with R. stolonifer. Total RNA was extracted from peach fruit according
to the method described by Chang et al. (1993) with some modifications.
RT-PCR was performed using the PrimeScriptTM 16 1st Strand
cDNA Synthesis Kit (TaKaRa, Japan). Short and conserved segments
of PpNPR1-like (GenBank ID: DQ149935), PpPR-like (GenBank ID:
AF362989), PpCHI (GenBank ID: AF206635), PpGNS (GenBank ID:
U49454), PpPAL (GenBank ID: AF206634), PpLOX1 (GenBank ID:
EU883638) and PpCAT1 (GenBank ID: AJ496418) were cloned by degenerate
primers. Independent PCR with 25 cycles was performed using
aliquots (1 μL) of cDNA samples, and a constitutively expressed gene
18S-rRNA (GenBank ID: L28749.1) was used as a quantitative control
in the RT-PCR analysis. The sequences of primers used for RT-PCR analysis
were the following: PpNPR1-like_forward: 5′-GACCCAAACATGCC
AGCAGTG-3′, PpNPR1-like_Reverse: 5′-ATCCTTCGGCCTTGTCAACCT-3′;
PpPR1-like_forward: 5′-ATCAACTGGGACTTGCGTACT-3′, PpPR1-like_
reverse: 5′-TAGTCGCCACAGTCAACAAAG-3′; PpCHI_forward:5′-GT
GGAAAAGCAATAGGGGAG-3′',PpCHI_reverse:5′-TTCCAGCCCTTACCA
CAT-3′; PpGNS_forward:5′-ATTTCTCTTGCTGGTCTTG-3′, PpGNS_
reverse:5′-CTCTGGGGTCTTTCTATTCT-3′; PpPAL_forward: 5′-TTGAC
CGCGAGTACGTTTT -3′; PpPAL_ reverse: 5′-CTGTTTGGGGTTGCTGAT
T-3′; PpLOX1_forward: 5′-GGACGGGACTCAGATTACCA-3′; PpLOX1_
reverse: 5′-GTGCCGACTCTTGTGGACTA-3′; PpCAT1_forward: TCAT
GATATTTCTCAGCTTACA-3′; PpCAT1_reverse: 5′-CTCCAACCTTAATA
กับ R. stolonifer อาร์เอ็นเอทั้งหมดที่สกัดจากผลไม้พีชตาม
วิธีการอธิบายโดยช้างและ al. (1993) มีการปรับเปลี่ยนบางอย่าง
ทำ RT-PCR ใช้สแตรนด์ 1 16 PrimeScriptTM
cDNA ชุดสังเคราะห์ (TaKaRa ญี่ปุ่น) ส่วนในระยะสั้น และนำ
ของ PpNPR1 เหมือน (GenBank ID: DQ149935), เช่น PpPR (GenBank ID:
AF362989), PpCHI (GenBank ID: AF206635), PpGNS (GenBank ID:
U49454), PpPAL (GenBank ID: AF206634), PpLOX1 (GenBank ID:
EU883638) และ PpCAT1 (GenBank ID: AJ496418) ได้โคลน โดย degenerate
ไพรเมอร์ ทำ PCR อิสระกับรอบ 25 ใช้
aliquots (1 μL) ตัวอย่างของ cDNA และยีน constitutively แสดง
18S rRNA (GenBank ID: L28749.1) ถูกใช้เป็นตัวควบคุมปริมาณ
ในวิเคราะห์ RT-PCR ลำดับของไพรเมอร์ที่ใช้สำหรับวิเคราะห์ RT-PCR
ได้ต่อไปนี้: PpNPR1-like_forward: 5′ GACCCAAACATGCC
AGCAGTG 3′, PpNPR1-like_Reverse: 5′-ATCCTTCGGCCTTGTCAACCT-3′;
PpPR1-like_forward: 5′-ATCAACTGGGACTTGCGTACT-3′, PpPR1-like_
ย้อน: 5′-TAGTCGCCACAGTCAACAAAG-3′ PpCHI_forward:5′-GT
GGAAAAGCAATAGGGGAG 3′', PpCHI_reverse:5′-TTCCAGCCCTTACCA
CAT-3′ PpGNS_forward:5′-ATTTCTCTTGCTGGTCTTG-3′, PpGNS_
ย้อนกลับ:5′-CTCTGGGGTCTTTCTATTCT-3′ PpPAL_forward: 5′ TTGAC
CGCGAGTACGTTTT-3′ กลับ PpPAL_: 5′ CTGTTTGGGGTTGCTGAT
T-3′ PpLOX1_forward: 5′-GGACGGGACTCAGATTACCA-3′ PpLOX1_
ย้อน: 5′-GTGCCGACTCTTGTGGACTA-3′ PpCAT1_forward: TCAT
GATATTTCTCAGCTTACA-3′ PpCAT1_reverse: 5′ CTCCAACCTTAATA
การแปล กรุณารอสักครู่..