2.6. Flow cytometry analysisSamples

2.6. Flow cytometry analysis
Samples were collected from original accessions or cultivars and
F1 hybrids generated by cross combinations. Representative individuals
were selected by flow cytometry based on the similarities of
the phenotypes. In particular, extraordinary one individuals were
investigated to select based on phenotype among progenies of the
‘Hawaii-30’ and ‘UC-01’ combination. Furthermore, investigation
was performed to select three individuals out of the 12 survival
individuals from the ‘Hawaii-30’ and ‘Akihime’ combination.
For flow cytometry analysis, young leaves were cut to a size
of 1 cm2, mixed with 0.2 mL of nuclear extraction buffer solution
(solution A of the plant high-resolution DNA kit; Partec GmbH,
Munster, Germany), and chopped 30 times using razor blades.
Nuclear extraction was performed for 15 min at room temperature
before filtering the lysate through a 20-m nylon mesh and
adding 1 mL of staining solution(10 mMTris, 50 mMsodiumcitrate,
2 mM MgCl2, 1% (w/v) PVP K-30, 0.1% (v/v) Triton X-100, 2 mg L−1
4
,6-diamidino-2-phenylindole (DAPI)). After 2 min of incubation
at room temperature, samples were analyzed using flow cytometry
(Partec CA-II, Munster, Germany). Relative DNA content was
calculated by comparing the 4C peaks in the flow karyogram with
those ofthe Allium cepa nuclei, which were added as an internal reference
(DNA content = 67.0 pg/4C). All these analyses were carried
out at Iribov breeding support laboratory in the Netherlands.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.6 การไหลการวิเคราะห์เซลล์ตัวอย่างถูกเก็บรวบรวมจากเดิม accessions หรือพันธุ์ และลูกผสม F1 ที่สร้างขึ้นโดยข้ามชุด พนักงานบุคคลเลือกตามกระแสเซลล์ตามความคล้ายคลึงของฟี โดยเฉพาะ พิเศษบุคคลหนึ่งได้สอบสวนต้องตาม phenotype ระหว่าง progenies ของการชุด 'ฮาวาย-30' และ 'UC-01' นอกจากนี้ การตรวจสอบทำการเลือกบุคคลที่สามไม่รอด 12บุคคลจากชุด 'ฮาวาย-30' และ 'Akihime'สำหรับขั้นตอนการวิเคราะห์เซลล์ หนุ่มใบถูกตัดให้มีขนาดของ 1 cm2 ผสมกับ 0.2 mL ของบัฟเฟอร์แยกนิวเคลียร์(โซลูชัน A ของโรงงานมีความละเอียดสูงดีเอ็นเอชุด Partec GmbHเสาะ เยอรมัน), และสับ 30 ครั้งโดยใช้ใบมีดโกนทำการแยกนิวเคลียร์ใน 15 นาทีที่อุณหภูมิห้องก่อนที่จะกรองผ่านไนลอน 20 m lysate ตาข่าย และเพิ่ม 1 mL ของโซลูชั่น (10 mMTris, 50 mMsodiumcitrate ย้อมสี2 มม. MgCl2, 1% (w/v) 30 PVP K, 0.1% (v/v) ไตรตั้น X-100, 2 mg L−14, 6-diamidino-2-phenylindole (DAPI)) หลังจากนาทีที่ 2 ของคณะทันตแพทยศาสตร์อุณหภูมิ ห้องตัวอย่างได้วิเคราะห์โดยใช้เซลล์กระแส(Partec CA II เสาะ เยอรมนี) เนื้อหาดีเอ็นเอแบบสัมพัทธ์คำนวณ โดยการเปรียบเทียบยอด 4C ใน karyogram กระแสด้วยผู้ต้น cepa แอลฟา ซึ่งเพิ่มเป็นการอ้างอิงภายใน(เนื้อหาดีเอ็นเอ = 67.0 pg / 4C) ได้ดำเนินการวิเคราะห์เหล่านี้ทั้งหมดออกที่ Iribov ห้องปฏิบัติการสนับสนุนการเพาะพันธุ์ในประเทศเนเธอร์แลนด์

