Rapid Detection of Escherichia coli

Rapid Detection of Escherichia coli by Real-Time PCR in Pharmaceutical Products Contaminated by Low Levels of Bacillus megaterium, Burkholderia cepacia, Escherichia coli, and Staphylococcus aureusEscherichia coli is one of the specific bacterial indicators required by the United States Pharmacopeia which can be considered hazardous to consumers if found in non-sterile pharmaceutical products. Standard microbiological testing requires four to five days to be completed to show the absence of E. coli from raw materials and finished products. A Real-Time (RT) PCR assay was developed to detect E. coli in pharmaceutical products contaminated with low levels of bacterial contamination. Different pharmaceutical suspensions were artificially contaminated with Burkholderia cepacia, Escherichia coli, Staphylococcus aureus, and Bacillus megaterium. After a 24-hour incubation in TSB with Tween 20, bacterial DNA was extracted from each sample by using a Tris-EDTA, proteinase K, Tween 20 buffer. Regular PCR targeting the 1.5 kilobases 16S rRNA eubacterial gene and cloning showed the predominant DNA in the extracted mix belonged to E. coli. Selective media isolation of bacterial contamination showed E. coli detected on MacConkey or eosine methylene blue agar. RT-PCR using primers UAL754 and UAR900 amplified a 147base pair betaglucuronidase DNA fragment using a LightCycler system with SYBR green I, a common double-stranded binding dye. The cycle at which fluorescence from amplification exceeds the background fluorescence was referred as quantification cycle (Cq). All samples were found to be positive by standard microbiological testing and RT-PCR. E. coli was detected within 30 hours in all contaminated samples using RTPCR. Based upon standard curve analysis of E. coli DNA, the minimum DNA concentration that could be detected was 0.00109 ng/μl with a correlation value of 0.96.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ตรวจสอบอย่างรวดเร็วของเชื้อ Escherichia coli โดย Real-time PCR ในผลิตภัณฑ์ยาปนเปื้อนจากระดับต่ำของ megaterium Bacillus, Burkholderia cepacia, Escherichia coli, Staphylococcus aureus และ
Escherichia coli เป็นหนึ่งในตัวชี้วัดเฉพาะแบคทีเรียที่จำเป็นโดย United States Pharmacopeia ซึ่งสามารถได้รับการพิจารณาเป็นอันตรายต่อผู้บริโภคหากพบว่าผลิตภัณฑ์ยาที่ไม่ผ่านการฆ่าเชื้อ การทดสอบทางจุลชีววิทยามาตรฐานต้องใช้ 4-5 วันจะแล้วเสร็จเพื่อแสดงตัวตนของเชื้อ E. coli จากวัตถุดิบและสินค้าสำเร็จรูป เวลาจริง (RT) PCR การทดสอบได้รับการพัฒนาเพื่อตรวจหาเชื้ออีโคไลในผลิตภัณฑ์ยาปนเปื้อนที่มีระดับต่ำของการปนเปื้อนของเชื้อแบคทีเรีย แขวนลอยยาที่แตกต่างกันถูกปนเปื้อนด้วย Burkholderia cepacia, Escherichia coli, Staphylococcus aureus และ Bacillus megaterium หลังจากบ่ม 24 ชั่วโมงใน TSB กับ Tween 20 ดีเอ็นเอของแบคทีเรียถูกสกัดจากแต่ละตัวอย่างโดยใช้ Tris-EDTA, Proteinase K, Tween 20 บัฟเฟอร์ ปกติ PCR กำหนดเป้าหมาย 1 5 kilobases 16S rRNA ยีน eubacterial และการโคลนพบว่าดีเอ็นเอที่โดดเด่นในการผสมที่แยกเป็นเชื้อ E. coli แยกสื่อเลือกของการปนเปื้อนของเชื้อแบคทีเรียแสดงให้เห็นว่าเชื้อ E. coli ที่ตรวจพบใน MacConkey หรือ eosine เมทิลีนวุ้นสีฟ้า RT-PCR โดยใช้ไพรเมอร์ UAL754 และ UAR900 ขยายคู่ 147base betaglucuronidase ชิ้นดีเอ็นเอที่ใช้ระบบ LightCycler กับ SYBR ผมสีเขียวร่วมกันเกลียวคู่สีย้อมที่มีผลผูกพัน วงจรที่เรืองแสงจากการขยายเกินเรืองแสงพื้นหลังที่ถูกเรียกว่าเป็นวงจรปริมาณ (Cq) ตัวอย่างทั้งหมดถูกพบว่าเป็นบวกโดยการทดสอบทางจุลชีววิทยามาตรฐานและ RT-PCR อีโคไลที่ตรวจพบภายใน 30 ชั่วโมงในตัวอย่างที่ปนเปื้อนทั้งหมดที่ใช้ RTPCR ขึ้นอยู่กับการวิเคราะห์โค้งมาตรฐานของอีโคไลดีเอ็นเอความเข้มข้นของดีเอ็นเอขั้นต่ำที่สามารถตรวจพบเป็น 0

