A molecular approach to develop det

A molecular approach to develop detection procedures
for bacterial pathogens involves targeting one of
the genes encoding a virulence factor. One such gene
implicated in the virulence of Vibrio species encodes
for hemolysins. Hemolysins are responsible for the disruption
of the erythrocyte membrane or hemolysis and
genes encoding for hemolysins have been reported to
be present in several members of the genus including
V. harveyi (Hirono et al., 1996; Nishibuchi and Kaper,
1995; Nishibuchi et al., 1990; Zhang et al., 2001). Hemolysin
genes have been targeted in PCR for the detection
of pathogenic strains of Vibrio species including
hemolysin genes (tl, tdh and trh) of V. parahaemolyticus
(Bej et al., 1999) and V. vulnificus cytolysin gene
(Lee et al., 1998).
Studies conducted by Zhang and Austin (2000) suggested
that hemolysins are one of the pathogenic determinants
of several V. harveyi strains isolated from a
variety of hosts and geographic origins. Subsequently,
they isolated the duplicated hemolysin genes (vhhA
and vhhB) of a strain of V. harveyi pathogenic to
salmons (Zhang et al., 2001). Sequences of the two
copies of the V. harveyi (VIB 645) hemolysin genes
(vhhA and vhhB), are almost identical and primers that
could amplify the 1.3 kb open reading frame of both
copies are already available but have not been usedfor detection of the species. The vhh gene sequences
of V. harveyi VIB 645 showed the highest homology
with the thermolabile gene (tl) of the close relative V.
parahaemolyticus, but with only 85.6% degree of identity,
suggesting that the sequence variation in the hemolysin
genes of different species may be targeted for
species-specific detection of Vibrio isolates.
This present study focused on the detection of ten V.
harveyi strains from various hosts and a reference V.
harveyi strain IFO 15634, using new PCR primers designed
in this study and targeting the hemolysin gene.
A combination of the new PCR primers and a primer
set from an earlier study by Zhang and co-workers
(2001) was also tested, resulting in the identification of
a primer set specific for amplifying a 308-bp fragment
of the hemolysin gene in all strains of V. harveyi
tested. The ultimate goal of the study is to develop a
protocol for the rapid and accurate detection of V. harveyi
via hemolysin gene-targeted PCR in order to facilitate
effective disease prevention and surveillance of
hatchery-reared marine animals.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

วิธีการแบบโมเลกุลเพื่อพัฒนากระบวนการตรวจสอบสำหรับแบคทีเรียโรคเกี่ยวข้องกับการกำหนดเป้าหมายหนึ่งยีนที่เข้าตัว virulence หนึ่งยีนเกี่ยวข้องใน virulence ของต่อชนิดจแมปสำหรับ hemolysins Hemolysins รับผิดชอบในทีมเมมเบรนของเม็ดเลือดแดงหรือ hemolysis และยีนที่เข้ารหัสสำหรับ hemolysins มีการรายงานไปยังมีอยู่ในสมาชิกของสกุลรวมทั้งV. harveyi (Hirono et al., 1996 Nishibuchi และ Kaper1995 Nishibuchi และ al., 1990 จางและ al., 2001) Hemolysinยีนได้กำหนดเป้าหมายใน PCR ในการตรวจพบของสายพันธุ์ pathogenic ของต่อสปีชีส์รวมถึงhemolysin ยีน (tl, tdh และ trh) ของ V. parahaemolyticus(Bej et al., 1999) และ V. vulnificus cytolysin ยีน(Lee et al., 1998)ศึกษาโดยเตียวและ Austin (2000) แนะนำhemolysins หนึ่งของดีเทอร์มิแนนต์ pathogenicของสายพันธุ์ harveyi V. หลายที่แยกต่างหากจากการความหลากหลายของโฮสต์และจุดเริ่มต้นทางภูมิศาสตร์ ในเวลาต่อมาพวกเขาแยกต่างหาก (vhhA ยีน hemolysin ที่ซ้ำกันและ vhhB) ของต้องใช้ของ V. harveyi pathogenic เพื่อsalmons (Zhang et al., 2001) ลำดับที่สองสำเนาของยีน hemolysin ที่ V. harveyi (VIB 645)(vhhA และ vhhB), จะเกือบเหมือน และไพรเมอร์ที่สามารถขยายกรอบเปิดอ่าน 1.3 kb ของทั้งสองสำเนามีอยู่แล้ว แต่ไม่ได้ตรวจหาสายพันธุ์ usedfor ลำดับยีน vhhของ V. harveyi VIB 645 พบ homology สูงสุดด้วยการ thermolabile ยีน (tl) ของ V ญาติใกล้ชิดparahaemolyticus แต่เฉพาะระดับ 85.6% รหัสประจำตัวแนะนำที่เปลี่ยนแปลงลำดับใน hemolysinยีนชนิดต่าง ๆ อาจมีการกำหนดเป้าหมายสำหรับผลตรวจ species-specific แยกการศึกษาปัจจุบันนี้เน้นการตรวจพบ 10 Vสายพันธุ์ harveyi จากโฮสต์ต่าง ๆ และอ้างอิง Vต้องใช้ harveyi IFO 15634 ใช้ไพรเมอร์ PCR ใหม่ที่ออกแบบมาในการศึกษานี้และการกำหนดเป้าหมายยีน hemolysinไพรเมอร์ PCR ใหม่และแนวทางสำหรับการจากการศึกษาก่อนหน้านี้โดยเตียวและเพื่อนร่วมงาน(2001) นอกจากนี้ยังมีทดสอบ ในรหัสของแนวทางสำหรับการตั้งค่าเฉพาะสำหรับมือส่วน 308 bpของยีน hemolysin ในสายพันธุ์ทั้งหมดของ V. harveyiทดสอบ เป้าหมายสูงสุดของการศึกษาคือการ พัฒนาโพรโทคอลสำหรับการตรวจอย่างรวดเร็ว และแม่นยำของ V. harveyiผ่าน hemolysin ยีนเป้าหมายไปยัง PCR เพื่อป้องกันโรคมีประสิทธิภาพและการเฝ้าระวังของผลิตภัณฑ์โรงเพาะสัตว์ทะเล

