5. Determine the live weight of eac

5. Determine the live weight of each mouse prior to each injection and record. Mark each animal to distinguish it on subsequent days.
6. Calculate the volume of ENU for injection depending on the desired dose. For 100 mg ENU/kg mouse body weight, the calculation is as follows:
Formula

where 0.72 is OD398nm at 1 mg/mL and 5 is the dilution factor (see Steps 3-4).
Volume of ENU to inject (mL) = mouse weight (g) × X
The concentration of the ENU solution should be such that

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

5. กำหนดน้ำหนักสดของเมาส์แต่ละก่อนฉีดและบันทึกแต่ละ ทำเครื่องหมายแต่ละสัตว์เพื่อแยกความแตกต่างในวันต่อมา6. คำนวณหาปริมาตรของ ENU สำหรับฉีดขึ้นอยู่กับปริมาณที่ต้องการ สำหรับ 100 มิลลิกรัมต่อน้ำหนักตัวเมาส์ ENU กิโลกรัม การคำนวณเป็นดังนี้:สูตรที่ 0.72 เป็น OD398nm 1 มิลลิกรัม/มิลลิลิตร และ 5 เป็นตัวเจือจาง (ดูขั้นตอน 3-4)ปริมาตรของ ENU ฉีด (mL) =เมาส์×น้ำหนัก (กรัม) Xความเข้มข้นของโซลูชัน ENU ควรให้ < 1 mL จะฉีดเข้าไปในสัตว์แต่ละสายพันธุ์ inbred ต่าง ๆ ของหนูตอบสนองแตกต่างกันเพื่อกำหนดปริมาณของ ENU ในทำนองเดียวกัน ต่างกันปริมาณของ ENU ให้อัตราการกลายพันธุ์แตกต่างกัน ในการผลิตอัตราการกลายพันธุ์สูงสุด ยอดเงินที่เหมาะสมสำหรับหนู C57BL/6J เป็นปริมาณรายสัปดาห์ที่สามของ 100 มิลลิกรัม/กิโลกรัมน้ำหนักตัว ยาเดี่ยวมีประสิทธิภาพคือ 250 มิลลิกรัม/กิโลกรัม โปรโตคอลสำหรับปริมาณประสิทธิภาพสำหรับสายพันธุ์ inbred ต่าง ๆ อ้างอิงในการอภิปราย7. ในสารเคมีมีประสิทธิภาพดูดไอสาร จัดการที่เหมาะสมจำนวน ENU intraperitoneally กับเมาส์แต่ละสัตว์อาจปรากฏสั่น และง่วงสำหรับ ~ 30 นาทีหลังฉีดเนื่องจากแอลกอฮอล์ ควรใช้เวลา ~ 1 h ฉีดหนู 30ยกเลิกการเรียกและกำจัด ENU8. การหกรั่วไหลทั้งหมดทำความสะอาด และแช่อุปกรณ์ (beakers, vials ฯลฯ) และถุงมือมาไปยังฝั่ง ENU ด้วยโซลูชันยกทั้งหมด ดึงยกโซลูชันเป็นเข็มทั้งหมดที่ได้รับกับ ENU ย้ายสินค้าบำบัดในถุงพลาสติก และยกเลิกเสีย ยกวิธี ENU เหลือ และละทิ้งอย่างเหมาะสม9. ฉีดน้อย 50 mL ของยกลง ENU เหลือในภาชนะ ISOPAC ปล่อยในฮูดโตนดเคมี สัมผัสกับไฟ น้อย 24 h10. เอาตราประทับจากคอนเทนเนอร์ ISOPAC และละทิ้ง inactivated ENU เป็นคอนเทนเนอร์เสียอันตรายสารเคมี บันทึกอย่างเหมาะสม ล้างภาชนะ ISOPAC กับ H2O และยกเลิกเนื้อหาในคอนเทนเนอร์เสียอันตรายสารเคมี ละทิ้งคอนเทนเนอร์ ISOPAC ว่างเปล่าในแก้วเสีย11. ให้หนูในสารเคมีมีประสิทธิภาพดูดสำหรับอย่างน้อย 24 ชมหลังฉีด หรือเปลี่ยนเตียงน้อย 24 ชมหลังจากฉีดลงในถุงพลาสติกที่ประกอบด้วยกระดาษที่อิ่มตัวไป ด้วยยกโซลูชั่น (นี้มักจะต้องทำเครื่องหมายปากกาที่ประกอบด้วยสัตว์เลี้ยงบำบัด)เพศชายการกลายพันธุ์การผสมพันธุ์12. หลังจากฉีด ชายผ่านรอบระยะเวลาของภาวะมีบุตรยากที่ยากลืม ~ 10-12 wk. ตั้งชายในกรงกับหญิง 8-10 wk หลังจากการฉีดครั้งสุดท้ายเพื่อประเมินการฟื้นตัวของความอุดมสมบูรณ์ดูการแก้ไขปัญหา13. เลือกแผนการผสมพันธุ์ที่เหมาะสม ตามการกลายพันธุ์ที่น่าสนใจแผนงานการปรับปรุงพันธุ์จะขึ้นอยู่กับชนิดของการกลายพันธุ์การศึกษา เช่น หลัก recessive หรือปรับเปลี่ยน (ดูคำอธิบาย) วางแผนการกู้คืน gametes ประมาณ 50 ต่อเพศชายหลักหรือปรับเปลี่ยนกลายพันธุ์ และ gametes ประมาณ 30 ต่อเพศชายสำหรับแบบ recessive14. ใช้ matings หมุน (ดู Fig. 1) ปี้ชายตามแผนผสมพันธุ์ที่เลือกในขั้นตอนที่ 13 ชายหญิงใหม่ (หรือหญิงใหม่ 2 ขึ้นอยู่กับโพรโทคอสัตว์) การผสมพันธุ์แต่ละสัปดาห์สำหรับ 6-7 wk จนกว่าจะได้รับหมายเลขที่เหมาะสมของ gametes ตั้งค่าแต่ละกรงใหม่ ตามความจำเป็นแต่ละสัปดาห์