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การตรวจสอบอย่างรวดเร็วของ escherichia ในเวลาจริง PCR ในผลิตภัณฑ์ยาที่ปนเปื้อนโดยระดับต่ำของบาซิลลัส megaterium, Burkholderia cepacia, escherichia coli, และ Staphylococcus วรสาร
เป็นหนึ่งในตัวชี้วัดแบคทีเรียเฉพาะที่กำหนดโดยสหรัฐอเมริกาของเภสัชตำรับซึ่งถือได้ว่าเป็นอันตรายต่อผู้บริโภคหากพบในผลิตภัณฑ์ยาที่ไม่มีการฆ่าเชื้อ. การทดสอบทางจุลชีววิทยามาตรฐานต้องใช้เวลาสี่ถึงห้าวันที่จะเสร็จสมบูรณ์เพื่อแสดงกรณีที่ไม่มี. coli จากวัตถุดิบและผลิตภัณฑ์สำเร็จรูป การทดสอบ PCR แบบเรียลไทม์ (RT) ได้รับการพัฒนาขึ้นเพื่อตรวจหา. coli ในผลิตภัณฑ์ยาที่ปนเปื้อนด้วยการปนเปื้อนของแบคทีเรียในระดับต่ำ สารแขวนลอยยาที่แตกต่างกันถูกปนเปื้อนด้วย Burkholderia cepacia, Escherichia coli, Staphylococcus aureus, และบาซิลลัส megaterium. หลังจากการบ่ม24ชั่วโมงใน TSB กับ Tween 20, ดีเอ็นเอแบคทีเรียถูกสกัดจากแต่ละตัวอย่างโดยใช้ Tris-EDTA, proteinase K, Tween 20 บัฟเฟอร์. การกำหนดเป้าหมาย PCR ปกติ๑.๕ kilobases 16S rRNA และยีน eubacterial และโคลนแสดงให้เห็นถึงดีเอ็นเอในการผสมที่สกัดเป็นของ. coli. การแยกสื่อคัดเลือกของการปนเปื้อนแบคทีเรียแสดงให้เห็น. coli ตรวจพบบน MacConkey หรือ eosine เมทิลีสีฟ้า. RT-PCR โดยใช้ไพรเมอร์ UAL754 และ UAR900 ขยายเป็นชิ้นส่วนดีเอ็นเอของคู่ที่มีความสามารถในการใช้ระบบ lightไซโคลน er ที่มีสีเขียว sybr I, ที่พบบ่อยคู่สีย้อมผูก วงจรที่เรืองแสงจากการขยายตัวเกินเรืองแสงพื้นหลังถูกเรียกว่ารอบการวัดปริมาณ (Cq) ตัวอย่างทั้งหมดพบได้เป็นบวกจากการทดสอบทางจุลชีววิทยามาตรฐานและ RT-PCR . coli ถูกตรวจพบภายใน30ชั่วโมงในตัวอย่างที่ปนเปื้อนทั้งหมดโดยใช้ RTPCR. ขึ้นอยู่กับการวิเคราะห์โค้งมาตรฐานของ. coli DNA, ความเข้มข้นของดีเอ็นเอขั้นต่ำที่สามารถตรวจพบได้คือ๐.๐๐๑๐๙ ng/μ l กับค่าความสัมพันธ์ของ๐.๙๖.

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การตรวจหาเชื้อแบคทีเรีย Escherichia coli ในยาที่ปนเปื้อนด้วยเชื้อ Bacillus subtilis Berkshire หัวหอม Escherichia coli และ Staphylococcus aureus โดยวิธี PCR แบบเรียลไทม์
โคลิฟอร์มแบคทีเรีย Escherichia coli เป็นดัชนีพิเศษของแบคทีเรียที่ระบุไว้ในเภสัชตำรับอเมริกันซึ่งอาจจะถือว่าเป็นอันตรายต่อผู้บริโภคถ้าพบในผลิตภัณฑ์ การทดสอบจุลินทรีย์มาตรฐานต้องใช้ 4-5 วันเพื่อแสดงให้เห็นว่าไม่มี E.coli ในวัตถุดิบและผลิตภัณฑ์ เป็นวิธีที่พัฒนาขึ้นเพื่อตรวจหาเชื้อ Escherichia coli ในความเข้มข้นต่ำของแบคทีเรียที่ปนเปื้อนยา ระงับยาเสพติดที่แตกต่างกันถูกปนเปื้อนด้วยเชื้อแบคทีเรีย Escherichia coli เชื้อ Staphylococcus aureus และ Bacillus ยักษ์ ดีเอ็นเอของแบคทีเรียที่สกัดได้จากแต่ละตัวอย่างโดยใช้ tris-EDTA และโปรตีนเค tween20 บัฟเฟอร์หลังจากการเพาะเลี้ยงใน TSB เป็นเวลาสี่ชั่วโมง ดีเอ็นเอที่สกัดจากเชื้อ Escherichia coli เป็นหลักโดยวิธี PCR ปกติและการโคลนยีนเป้าหมาย การแยกแบคทีเรียที่ปนเปื้อนในอาหารที่เลือกพบว่าเชื้อ Escherichia coli ถูกตรวจพบใน MacConkey หรือวุ้นสีฟ้า ส่วนดีเอ็นเอของเอนไซม์กลูโคไซด์จาก 147 เบสคู่เพิ่มขึ้นโดยการใช้ไพรเมอร์ ul754 UAR900 RT-PCR และระบบไลท์ไซเลอร์ร่วมกับสีย้อม sysbr-green-i วงจรของการเรืองแสงที่ขยายเกินพื้นหลังเรียกว่าวงจรเชิงปริมาณ ตัวอย่างทั้งหมดได้รับการทดสอบในเชิงบวกโดยจุลินทรีย์มาตรฐานและ RT-PCR เชื้อ Escherichia coli ในตัวอย่างที่ปนเปื้อนทั้งหมดถูกตรวจพบโดย rtpcr ใน 30 ชั่วโมง ตามการวิเคราะห์เส้นโค้งมาตรฐานของดีเอ็นเอของ Escherichia coli ความเข้มข้นต่ำสุดคือ 0.00109g μและค่าสัมประสิทธิ์สหสัมพันธ์คือ 0.96