2.2. ABCB10 promoter activity in se

2.2. ABCB10 promoter activity in selected cell lines
Previous studies have shown that ABCB10 is broadly expressed in
many tissues, with the highest expression being observed in the liver,
kidney, muscles and haematopoietic cells [6,3]. This is why we decided
to verify the actual promoter function of the 5′-flanking ABCB10 gene
segment identified as potential core regulatory segment in a reporter
gene assay, using a series of 5′-deletion reporter constructs in K562,
HepG2 and HEK293 cell lines representing cells of different tissue origin
(haematopoietic, liver and kidney, respectively). All cloned fragments
showed significantly higher promoter activity than the promoterless
pGL3-basic vector, confirming their identity as the ABCB10 promoter
(Fig. 2).Moreover, the patterns of relative activity of constructs of varying
length differed for the cell lines we tested. In HEK293 cells, all deletion
fragments demonstrated a similar, rather lowactivity. In contrast to HEK293 cells, the pattern of ABCB10 promoter activity was different in
the other two cell lines. In K562 and HepG2 cell lines, the shortest
phABCB10(−242/+133)Luc vector had relatively low transcriptional
activity (2 and 3 fold higher than control pGL3-basic vector), but longer
vectors (representing sequences−449/+133 bp and−642/+133 bp)
were increasingly more active, suggesting the presence between nucleotides
−642 and −242 of positive regulatory elements active in these
cell lines, dependent on the cellular environment. The longest fragment
of the ABCB10 promoter region (representing sequence −979/
+133 bp) demonstrated a similar or slightly lower activity to that observed
for the−642/+133 bp construct in all cell lines tested, pointing
to the lack of relevant regulatory element in the sequence stretch between
nucleotides −979 and −642 (Fig. 2).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.2. ABCB10 โปรโมเตอร์กิจกรรมในเซลล์ที่เลือกรายการการศึกษาก่อนหน้านี้แสดงให้เห็นว่า ABCB10 ทั่วไปแสดงในในเนื้อเยื่อ มีนิพจน์สูงสุดที่พบในตับไต กล้ามเนื้อ และ haematopoietic เซลล์ [6,3] นี่คือเหตุผลที่เราตัดสินใจการตรวจสอบการทำงานจริงโปรโมเตอร์ของยีน ABCB10 5′ flankingส่วนที่ระบุเป็นหลักกำกับดูแลเซ็กเมนต์ในผู้สื่อข่าวการวิเคราะห์ยีน ใช้ชุดของโครงสร้างโปรแกรมรายงานการลบ 5′ K562เซลล์ HepG2 และ HEK293 บรรทัดแทนเซลล์ต้นกำเนิดเนื้อเยื่อต่าง ๆ(haematopoietic ตับและไต ตามลำดับ) การกระจายตัวโคลนทั้งหมดพบกิจกรรมโปรโมเตอร์อย่างมีนัยสำคัญสูงกว่าที่ promoterlesspGL3 พื้นฐานเวกเตอร์ ยืนยันตัวเป็นโปรโมเตอร์ ABCB10(Fig. 2)นอกจากนี้ รูปแบบของกิจกรรมสัมพันธ์ของโครงสร้างของแตกต่างกันความยาวที่แตกต่างสำหรับบรรทัดเซลล์ที่เราทดสอบ ในเซลล์ HEK293 ลบทั้งหมดชิ้นส่วนที่แสดงให้เห็นว่าคล้าย lowactivity แทน ตรงข้ามเซลล์ HEK293 รูปแบบของกิจกรรม ABCB10 โปรโมเตอร์แตกต่างกันเซลล์สองบรรทัดอื่น ใน K562 และ HepG2 ของเซลล์ บรรทัดสั้นที่สุดphABCB10 (−242/+133) เวกเตอร์ลุคมีค่อนข้างต่ำ transcriptionalกิจกรรม (2 และ 3 พับสูงกว่าควบคุมพื้นฐาน pGL3 เวกเตอร์), แต่อีกต่อไปเวกเตอร์ (แทน sequences−449 / +133 bp and−642 / +133 bp)ถูกมากมากใช้งาน แนะนำอยู่ระหว่างนิวคลีโอไทด์−642 และ −242 บวกกำกับดูแลองค์ประกอบของงานเหล่านี้เซลล์รายการ ขึ้นอยู่กับสภาพแวดล้อมที่โทรศัพท์มือถือ ส่วนที่ยาวที่สุดภาคโปรโมเตอร์ ABCB10 (แสดงลำดับ −979 /+133 bp) แสดงกิจกรรมที่คล้ายกัน หรือต่ำกว่าเล็กน้อยที่สังเกตสำหรับ the−642 / +133 bp สร้างในบรรทัดทั้งหมดเซลล์ทดสอบ ชี้การขาดองค์ประกอบข้อบังคับที่เกี่ยวข้องในลำดับยืดระหว่างนิวคลีโอไทด์ −979 และ −642 (Fig. 2)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.2 กิจกรรมก่อการ ABCB10 ในเซลล์ที่เลือก
