพื่อรักษาอุณหภูมิที่ 37 องศาเซลเซียส ปฏิกิริยาที่ได้ริเริ่มขึ้นโดยการเพิ่มของ AKR หรือ SDR ส่วนผสมและลดลงในการดูดกลืนแสงที่ถูกตรวจสอบทุก 10 วินาทีเป็นเวลา 3 นาที ความเร็วเริ่มต้นของการเกิดปฏิกิริยาคือนิยามเป็นความชันของเส้นตรงส่วนเริ่มต้นของเส้นโค้งที่เกิด หนึ่งหน่วยของเอนไซม์คือนิยามจำนวน micromoles ของ NADPH ออกซิไดซ์ต่อนาทีและกิจกรรมคไฟ speci คือนิยามจำนวน
micromoles ของ NADPH ออกซิไดซ์ต่อนาทีต่อมิลลิกรัมโปรตีน ความเข้มข้นของโปรตีนได้รับการพิจารณาโดยใช้น้ำยาแบรดฟอตามโปรโตคอลของผู้ผลิต (Amresco®โซล,
OH) โดยใช้ซีรั่มอัลบูมิวัวเป็นมาตรฐาน

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การทดสอบสำหรับกิจกรรมและ akr SDR , ปฏิกิริยาผสมประกอบด้วย 25 มิลลิโมลาร์โพแทสเซียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์ pH 7.0 ) , 40 มม. furfural , 0.4mmnadph และ akr 20 ml ( 1.3mg / ml ) หรือ SDR ( 1.3mg /
ml ) ( หมวด ปฏิกิริยารวม 0.5 ml ) ก็เตรียมตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ [ 18 ] . โดยเฉพาะอย่างยิ่ง furfural คือ ละลายได้ในน้ำที่อุณหภูมิห้อง อย่างไรก็ตาม40 มม. เฟอร์ฟูรัลไม่ละลายในน้ำที่อุณหภูมิสูง ( 37  C ขึ้นไป ) ; ดังนั้น , เฟอร์ฟูรัลใช้วิธีการที่อธิบายไว้ในการศึกษานี้คือ ละลายในน้ำอุ่นก่อนหรือบัฟเฟอร์ ปฏิกิริยา และเก็บไว้ใน warmin น้ำอาบน้ำใช้ . แบคทีเรียที่ใช้ใน  40 C และกิจกรรมวัดด้วยอัตราการ nadph nadp þที่ 340 nm ใช้ du800 Spectrophotometer ( เบคแมน คูลเตอร์ อิงค์เบรีย , แคลิฟอร์เนีย ) หมุนเวียนน้ำที่อาบเป็นเชื่อมต่อโดยตรงกับคิวเวตต์ ช่องของเครื่องรักษาอุณหภูมิที่ 37 องศาเซลเซียส  ปฏิกิริยาที่ถูกริเริ่มโดยนอกเหนือจาก akr หรือ SDR ในการผสม และการลดลงของค่าถูกตรวจสอบทุก 10 วินาที 3 นาทีความเร็วเริ่มต้นของปฏิกิริยา คือ เด จึงเน็ดเป็นส่วนเริ่มต้นของความชันของเส้นให้โค้ง หนึ่งหน่วยของเอนไซม์คือ เดอ จึงเน็ดเป็นหมายเลขของไมโครโมของ nadph ถูกออกซิไดซ์ต่อนาทีและกาจึง C กิจกรรม de จึงเน็ดเป็นหมายเลขของ
ไมโครโมของ nadph ถูกออกซิไดซ์ต่อนาทีต่อมิลลิกรัมโปรตีน .ความเข้มข้นของโปรตีนถูกใช้รีเอเจนต์ แบรดฟอร์ด ตามขั้นตอนของผู้ผลิต ( amresco ®เอเชีย
, , โอ้ ) ใช้อัลบูมินเป็นมาตรฐาน