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

5. กำหนดน้ำหนักสดของเมาส์แต่ละก่อนที่จะมีการฉีดแต่ละและบันทึก ทำเครื่องหมายสัตว์แต่ละความแตกต่างในวันต่อมา.
6 การคำนวณปริมาณของเสำหรับการฉีดขึ้นอยู่กับปริมาณที่ต้องการ สำหรับเ 100 มิลลิกรัม /
กิโลกรัมน้ำหนักตัวเมาส์การคำนวณดังนี้สูตรที่0.72 เป็น OD398nm ณ วันที่ 1 มก. / มิลลิลิตรและ 5 เป็นปัจจัยการเจือจาง (ดูขั้นตอนที่ 3-4). ปริมาณการเฉีด (มิลลิลิตร) = เมาส์ น้ำหนัก (g) × X ความเข้มข้นของการแก้ปัญหาเควรเช่นที่ <1 มิลลิลิตรถูกฉีดเข้าไปในสัตว์แต่ละ. สายพันธุ์พันธุ์ต่าง ๆ ของหนูตอบสนองแตกต่างกันไปปริมาณที่กำหนดของเ ในทำนองเดียวกันในปริมาณที่แตกต่างกันของ ENU ให้อัตราการกลายพันธุ์ที่แตกต่างกัน การผลิตอัตราการกลายพันธุ์สูงสุดในปริมาณที่เหมาะสมสำหรับ C57BL / 6J หนูสามรายสัปดาห์ปริมาณ 100 มิลลิกรัม / กิโลกรัมน้ำหนักตัว ยาที่เดียวที่มีประสิทธิภาพคือ 250 มิลลิกรัม / กิโลกรัม โปรโตคอลสำหรับการเพิ่มประสิทธิภาพปริมาณสำหรับสายพันธุ์ที่แตกต่างกันมา แต่กำเนิดมีการอ้างอิงในการอภิปราย. 7 ในตู้ดูดควันสารเคมีที่มีประสิทธิภาพการจัดการจำนวนที่เหมาะสมของเ intraperitoneally เมาส์แต่ละ. สัตว์อาจปรากฏสั่นคลอนและเซื่องซึมสำหรับ ~ 30 นาทีหลังฉีดเพราะเครื่องดื่มแอลกอฮอล์ มันควรจะใช้เวลาประมาณ 1 ชั่วโมงที่จะฉีด 30 หนู. พลังและจำหน่ายไปซึ่งเ8 ทำความสะอาดที่รั่วไหลและแช่อุปกรณ์ทั้งหมด (บีกเกอร์, ขวด ฯลฯ ) และถุงมือที่เข้ามาติดต่อกับเกับยับยั้งการแก้ปัญหา ดึงขึ้นลงในการแก้ปัญหาการยับยั้งเข็มทั้งหมดที่ได้รับในการติดต่อกับเ ใส่รายการได้รับการรักษาในถุงพลาสติกและทิ้งเสีย ยับยั้งการแก้ปัญหาใด ๆ ที่เเหลือและทิ้งอย่างเหมาะสม. 