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.6 โฟวิเคราะห์
เก็บตัวอย่างจากสายเดิมหรือสายพันธุ์และ
ลูกผสม F1 ที่เกิดจากการผสมข้าม บุคคลที่เป็นตัวแทน
ที่ถูกเลือกโดย cytometry ไหลอยู่บนพื้นฐานของความคล้ายคลึงกันของ
phenotypes โดยเฉพาะอย่างยิ่งไม่ธรรมดาหนึ่งบุคคลที่ได้รับการ
ตรวจสอบเพื่อเลือกขึ้นอยู่กับฟีโนไทป์ในหมู่ลูกของ
'ฮาวาย-30' และ 'UC-01' รวมกัน นอกจากนี้การสืบสวน
กำลังดำเนินการเพื่อเลือกบุคคลที่สามจาก 12 ความอยู่รอดของ
ประชาชนจาก 'ฮาวาย-30' และการรวมกัน 'Akihime'.
สำหรับโฟวิเคราะห์ใบอ่อนที่ถูกตัดให้ได้ขนาด
1 cm2 ผสมกับ 0.2 มิลลิลิตรนิวเคลียร์ สารละลายบัฟเฟอร์สกัด
(สารละลายของโรงงานมีความละเอียดสูงชุดดีเอ็นเอ Partec GmbH,
มอนสเตอร์, เยอรมนี). และสับ 30 ครั้งโดยใช้ใบมีดโกน
สกัดนิวเคลียร์ได้ดำเนินการเป็นเวลา 15 นาทีที่อุณหภูมิห้อง
ก่อนที่จะกรอง lysate ผ่าน 20 เมตร ตาข่ายไนลอนและ
เพิ่ม 1 มิลลิลิตรของการแก้ปัญหาการย้อมสี (10 mMTris 50 mMsodiumcitrate,
2 มิลลิ MgCl2, 1% (w / v) PVP K-30, 0.1% (v / v) Triton X-100, 2 มก. L-1
4 ?
6 diamidino-2-phenylindole (DAPI)) หลังจากนั้น 2 นาทีของการบ่ม
ที่อุณหภูมิห้องตัวอย่างที่ได้มาวิเคราะห์โดยใช้ cytometry ไหล
(Partec CA-II, มอนสเตอร์, เยอรมนี) เนื้อหาดีเอ็นเอญาติได้รับการ
คำนวณโดยการเปรียบเทียบยอด 4C ใน karyogram ไหลกับ
ผู้ ofthe นิวเคลียส Allium cepa ซึ่งถูกเพิ่มเป็นอ้างอิงภายใน
(ปริมาณดีเอ็นเอ = 67.0 PG / 4C) การวิเคราะห์ทั้งหมดเหล่านี้ได้รับการดำเนิน
การที่ห้องปฏิบัติการสนับสนุนการปรับปรุงพันธุ์ Iribov ในเนเธอร์แลนด์

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.6 ตัวอย่างการวิเคราะห์
( ไหลจากการเก็บตัวอย่างต้นฉบับหรือพันธุ์ลูกผสมและ
สร้างโดยข้ามชุด ตัวแทนบุคคล
จำนวนเซลล์การไหลตามความคล้ายคลึงกันของ
เกิด . โดยเฉพาะอย่างยิ่ง พิเศษหนึ่งบุคคลที่ถูกเลือกบนพื้นฐานของการตรวจสอบ

'hawaii-30 ระหว่างลูกของ ' ' และ ' uc-01 รวมกันนอกจากนี้ การสอบสวน
ได้เลือกสามบุคคลออกจาก 12 รอด
บุคคลจากการ hawaii-30 akihime ' ' และ ' ' .
สำหรับการวิเคราะห์การไหลของเซลล์ ใบอ่อนที่ถูกตัดให้มีขนาดที่
1 ตร. ซม. ผสม 0.2 มล. นิวเคลียร์การสกัดสารละลายบัฟเฟอร์
( โซลูชันของพืชสูง ดีเอ็นเอ ชุด ; พาร์เท็ค GmbH ,
Munster เยอรมนี )และ 30 ครั้งใช้มีดโกนใบมีดสับ
การสกัดนิวเคลียร์แบ่งเป็น 15 นาทีที่อุณหภูมิห้องก่อน
lysate การกรองผ่านตาข่ายไนล่อนและ 20-m
เพิ่ม 1 มิลลิลิตร สารละลายย้อมสี ( 10 mmtris 50 mmsodiumcitrate
2 มม. , ชุด , 1% ( w / v ) PVP k-30 0.1 เปอร์เซ็นต์ ( ปริมาตร / 5 ) Triton X-100 , 2 mg L − 1
4 
, 6-diamidino-2-phenylindole ( dapi ) หลังจาก 2 นาที
บ่มที่อุณหภูมิห้องวิเคราะห์การไหล (
( พาร์เท็ค ca-ii Munster , เยอรมนี ) ปริมาณดีเอ็นเอญาติคือ
คำนวณโดยเปรียบเทียบ 4C ยอดในการไหล karyogram กับ
เหล่านั้นของหอมหัวใหญ่นิวเคลียส ซึ่งเพิ่มเป็นอ้างอิง
ภายใน ( DNA เนื้อหา = 67.0 PG / 4C ) การวิเคราะห์ทั้งหมดนี้ถูกหามออกปฏิบัติการผสมพันธุ์ iribov

สนับสนุนในเนเธอร์แลนด์