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

วิธีโมเลกุลการพัฒนาวิธีการตรวจหาเชื้อโรคแบคทีเรียที่เกี่ยวข้องกับการกำหนดเป้าหมายหนึ่งในยีนที่เข้ารหัสปัจจัยความรุนแรง หนึ่งเช่นยีนที่เกี่ยวข้องในความรุนแรงของสายพันธุ์ของเชื้อ Vibrio เข้ารหัสสำหรับhemolysins hemolysins มีความรับผิดชอบสำหรับการหยุดชะงักของเมมเบรนของเม็ดเลือดแดงหรือเม็ดเลือดแดงแตกและยีนสำหรับhemolysins ได้รับรายงานที่จะนำเสนอในสมาชิกหลายคนของพืชและสัตว์รวมทั้งโวลต์ harveyi (โรโน et al, 1996;. Nishibuchi และ Kaper, 1995; Nishibuchi, et al, 1990;.. Zhang et al, 2001) hemolysin ยีนมีการกำหนดเป้าหมายใน PCR ในการตรวจหาสายพันธุ์ที่ทำให้เกิดโรคของสายพันธุ์ของเชื้อVibrio รวมทั้งยีนhemolysin (TL TDH และ TRH) ของ V. parahaemolyticus (Bej et al., 1999) และ V. vulnificus cytolysin ยีน(Lee et al., 1998). การศึกษาที่จัดทำโดยวอชิงตันโพสต์และออสติน (2000) ชี้ให้เห็นว่าhemolysins เป็นหนึ่งที่ทำให้เกิดโรคในปัจจัยหลายV. harveyi สายพันธุ์ที่แยกได้จากความหลากหลายของเจ้าภาพและต้นกำเนิดทางภูมิศาสตร์ ต่อจากนั้นพวกเขาแยกยีน hemolysin ซ้ำ (vhhA และ vhhB) ของสายพันธุ์ของ V. harveyi ที่ทำให้เกิดโรคที่จะปลาแซลมอน(Zhang et al., 2001) ลำดับของทั้งสองสำเนาของโวลต์ harveyi (VIB 645) ยีน hemolysin (vhhA และ vhhB) เกือบจะเหมือนกันและไพรเมอร์ที่สามารถขยาย1.3 กิโลกรอบเปิดอ่านทั้งเล่มมีอยู่แล้วแต่ยังไม่ได้รับการตรวจสอบ usedfor ของ สายพันธุ์ ลำดับยีน vhh ของ V. harveyi VIB 645 แสดงให้เห็นว่าที่คล้ายคลึงกันมากที่สุดกับยีนthermolabile (TL) ของญาติสนิท V. parahaemolyticus แต่มีเพียง 85.6% ระดับของตัวตนชี้ให้เห็นว่าการเปลี่ยนแปลงลำดับในhemolysin ยีนที่แตกต่างกันของสายพันธุ์ อาจจะกำหนดเป้าหมายสำหรับสายพันธุ์เฉพาะการตรวจสอบแยกเชื้อVibrio. นี้การศึกษานี้มุ่งเน้นไปที่การตรวจสอบของสิบวีสายพันธุ์ harveyi จากครอบครัวต่างๆและการอ้างอิงวีสายพันธุ์harveyi IFO 15,634 โดยใช้ไพรเมอร์ PCR ใหม่ที่ออกแบบในการศึกษานี้และการกำหนดเป้าหมายhemolysin ยีน. การรวมกันของไพรเมอร์ PCR ใหม่และไพรเมอร์ตั้งจากการศึกษาก่อนหน้านี้จางและเพื่อนร่วมงาน(2001) ได้รับการทดสอบยังส่งผลให้บัตรประจำตัวของไพรเมอร์ตั้งเฉพาะเจาะจงสำหรับการขยายส่วน308 bp ของยีน hemolysin ในทุกสายพันธุ์ของ V. harveyi ทดสอบ เป้าหมายสูงสุดของการศึกษาคือการพัฒนาโปรโตคอลสำหรับการตรวจสอบอย่างรวดเร็วและถูกต้องของ V. harveyi ผ่าน hemolysin ยีน PCR กำหนดเป้าหมายเพื่อความสะดวกในการป้องกันโรคที่มีประสิทธิภาพและการเฝ้าระวังของโรงเพาะฟัก-เลี้ยงสัตว์ทะเล

