Cryogenically frozen vegetative cel

Cryogenically frozen vegetative cells of Bacillus licheniformis 9945a derived from young mucoid colonies were used to inoculate gamma-poly(glutamate) (gamma-PGA) production media containing L-glutamate, citrate and glycerol as carbon sources. A gel permeation chromatography (GPC) method was developed to determine gamma-PGA volumetric yield and molecular weight directly using culture filtrates. For GPC volumetric yield measurements, a calibration curve was generated using purified gamma-PGA to relate the gamma-PGA GPC peak area and polymer weight. Purified gamma-PGA was characterized by elemental analysis, 1H- and 13C-NMR spectroscopy. Cultures of B. licheniformis using all three carbon sources showed the following characteristics: cell growth mainly during the first 24 h; largest gamma-PGA volumetric productivity (approximately 0.12 gl-1 h-1) between 48 and 96 h; 11 g l-1 gamma-PGA volumetric yield by 96 h; reduction (utilization) of glycerol, glutamate and citrate during a 96 h cultivation time from 80 to 45 g l-1, 18 to 10 g l-1 and 12 to approximately 1 g l-1, respectively; a decrease in pH from 7.4 to approximately 5.5 by 42 h cultivation; acetic acid secretion into the medium at a maximum level of approximately 4.5 g l-1 and detection of the metabolite 2,3-butanediol (as acetoin) as a fermentation by-product at approximately 42 h and through a 96 h cultivation period. The presence of 2,3-butanediol indicated that the level of oxygen in the medium no longer supported a fully aerobic mode of metabolism. When the medium formulation was altered by removal of either citrate, L-glutamate or glycerol in shake flask experiments where pH was not controlled, 2.3, 9.0 and 4.0 g l-1, respectively, of gamma-PGA were formed. Variation of the medium ionic strength by the addition of up to 4% (w/v) NaCl led to the formation of gamma-PGA of relatively higher molecular weight but lower volumetric yield. Studies carried out on 5-day-old B. licheniformis cultures suggested that gamma-PGA depolymerase is intracellularly located or cell-bound. Culture filtrates showed no significant gamma-PGA depolymerase activity.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

Cryogenically แช่แข็งของพืชเซลล์ของบาซิลลัส licheniformis 9945a มาจากหนุ่ม mucoid อาณานิคมใช้ฉีด gamma-poly(glutamate) (แกมมา-PGA) การผลิตสื่อที่ประกอบด้วย L-กลูตาเมต ซิเตรท และกลีเซอรอลเป็นแหล่งคาร์บอน วิธีเจลซึมผ่าน chromatography (GPC) ถูกพัฒนาขึ้นเพื่อตรวจสอบผลผลิตปริมาตรแกมมา PGA และน้ำหนักโมเลกุลโดยตรงโดยใช้วัฒนธรรม filtrates สำหรับการวัดปริมาตรผลผลิต GPC สอบเทียบเส้นโค้งถูกสร้างที่ใช้บริสุทธิ์แกมมา-ตีเกี่ยวข้องแกมมา PGA GPC สูงพื้นที่และโพลิเมอร์น้ำหนัก วิเคราะห์ธาตุ 1 H และ 13C NMR สเปกโทรสโกถูกลักษณะบริสุทธิ์แกมมา-PGA วัฒนธรรมของ B. licheniformis ใช้แหล่งคาร์บอนสามทั้งหมดแสดงให้เห็นว่าลักษณะต่อไปนี้: เซลล์ส่วนใหญ่ในช่วง 24 ชั่วโมงแรก ใหญ่แกมมา PGA ปริมาตรผลผลิต (ประมาณ 0.12 gl 1 h-1) ระหว่าง 48 และ 96 h 11 g ผลตอบแทนปริมาตร l-1 แกมมา-PGA โดย 96 h ลด(การใช้ประโยชน์) ของกลีเซอรอล กลูตาเมต และซิเตรตระหว่างการเพาะปลูก 96 h ครั้งจาก 80 l-1 45 กรัม l-1 18 10 กรัม และ 12 ไปประมาณ 1 g l-1 ตามลำดับ การลดลงของค่า pH จาก 7.4 การประมาณ 5.5 โดย 42 h ปลูก หลั่งกรดอะซิติกเป็นสื่อที่ระดับสูงสุดประมาณ 4.5 กรัม l-1 และตรวจหาของ 2, 3-butanediol metabolite (เป็น acetoin) เป็นผลพลอยได้หมัก ที่ประมาณ 42 ชั่วโมง และ ผ่านช่วงเวลาเพาะปลูก 96 h การปรากฏตัวของ 2, 3-butanediol ระบุว่า ระดับของออกซิเจนในสื่อไม่สนับสนุนโหมดการแอโรบิกอย่างสมบูรณ์ของการเผาผลาญ เมื่อมีการเปลี่ยนแปลงสูตรปานกลาง โดยกำจัดซิเตรต L-กลูตาเมต หรือกลีเซอรอลในเขย่าขวดทดลองที่ค่า pH ไม่มีควบคุม 2.3, 9.0 และ 4.0 l-1 g ตามลำดับ ของ PGA แกมมาเกิด ความผันแปรของความแรงของไอออนกลางด้านนอกของถึง 4% (w/v) NaCl นำไปสู่การก่อตัวของแกมมา-PGA ของน้ำหนักโมเลกุลค่อนข้างสูงแต่ผลตอบแทนปริมาตรต่ำกว่า การศึกษาดำเนินการใน 5 วันเก่า B. licheniformis วัฒนธรรมแนะนำ depolymerase แกมมา-ตีเป็นอยู่ภายในเซลล์ หรือ ขอบเซลล์ วัฒนธรรมแสดงให้เห็นว่าไม่สำคัญแกมมา PGA filtrates depolymerase กิจกรรม