9 ฉีดอย่างน้อย 50 มิลลิลิตรยับยั้งการแก้ปัญหาการเข้าสู่ ENU ที่เหลืออยู่ในภาชนะ ISOPAC ทิ้งไว้ในตู้ดูดควันสารเคมีที่สัมผัสกับแสงเป็นเวลาอย่างน้อย 24 ชม. 10 นำตราประทับจากภาชนะ ISOPAC และทิ้งเใช้งานเป็นสารเคมีภาชนะบรรจุของเสียอันตราย บันทึกเหมาะสม ล้างภาชนะ ISOPAC กับ H2O และเนื้อหาทิ้งลงในภาชนะบรรจุสารเคมีของเสียอันตราย ทิ้งภาชนะอบ ISOPAC เสียแก้ว. 11 ให้หนูในตู้ดูดควันสารเคมีที่มีประสิทธิภาพอย่างน้อย 24 ชั่วโมงหลังจากการฉีดหรือเปลี่ยนเครื่องนอนอย่างน้อย 24 ชั่วโมงหลังจากการฉีดเข้าไปในถุงพลาสติกที่มีกระดาษอิ่มตัวกับการแก้ปัญหาการยับยั้ง (ซึ่งโดยปกติจะต้องมีการทำเครื่องหมายปากกาที่มีการรักษาสัตว์.) เพศผู้ผสมพันธุ์การกู้คืนการกลายพันธุ์12 หลังจากฉีดเพศชายต้องผ่านช่วงเวลาของการมีบุตรยากที่มีจำนวน จำกัด ~ 10-12 สัปดาห์ ตั้งค่าเพศชายอยู่ในกรงกับผู้หญิง 8-10 สัปดาห์หลังจากฉีดสุดท้ายที่จะประเมินการฟื้นตัวของความอุดมสมบูรณ์. ดูการแก้ไขปัญหา. 13 เลือกรูปแบบการปรับปรุงพันธุ์ที่เหมาะสมตามการกลายพันธุ์ที่น่าสนใจ. โครงการปรับปรุงพันธุ์จะขึ้นอยู่กับชนิดของการกลายพันธุ์ของการศึกษาคือ, เด่น, ถอยหรือการปรับเปลี่ยน (ดูคำอธิบาย) วางแผนที่จะกู้คืนประมาณ 50 ต่อเซลล์สืบพันธุ์ชายที่โดดเด่นสำหรับการกลายพันธุ์หรือการปรับเปลี่ยนและประมาณ 30 ต่อเซลล์สืบพันธุ์ชายสำหรับโครงการด้อย. 14 หมุนใช้ถอนราก (ดูรูปที่ 1). ที่จะแต่งงานเพศชายตามโครงการปรับปรุงพันธุ์ที่เลือกไว้ในขั้นตอนที่ 13. เมทเพศชายให้เป็นหญิงใหม่ (หรือผู้หญิงสองคนใหม่ขึ้นอยู่กับโปรโตคอลสัตว์) ในแต่ละสัปดาห์สำหรับ 6-7 สัปดาห์จนกว่า จำนวนที่เหมาะสมของเซลล์สืบพันธุ์ได้รับ ตั้งค่าแต่ละกรงใหม่ที่มีความจำเป็นในแต่ละสัปดาห์

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

For yourself.For yourself.For yourself.For yourself.For yourself.For yourself.For yourself.For yourself.For yourself.For yourself.