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

วิธีการตรวจจับโมเลกุลเพื่อพัฒนาขั้นตอน
สำหรับแบคทีเรียเชื้อโรคที่เกี่ยวข้องกับเป้าหมายหนึ่งของ
ยีนปัจจัยความรุนแรงการเข้ารหัส เช่นยีน
เข้ามาเกี่ยวข้องกับความรุนแรงของเชื้อ Vibrio ชนิดเข้ารหัส
สำหรับ hemolysins . hemolysins รับผิดชอบหยุดชะงัก
ของเยื่อหุ้มเม็ดเลือดแดง หรือยีนที่เข้ารหัสสำหรับการ


hemolysins ได้รับรายงานอยู่ในสมาชิกหลายสกุลรวมทั้ง
V . harveyi ( ฮิโรโนะ et al . , 1996 ; nishibuchi และกะเปอร์
1995 ; nishibuchi et al . , 1990 ; Zhang et al . , 2001 ) ตรง
ยีนตกเป็นเป้าหมายใน PCR เพื่อตรวจหาสายพันธุ์ของเชื้อแบคทีเรียก่อโรคชนิด

ตรงรวมทั้งยีน ( TL , tdh tdh trh และ )
( bej et al . , 1999 ) และ V . vulnificus cytolysin ยีน
( ลี et al . , 1998 ) .
การศึกษาที่ดำเนินการ โดย จาง และ ออสติน ( 2000 ) พบว่า hemolysins

เป็นหนึ่งในเชื้อโรคปัจจัยหลาย V . harveyi สายพันธุ์ที่แยกได้จาก
หลากหลายเจ้าภาพและกำเนิดทางภูมิศาสตร์ ต่อมา
พวกเขาแยกซ้ำตรงยีน ( vhha
และ vhhb ) ของสายพันธุ์ของเชื้อ V . harveyi

แซลม่อน ( Zhang et al . , 2001 ) ลำดับ 2
สำเนาของโวลต์5 ( VIB 645 ) ตรงยีน
( vhha และ vhhb ) เกือบจะเหมือนกันและไพรเมอร์ที่
สามารถขยาย 1.3 กิโลเปิดอ่านกรอบของทั้งสอง
ชุดพร้อมแล้ว แต่ยังไม่ได้รับการตรวจหาชนิดใช้ . การ vhh ยีน ลำดับ
V . harveyi VIB 645 แสดง
ตัวสูงสุดกับยีน thermolabile ( TL ) ของญาติสนิท V
parahaemolyticus , แต่มีเพียง 856 % ระดับเอกลักษณ์
แนะนำว่าลำดับการเปลี่ยนแปลงในซีรัม
ยีนชนิดต่าง ๆ อาจเป็นเป้าหมายสำหรับการตรวจหาเชื้อ Vibrio เผ่าพันธุ์ - เฉพาะ
.
การศึกษานี้เน้นการตรวจหา V . harveyi สายพันธุ์ 10
จากโฮสต์ต่าง ๆ และอ้างอิง V
harveyi สายพันธุ์ IFO 15634 โดยใช้ไพรเมอร์ที่ออกแบบ
) ใหม่ ในการศึกษานี้ และเป้าหมาย
ตรงยีนการรวมกันของ PCR ไพรเมอร์รองพื้น
ชุดใหม่และจากการศึกษาก่อนหน้านี้โดย Zhang และเพื่อนร่วมงาน
( 2001 ) ยังได้ทดสอบผลในการตั้งค่าเฉพาะสำหรับ amplifying
รองพื้นรุ่น 308 BP ~
ของตรงยีนในสายพันธุ์ของ V . harveyi
ทดสอบ เป้าหมายสูงสุดของการศึกษาคือการพัฒนา
พิธีสารเพื่อตรวจจับอย่างรวดเร็วและถูกต้องของ V . harveyi
ผ่านยีนเป้าหมายโดยตรงเพื่อให้การป้องกันโรคมีประสิทธิภาพและการเฝ้าระวังของ

ฟาร์มเลี้ยงสัตว์ทะเล