ศึกษาก่อนหน้านี้แสดงให้เห็นว่า ABCB10 จะแสดงในวงกว้างใน
เนื้อเยื่อต่างๆที่มีการแสดงออกสูงสุดถูกตั้งข้อสังเกตในตับ
ไตกล้ามเนื้อและเซลล์เม็ดเลือด [6,3] นี่คือเหตุผลที่เราตัดสินใจ
ที่จะตรวจสอบการทำงานของผู้ก่อการที่เกิดขึ้นจริงของยีน 5'-ขนาบ ABCB10
ส่วนระบุว่าเป็นที่มีศักยภาพส่วนหลักในการกำกับนักข่าว
ทดสอบยีนโดยใช้ชุดของนักข่าว 5'-ลบสร้างใน K562,
HepG2 และ HEK293 เซลล์ ที่เป็นตัวแทนของเซลล์ต้นกำเนิดของเนื้อเยื่อที่แตกต่างกัน
(haematopoietic ตับและไตตามลำดับ) เศษโคลนทั้งหมด
แสดงให้เห็นว่ากิจกรรมการก่อการสูงกว่า promoterless
เวกเตอร์ pGL3 พื้นฐานยืนยันตัวตนของพวกเขาเป็นผู้ก่อการ ABCB10
(รูปที่ 2). .Moreover รูปแบบของกิจกรรมที่สัมพันธ์กันของโครงสร้างที่แตกต่างกัน
มีความยาวแตกต่างกันสำหรับสายพันธุ์เซลล์ของเราทดสอบ ในเซลล์ HEK293 ลบทั้งหมด
แสดงให้เห็นถึงชิ้นส่วนที่คล้ายกันค่อนข้าง lowactivity ในทางตรงกันข้ามกับเซลล์ HEK293 รูปแบบของกิจกรรมการก่อการ ABCB10 ที่แตกต่างกันใน
อีกสองสายพันธุ์เซลล์ ใน K562 และ HepG2 เซลล์, ที่สั้นที่สุด
phABCB10 (-242 / + 133) ลัคเวกเตอร์มีการถอดรหัสค่อนข้างต่ำ
กิจกรรม (ที่ 2 และ 3 เท่าสูงกว่าการควบคุมเวกเตอร์ pGL3 ขั้นพื้นฐาน) แต่นาน
เวกเตอร์ (คิดลำดับ-449 / + 133 bp และ-642 / + 133 bp)
มีการใช้งานมากขึ้นมากขึ้นเรื่อย ๆ ซึ่งแสดงระหว่างนิวคลีโอ
-642 -242 และองค์ประกอบของการกำกับดูแลการใช้งานในเชิงบวกเหล่านี้
เซลล์ขึ้นอยู่กับสภาพแวดล้อมที่โทรศัพท์มือถือ ส่วนที่ยาวที่สุด
ของภูมิภาคก่อการ ABCB10 (คิดลำดับ -979 /
133 bp) แสดงให้เห็นถึงกิจกรรมที่คล้ายกันหรือต่ำกว่าเล็กน้อยกับที่พบ
สำหรับ-642 / + 133 bp สร้างในทุกเซลล์ทดสอบชี้
การขาดกฎระเบียบที่เกี่ยวข้อง องค์ประกอบในระหว่างยืดลำดับ
นิวคลีโอ -979 และ -642 (รูปที่ 2).

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.2 . abcb10 ส่งเสริมกิจกรรมในสายพันธุ์ของเซลล์
การศึกษาก่อนหน้านี้ได้แสดงให้เห็นว่า abcb10 เป็นวงกว้างโดย
เนื้อเยื่อหลาย กับการแสดงออกสูงสุดถูกพบในตับ ไต กล้ามเนื้อ และเซลล์ที่แท้จริง
, [ 6,3 ] นี่คือเหตุผลที่เราตัดสินใจ
เพื่อตรวจสอบการทำงานของโปรโมเตอร์ที่แท้จริงนั้น abcb10 ยีน
- จ 5ส่วนที่ระบุว่าเป็นหลัก ส่วนในด้านศักยภาพนักข่าว
ยีนโดยใช้ชุด 5 ’ - ข่าวลบ สร้างใน k562
และเซลล์มะเร็งตับ , hek293 แทนเซลล์เนื้อเยื่อที่แตกต่างกันที่มา
( ที่แท้จริง ตับ ไต ตามลำดับ ) ทั้งหมดมีการโคลนชิ้นส่วน
กิจกรรมสูงกว่า promoterless
pgl3 พื้นฐานเวกเตอร์การยืนยันตัวตนของพวกเขาเป็น abcb10 โปรโมเตอร์
( รูปที่ 2 ) นอกจากนี้ รูปแบบของกิจกรรมที่แตกต่างจากญาติสร้างความยาวแตกต่างกัน
สำหรับเซลล์เส้นเราทดสอบ ใน hek293 เศษเซลล์การลบ
รูปเหมือนกัน แต่ lowactivity . ในทางตรงกันข้ามกับ hek293 เซลล์ รูปแบบของกิจกรรมส่งเสริมการขาย abcb10 แตกต่างกันในเซลล์
อีกสองเส้น และใน k562 เซลล์มะเร็งตับ ,phabcb10 สั้น
( − 242 / 133 ) เวกเตอร์ลุคมีกิจกรรม particle
ค่อนข้างต่ำ ( 2 และ 3 เท่า สูงกว่าการควบคุมพื้นฐานเวกเตอร์เวกเตอร์ pgl3 ) แต่อีก
( แสดงถึงลำดับ− 449 / 133 BP และ− 642 / 133 BP )
เป็นมากขึ้นใช้งานมากขึ้น แนะนำการแสดงระหว่าง nucleotides
− 642 องค์ประกอบที่ใช้งาน และ− 242 บวกในเซลล์เหล่านี้
ข้อบังคับขึ้นอยู่กับสภาพแวดล้อมของระบบ ส่วนที่ยาวที่สุดของภูมิภาค abcb10
( แทนการลำดับ− 979 /
133 BP ) แสดงให้เห็นกิจกรรมที่คล้ายกันหรือลดลงเล็กน้อยที่ได้
สำหรับ− 642 / 133 BP สร้างในเซลล์ทดสอบ ชี้
ให้ขาดในองค์ประกอบที่เกี่ยวข้องกับลำดับนิวคลีโอไทด์และยืดระหว่าง
−− 642 ( รูปที่ 2 )