With the ultrafiltration processes

With the ultrafiltration processes applied to the cell-free culture medium, 90 mL of invertase concentrate (198 U/L) was obtained tocarry out the biochemical characterization.SDS-polyacrylamide gel electrophoresis analysis for the recombinant
invertase preparation showed three bands with apparent molecular sizes of 54–47, 39, and 12 kDa (Fig. 1B, lane 4) that were not N-deglycosylated by PNGase F (Fig. 1B, lane 5), since no size differences were seen between PNGase F-treated and untreated invertase. A sample of a recombinant -propeller phytase, calledFTEII [41], was used as a positive control for the assay (Fig. 1B, lanes2 and 3).The recombinant invertase had its optimum activity at pH 5.0(Fig. 2A) and showed more than 60% of its maximum activity in the range between pH 4.0 and 6.0. The analysis of the effect of temperature
on the invertase activity showed a temperature profile witha broad temperature range (40–80 ◦C) with more than 60% of its maximum activity, and an optimum temperature at 60 ◦C (Fig. 2B).Residual activity in the stability assays followed zero-order kinetics with a reaction rate of 0.07 and 0.30%/h, decreasing to 93.7and 72.2% after 96 h at 4 and 30 ◦C, respectively (Fig. 2C). Residual activity of 100% was observed after almost two months at −20 ◦C.The anion-exchange chromatogram for the invertase preparation showed a predominant peak by UV detection at 280 nm;however, two peaks that eluted at 0.35 and 1.00 M NaCl, respectively,showed invertase activity. The specific activities of these
peaks were 6 and 3389 U/mg protein.The recombinant invertase follows a typical Michaelis–Menten kinetics (R2 = 0.993). The Michaelis constant (Km) and the maximumrate of reaction(Vmax) were estimatedto be 79.88 ± 23.56 mM and 0.05 ± 0.01 mol/min, respectively, while the maximum number of sucrose molecules that a molecule of the recombinant
invertase can hydrolyze (kcat) was 3566 s−1.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

กับกระบวน ultrafiltration กับสื่อวัฒนธรรมฟรีเซลล์ 90 mL ของ invertase ข้น (198 U/L) ถูกรับ tocarry ออกจำแนกชีวเคมีวิเคราะห์ electrophoresis เจ SDS polyacrylamide วททชinvertase เตรียมพบสามวง มีขนาดโมเลกุลชัดเจนของ 54 – 47, 39 และ 12 kDa (Fig. 1B เลน 4) ได้ N-deglycosylated โดย PNGase F (Fig. 1B เลน 5), เนื่องจากไม่มีความแตกต่างขนาด ได้เห็นระหว่าง invertase ถือว่า PNGase F และไม่ถูกรักษา ตัวอย่างของการวททช-คุณสมบัติใบพัด calledFTEII [41], ใช้เป็นตัวควบคุมค่าบวกสำหรับการทดสอบ (Fig. 1B, lanes2 และ 3)Recombinant invertase มีกิจกรรมที่เหมาะสมที่ 5.0(Fig. 2A) ค่า pH และพบว่ากว่า 60% ของของกิจกรรมสูงสุดในช่วงระหว่าง pH 4.0 และ 6.0 การวิเคราะห์ผลของอุณหภูมิบน invertase จะ กิจกรรมพบว่าค่าอุณหภูมิช่วงอุณหภูมิที่กว้าง (40 – 80 ◦C) มากกว่า 60% ของของกิจกรรมสูงสุด และอุณหภูมิเหมาะสมที่ 60 ◦C (Fig. 2B)กิจกรรมส่วนที่เหลือในเสถียรภาพ assays จลนพลศาสตร์ศูนย์สั่งไปมาแล้วกับอัตราปฏิกิริยา 0.07 และ 0.30%/h ลดการ 93.7and 72.2% หลัง h 96 ที่ 4 และ 30 ◦C ตามลำดับ (Fig. 2C) กิจกรรม 100% ส่วนที่เหลือถูกตรวจสอบหลังจากเกือบสองเดือนที่ −20 ◦C.The แลกเปลี่ยน anion chromatogram invertase จะเตรียมแสดงราคาสูงสุดกัน โดยตรวจจับ UV ที่ 280 nm อย่างไรก็ตาม ยอดสองที่ eluted ที่ NaCl M 0.35 และ 1.00 ตามลำดับ พบ invertase กิจกรรม กิจกรรมเฉพาะเหล่านี้ยอด 6 และ 3389 U/มิลลิกรัม โปรตีนจลนพลศาสตร์การขั้น – Menten ทั่วไปดังต่อไปนี้ recombinant invertase (R2 = 0.993) ค่าคงขั้น (Km) และ maximumrate ของ reaction(Vmax) estimatedto ได้ 79.88 ± 23.56 มม.และ 0.05 ± 0.01 โมล/นาที ตามลำดับ ในขณะที่จำนวนโมเลกุลของซูโครสที่โมเลกุลของวททชสามารถ hydrolyze invertase (kcat) ถูก 3566 s−1

