Culture broth was centrifuged (10,0

Culture broth was centrifuged (10,000 rpm, 4 ◦C, 10 min) to
remove cells and debris and the supernatant was collected. Solid
ammonium sulfate was added to the supernatant with a saturation
of 80% under gentle stirring, and then kept at 4 ◦C overnight.
The suspension was centrifuged at 10,000 rpm for 30 min at 4 ◦C.
The precipitate was then dissolved in 20 mM Tris–HCl buffer (pH
7.5), and centrifuged (10,000 rpm, 4 ◦C, 10 min) again. The supernatant
was dialyzed against 20 mM Tris–HCl buffer (pH 7.5) to
remove the salts. The solution was applied to a Hiprep DEAE FF column
(1 ml) pre-equilibrated with 20 mM Tris–HCl buffer (pH 7.5),
The unbound proteins from the column were removed by washing
with the same buffer at a flow rate of 1 ml/min. Proteins bound
to the column were eluted with 20 ml 20 mM Tris–HCl buffer (pH
7.5) containing 0–1 M NaCl at the same flow rate, and fractions
of 2.0 ml were collected with online monitoring of protein elution
at 280 nm. Each fraction was assayed for -amylase activity and
fractions with enzyme activity were pooled. The pooled solution
was condensed by freeze-drying, then dissolved in 20 mM Tris–HCl
buffer (pH 7.5). A 0.5 ml aliquot of the solution was loaded onto a
superdex 75 10/300 GL (GE Healthcare) gel filtration column equilibrated
with 20 mM Tris–HCl buffer (pH 7.5) and eluted with the
same buffer at a flow rate of 0.5 ml/min.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

วัฒนธรรมซุปได้ centrifuged (10000 รอบต่อนาที 4 ◦C, 10 นาที)เอาเซลล์ และเศษ และ supernatant ถูกเก็บรวบรวม เป็นของแข็งแอมโมเนียมซัลเฟตมีเพิ่ม supernatant กับการอิ่มตัว80% ภายใต้กวนอ่อนโยน และจากนั้น เก็บที่ 4 ◦C ค้างคืนการระงับได้ centrifuged ที่ 10000 รอบต่อนาทีใน 30 นาทีที่ 4 ◦CPrecipitate ถูกละลายใน 20 มม.ตรี – HCl บัฟเฟอร์ (pH แล้ว7.5), และ centrifuged (10000 รอบต่อนาที 4 ◦C, 10 นาที) อีกด้วย Supernatantมี dialyzed กับ 20 มม.ตรี – HCl บัฟเฟอร์ (pH 7.5)เอาเกลือ การแก้ปัญหาถูกประยุกต์ใช้คอลัมน์ Hiprep DEAE FF(1 มล.) ก่อน equilibrated มี 20 มม.ตรี – HCl บัฟเฟอร์ (pH 7.5),โปรตีนที่ผูกจากคอลัมน์ถูกลบ โดยการซักผ้าผูกกับบัฟเฟอร์เดียวที่อัตราการไหล 1 มิลลิลิตร/นาทีของ โปรตีนคอลัมน์ถูก eluted กับ 20 ml 20 มม.ตรี – HCl บัฟเฟอร์ (pH7.5) ประกอบด้วย 0 – 1 M NaCl ที่เหมือนไหลอัตรา และเศษส่วนของ 2.0 ml ถูกรวบรวมไว้กับการตรวจสอบโปรตีน elution ออนไลน์ที่ 280 nm ทุกฝ่ายมี assayed สำหรับ - amylase กิจกรรม และส่วนเอนไซม์ถูกทางถูกพู การแก้ปัญหารวมถูกบีบ โดยขั้น แล้ว ละลายใน 20 มม.ตรี – HClบัฟเฟอร์ (pH 7.5) ส่วนลงตัว 0.5 ml ของโซลูชันถูกโหลดไปsuperdex 75 10/300 GL (GE สุขภาพ) เจกรองคอลัมน์ equilibratedมี 20 มม.ตรี – HCl บัฟเฟอร์ (pH 7.5) และ eluted ด้วยการบัฟเฟอร์เดียวที่อัตราการไหล 0.5 ml/นาที