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

เซลล์พืชแช่แข็ง cryogenically เชื้อ Bacillus licheniformis 9945a มาจากอาณานิคม mucoid หนุ่มถูกนำมาใช้ในการฉีดวัคซีนแกมมา-Poly (กลูตาเมต) (แกมมาพีจีเอ) การผลิตสื่อที่มี L-กลูตาเมตซิเตรตและกลีเซอรอลเป็นแหล่งคาร์บอน โคเจลซึมผ่าน (GPC) วิธีการได้รับการพัฒนาในการกำหนดอัตราผลตอบแทนปริมาตรแกมมาพีจีเอและน้ำหนักโมเลกุลโดยตรงโดยใช้กรองวัฒนธรรม สำหรับอัตราผลตอบแทน GPC วัดปริมาตรเส้นโค้งการสอบเทียบที่ถูกสร้างขึ้นโดยใช้บริสุทธิ์แกมมาพีจีเอที่จะเกี่ยวข้องกับพื้นที่สูงสุดแกมมาพีจีเอ GPC และน้ำหนักพอลิเมอ บริสุทธิ์แกมมาพีจีเอก็มีลักษณะการวิเคราะห์ธาตุ 1H- และ 13C-NMR สเปกโทรสโก วัฒนธรรมของ B. licheniformis ใช้ทั้งสามแหล่งคาร์บอนแสดงให้เห็นลักษณะดังต่อไปเจริญเติบโตของเซลล์ส่วนใหญ่ในช่วง 24 ชั่วโมงแรก แกมมาพีจีเอการผลิตที่ใหญ่ที่สุดปริมาตร (ประมาณ 0.12 GL-1 H-1) ระหว่าง 48 และ 96 เอช; 11 กรัมผลผลิต L-1 แกมมาพีจีเอโดยปริมาตร 96 ชั่วโมง; ลดลง (การใช้) กลีเซอรอล, กลูตาเมตและซิเตรตในช่วงเวลาการเพาะปลูก 96 ชั่วโมง 80-45 กรัม L-1, 18-10 กรัม L-1 และ 12 L-1 ตามลำดับประมาณ 1 กรัม; การลดลงของค่า pH 7.4 จากประมาณ 5.5 42 การเพาะปลูกเอช; การหลั่งกรดอะซิติกเข้ากลางในระดับสูงสุดของ L-1 และการตรวจสอบของสาร 2,3 บิวเทน (ตาม acetoin) ประมาณ 4.5 กรัมเป็นการหมักโดยผลิตภัณฑ์ที่ประมาณ 42 ชั่วโมงและผ่านช่วงเวลาการเพาะปลูก 96 ชั่วโมง การปรากฏตัวของ 2,3 บิวเทนชี้ให้เห็นว่าระดับของออกซิเจนในสื่อที่ได้รับการสนับสนุนโหมดแอโรบิกอย่างเต็มที่ของการเผาผลาญไม่ เมื่อการกำหนดขนาดกลางมีการเปลี่ยนแปลงโดยการกำจัดของทั้งซิเตรต, L-กลูตาเมตหรือกลีเซอรอลในการทดลองขวดสั่นที่พีเอชไม่ได้ถูกควบคุม 2.3, 9.0 และ 4.0 กรัม L-1 ตามลำดับของแกมมาพีจีเอกำลังก่อตัวขึ้น รูปแบบของความแข็งแรงของอิออนกลางโดยการเพิ่มขึ้นถึง 4% (ที่ w / v) โซเดียมคลอไรด์ที่นำไปสู่การก่อตัวของแกมมาพีจีเอของน้ำหนักโมเลกุลค่อนข้างสูง แต่อัตราผลตอบแทนที่ต่ำกว่าปริมาตร การศึกษาดำเนินการในวันที่ 5 เก่า B. licheniformis วัฒนธรรมบอกว่าแกมม่าพีจีเอ depolymerase จะอยู่ภายในเซลล์หรือเซลล์ที่ถูกผูกไว้ วัฒนธรรม filtrates พบว่าไม่มีกิจกรรม depolymerase แกมมาพีจีเออย่างมีนัยสำคัญ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