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

กับกระบวนการการสังเคราะห์กระบวนการใช้สื่อวัฒนธรรม , 90 มล. เย็นเข้มข้น ( 198 U / L ) ได้ tocarry ออกทางชีวเคมี characterization.sds-polyacrylamide gel electrophoresis การวิเคราะห์สำหรับการเปรียบเทียบพบว่า recombinant
3 วง กับ ปรากฏ โมเลกุลขนาด 54 – 47 , 39 และ 12 กิโลดาลตัน ( รูป 1B ,ช่องทางที่ 4 ) ที่ไม่ได้ n-deglycosylated โดย pngase F ( รูปที่ 1A ซอย 5 ) เนื่องจากไม่มีความแตกต่างระหว่างขนาดเคยเห็น f-treated pngase ดิบและเย็น . ตัวอย่างของเอนไซม์ไฟเตสใบพัดแนนท์ - , calledfteii [ 41 ] ถูกใช้เป็นตัวควบคุมบวกสำหรับการทดสอบ ( รูป 1B , lanes2 และ 3 ) การเปรียบเทียบสามารถมีกิจกรรมที่เหมาะสมของมันที่พีเอช 5.0 ( ฟิค2A ) และพบว่ามากกว่า 60% ของกิจกรรมสูงสุดในช่วง pH 4.0 และ 6.0 . การวิเคราะห์ผลของอุณหภูมิต่อกิจกรรมที่แสดง
เปรียบเทียบกับอุณหภูมิในช่วงอุณหภูมิกว้าง ( 40 – 80 ◦ C ) ที่มีมากกว่า 60% ของกิจกรรมสูงสุด และอุณหภูมิที่เหมาะสมที่ 60 ◦ C ( รูปที่ 2B )กิจกรรมที่เหลือในเสถียรภาพหรือตามศูนย์เพื่อจลนศาสตร์กับปฏิกิริยาอัตรา 0.07 และ 0.30 % / H , ลดลง 93.7and 72.2 % หลัง 96 H ที่ 4 และ 30 ◦ C ตามลำดับ ( ภาพที่ 2 ) กิจกรรมที่เหลือ 100 % พบว่า หลังจากเกือบสองเดือนที่◦− 20 c . สำหรับการแลกเปลี่ยนไอออนโครมาเปรียบเทียบ พบสูงสุดที่เด่นโดยตรวจจับยูวีที่ 280 nm ; อย่างไรก็ตามสองยอดที่ตัวอย่างที่ 0.35 และ 1.00 โมลาร์ ตามลำดับ พบกิจกรรมเย็น . กิจกรรมที่เฉพาะเจาะจงของยอดเขาเหล่านี้
เป็น 6 และ 3389 โปรตีน U / mg . เปรียบเทียบแบบตามทั่วไปมากและ menten จลนศาสตร์ ( R2 = 0.993 ) มากคง ( km ) และ maximumrate ของปฏิกิริยา ( Vmax ) estimatedto ได้ 79.88 ± 23.56 มิลลิเมตร และ± 0.01 0.05 mol / min ตามลำดับในขณะที่จำนวนสูงสุดของน้ำตาลซูโครส โมเลกุลที่โมเลกุลของโปรตีนที่สามารถย่อย ( เย็น
kcat ) คือ 2376 s − 1 .