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

น้ำซุปวัฒนธรรมได้รับการหมุนเหวี่ยง (10,000 รอบต่อนาที, 4 ◦C, 10 นาที)
ขจัดเซลล์และเศษซากและใสถูกเก็บรวบรวม ของแข็ง
แอมโมเนียมซัลเฟตถูกบันทึกอยู่ในสารละลายที่มีความอิ่มตัว
80% ภายใต้กวนอ่อนโยนและจากนั้นเก็บไว้ที่ 4 ◦Cค้างคืน.
ระงับถูกหมุนเหวี่ยงที่ 10,000 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 30 นาทีที่อุณหภูมิ 4 ◦C.
ตะกอนก็เลือนหายไปแล้วใน 20 มิลลิเมตร บัฟเฟอร์ Tris-HCl (pH
7.5) และหมุนเหวี่ยง (10,000 รอบต่อนาที, 4 ◦C, 10 นาที) อีกครั้ง ใส
ถูก dialyzed กับ 20 มมบัฟเฟอร์ Tris-HCl (pH 7.5) ที่จะ
เอาเกลือ วิธีการแก้ปัญหาที่ถูกนำไปใช้กับคอลัมน์ Hiprep DEAE FF
(1 มิลลิลิตร) ก่อน equilibrated กับ 20 มมบัฟเฟอร์ Tris-HCl (pH 7.5),
โปรตีนไม่ได้ผูกไว้จากคอลัมน์ถูกถอดออกโดยการล้าง
ด้วยบัฟเฟอร์แบบเดิมที่อัตราการไหลของ 1 มิลลิลิตร / นาที โปรตีนที่ถูกผูกไว้
กับคอลัมน์ถูกชะ 20 มล 20 มิลลิเมตรบัฟเฟอร์ Tris-HCl (pH
7.5) ที่มี 0-1 M NaCl ที่อัตราการไหลเดียวกันและเศษส่วน
2.0 มลถูกเก็บรวบรวมด้วยการตรวจสอบออนไลน์ชะโปรตีน
ที่ 280 นาโนเมตร ส่วนแต่ละคนได้รับการวิเคราะห์หรือไม่? กิจกรรม -amylase และ
เศษส่วนที่มีกิจกรรมของเอนไซม์ที่ได้รวบรวม วิธีการแก้ปัญหา pooled
ถูกควบแน่นโดยแช่แข็งแห้งละลายแล้วในวันที่ 20 มิลลิ Tris-HCl
บัฟเฟอร์ (pH 7.5) 0.5 มลลงตัวของการแก้ปัญหาที่ถูกโหลดลง
Superdex 75 10/300 GL (GE Healthcare) คอลัมน์กรอง equilibrated เจล
ที่มี 20 มิลลิบัฟเฟอร์ Tris-HCl (pH 7.5) และชะกับ
บัฟเฟอร์แบบเดิมที่อัตราการไหล 0.5 มิลลิลิตร / นาที

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ซุปวัฒนธรรมระดับ ( 10 , 000 RPM 4 ◦ C 10 นาที )

เอาเซลล์และ debris และนำกำลังรวบรวม แอมโมเนียมซัลเฟตแข็ง
เพิ่มเพื่อนำที่มีการอิ่มตัว
80% ภายใต้อ่อนโยนกวน แล้วเก็บที่ 4 องศาเซลเซียส ◦ค้างคืน
ระงับได้ระดับที่ 10 , 000 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 30 นาทีที่ 4 ◦ C .
ที่ถูกละลายใน 20 มม. โดย– HCl บัฟเฟอร์ pH
7.5 ) ,ไฟฟ้า ( 10 , 000 RPM 4 ◦ C 10 นาที ) อีก และน่าน
คือผ่านกับ 20 มม. จากบัฟเฟอร์ pH 7.5 ( HCL )

เอาเกลือ สารละลายที่ใช้กับ FF hiprep ทำคอลัมน์
( 1 มิลลิลิตร ) ก่อน equilibrated 20 มม. โดย– HCl บัฟเฟอร์ pH 7.5 ) ,
จับกับโปรตีนจากคอลัมน์ถูกถอดออกซัก
กับบัฟเฟอร์เดียวกันที่อัตราการไหล 1 มิลลิลิตร / นาที โปรตีนผูกพัน
ในคอลัมน์เป็นตัวอย่างกับ 20 มม. จากบัฟเฟอร์และ HCL 20 ml ( pH
7.5 ) ความเข้มข้น 0 – 1 M NaCl ที่อัตราการไหลเท่ากัน เศษส่วน
2.0 มิลลิลิตรวัตถุประสงค์การตรวจสอบออนไลน์ของโปรตีน (
ที่ 280 nm . แต่ละส่วนซีรั่มสำหรับ  - อะไมเลสและกิจกรรม
เศษส่วนที่มีเอนไซม์ถูกรวม . รวมโซลูชั่น
ถูกย่อโดยการทำแห้งเยือกแข็งแล้วละลายใน 20 มม. และ HCl
นอกจากนี้บัฟเฟอร์ pH 7.5 ) 0.5 ml ส่วนลงตัวของสารละลายที่โหลดลง
superdex 75 10 / 300 GL ( GE Healthcare ) คอลัมน์เจลฟิลเตร equilibrated
20 มม. โดย– HCl บัฟเฟอร์ pH 7.5 ) และตัวอย่างกับ
บัฟเฟอร์เดียวกันในอัตรา 0.5 มิลลิลิตร / นาที