cryogenically Bacillus licheniformis 9945a แช่แข็งเซลล์พืชที่ได้มาจากนิติน้ำลายเคยฉีดวัคซีนโพลีแกมมา ( ผงชูรส ) ( แกมม่า พีจีเอ ) การผลิตสื่อที่มีของ citrate และกลีเซอรอล เป็นแหล่งคาร์บอน เจลผ่านโครมาโตกราฟี ( GPC ) ถูกพัฒนาขึ้นเพื่อตรวจสอบแกมม่า พีจีเอโวผลผลิตและโมเลกุลโดยตรงโดยใช้สารละลายวัฒนธรรม สำหรับการวัด GPC ผลผลิตเชิงปริมาตร , รูปโค้งถูกสร้างขึ้นโดยใช้บริสุทธิ์ แกมม่า พีจีเอเกี่ยวข้องกับแกมม่า พีจีเอ GPC ยอดพื้นที่และน้ำหนักของพอลิเมอร์ บริสุทธิ์ แกมม่า พีจีเอถูก characterized โดยการวิเคราะห์ธาตุ 1 - 13c-nmr สเปกโทรสโกปี วัฒนธรรมของ B . licheniformis ใช้คาร์บอนทั้ง 3 แหล่งมีคุณลักษณะต่อไปนี้ : เติบโตเซลล์ส่วนใหญ่ในช่วงแรก 24 h ; ที่ใหญ่ที่สุด โดยประสิทธิภาพ แกมม่า พีจีเอ ( ประมาณ 0.12 gl-1 ส่วน ) ระหว่าง 48 และ 96 H ; 11 g L-1 แกมม่า พีจีเอโวผลผลิตโดย 96 H ; ลด ( การใช้ ) ของกลีเซอรอล ผงชูรสและซิเตรทใน 96 H ระยะเวลาการเพาะปลูกจาก 80 L-1 18 45 กรัม , 10 กรัม L-1 และ 12 ประมาณ 1 กรัม L-1 ตามลำดับ ; การลดลงของ pH จาก 7.4 ประมาณ 5.5 42 H การเพาะปลูก ; กรดหลั่งลงในสื่อในระดับมากประมาณ 4.5 กรัม L-1 และตรวจจับเพียง 2,3-butanediol ( อะซิโตอิน ) เป็นผลพลอยได้จากการหมักประมาณ 42 ชั่วโมงและผ่าน 96 H การเพาะปลูกเพริ ใช้เกินขนาด การปรากฏตัวของ 2,3-butanediol พบว่าระดับของออกซิเจนในกลางไม่สนับสนุนโหมดเต็มแอโรบิคของการเผาผลาญ เมื่อสื่อถูกเปลี่ยนแปลงโดยการใช้อย่างใดอย่างหนึ่งของซิเทรต หรือกลีเซอรอลในขวดเขย่า การทดลองที่ไม่ควบคุม pH , 2.3 , 9.0 และ 4.0 กรัม L-1 ตามลำดับของแกมม่า พีจีเอถูกสร้างขึ้น การเปลี่ยนแปลงของระดับความแรงของไอออน โดยเพิ่มขึ้น 4% ( w / v ) โซเดียมคลอไรด์ นำไปสู่การก่อตัวของแกมม่า พีจีเอของน้ำหนัก โมเลกุลปริมาตรค่อนข้างสูง แต่ราคาผลผลิต การศึกษาดำเนินการในวัฒนธรรม 5-day-old B . licheniformis ชี้ให้เห็นว่าแกมม่า พีจีเอ depolymerase เป็น intracellularly ตั้งอยู่หรือเซลล์ที่ถูกผูกไว้ สารละลายวัฒนธรรมอย่างไม่มีนัยสำคัญทางสถิติแกมม่า พีจีเอ depolymerase กิจกรรม