At first, 800 μl of a 125 μg/ml BSA

At first, 800 μl of a 125 μg/ml BSA solutionwas filtered on “as grown” BDD-PM. The membranewas then rinsedwith 2ml ofwater, before elution of BSA with 1.6 ml of acetonitrile/water mixture (70/30). Around 1.4 ml of solution was finally collected. Then, the protein was digested in peptidic fragments using an endopeptidase, namely trypsin. The sample preparation protocol dedicated to mass spectrometry has been detailed previously [48]. We focused the MS analysis on two BSA typical specific peptides, HLVDEPQNLIK (P1) and LVNELTEFAK (P2). One can note that an internal standard is required for absolute quantification of analyte during LC tandemMS characterization, especiallywhen complex biologic media are involved. Here, the aim of the current study is solely to estimate the recovery of the diamond membrane, namely the ratio between the extracted to the applied analyte amounts. The chromatograms are illustrated in Fig. 5. The recovery ratios obtained with a pristine BDD-PM are 1.1% for P1 and 0.7% for P2, all ratios are shown in Table 2. Since a porous fiber membrane exhibits a higher porosity compared to a particle-loadedmembrane, its loading is rather lowcompared with usual cartridges. The same experiment, with identical solution was carried out on a diamond membrane functionalized with a C4 aliphatic chain thanks to the grafting technique detailed previously. After mass spectrometry analysis, the calculated ratio is 17.6% for P1 and 20.3% for P2. All further chromatograms and mass spectra are reported in the Supporting information. When compared with the “as grown” membranes (hydrogen terminated), the C4 modified membrane improves the protein extraction by a factor of 20. One can note that this effect is related to the increase of the retention factor ks (Eq. (1)) and therefore should be associated with the increase of the breakthrough volume. This experiment points out that the increase of the hydrophobic character of the membrane leads to an increase of the adsorption of a protein [49]. Compared to the usual silica solid phase, ‘as grown’ diamond can be used without functionalization as efficient reverse phase for protein extraction. A spontaneous, fast and one-step functionalization route increases recovery efficiency by a factor of 20.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ครั้งแรก μl 800 ของตัว 125 ml μg บีเอสเอ solutionwas กรอง "เติบโตขึ้น" BDD PM Membranewas แล้ว rinsedwith 2ml ofwater ก่อน elution ของบีเอสเอมี 1.6 ml ของ น้ำ/acetonitrile ผสม (70/30) สุดท้ายรวบรวมไว้ประมาณ 1.4 ml ของโซลูชัน แล้ว โปรตีนถูกต้องในบางส่วนของ peptidic ที่ใช้เป็น endopeptidase ได้แก่ทริปซิน โพรโทคอเตรียมอย่างที่ทุ่มเทไปรเมทได้รับรายละเอียดก่อนหน้านี้ [48] เราเน้นการวิเคราะห์ MS สองบีเอสเอทั่วไปเฉพาะเปปไทด์ HLVDEPQNLIK (P1) และ LVNELTEFAK (p 2) หนึ่งสามารถทราบว่า มาตรฐานภายในที่จำเป็นสำหรับการนับแบบสัมบูรณ์ของ analyte ระหว่างจำแนก tandemMS LC, especiallywhen ซับซ้อนอุบัติสื่อเกี่ยวข้อง ที่นี่ จุดมุ่งหมายของการศึกษาปัจจุบันได้แต่เพียงผู้เดียวเพื่อ ประเมินการฟื้นตัวของเมมเบรนไดมอนด์ คืออัตราส่วนระหว่างแยกยอด analyte ที่ใช้ Chromatograms จะแสดงใน Fig. 5 อัตราการกู้คืนได้ ด้วย PM BDD บริสุทธิ์เป็น 1.1% สำหรับ P1 และ p 2% 0.7 อัตราส่วนทั้งหมดจะแสดงในตารางที่ 2 เนื่องจากการจัดแสดงเยื่อใย porous porosity ที่สูงเมื่อเทียบกับอนุภาค-loadedmembrane โหลดมันจะค่อนข้าง lowcompared กับตลับปกติ ทดลองเหมือนกัน ด้วยโซลูชั่นเหมือนถูกดำเนินบนเมมเบรนไดมอนด์ที่ functionalized ไข่ C4 aliphatic ด้วยเทคนิค grafting รายละเอียดก่อนหน้านี้ หลังจากที่วิเคราะห์รเมท อัตราส่วนคำนวณได้เป็น 17.6% สำหรับ P1 และ p 2% 20.3 Chromatograms เพิ่มเติมทั้งหมดและแรมสเป็คตรามวลมีรายงานข้อมูล Supporting เมื่อเปรียบเทียบกับสาร "เป็นการเติบโต" (ไฮโดรเจนเลิก), C4 ปรับเปลี่ยน เมมเบรนช่วยสกัดโปรตีน โดยตัว 20 หนึ่งสามารถสังเกตลักษณะพิเศษนี้เกี่ยวข้องกับการเพิ่มขึ้นของการเก็บข้อมูลปัจจัย ks (Eq. (1)) และดังนั้น ควรจะสัมพันธ์กับการเพิ่มขึ้นของปริมาณความก้าวหน้า ทดลองนี้ชี้ให้เห็นว่า การเพิ่มขึ้นของอักขระ hydrophobic ของเมมเบรนนำไปสู่การเพิ่มขึ้นของการดูดซับโปรตีน [49] เมื่อเทียบกับเฟสของแข็งซิลิก้าปกติ ได้ปลูก' สามารถใช้ไดมอนด์ โดย functionalization เป็นระยะกลับมีประสิทธิภาพการแยกโปรตีนได้ ขาด รวดเร็ว และขั้นตอนเดียวประสิทธิภาพการกู้คืนเพิ่มเส้นทาง functionalization โดยตัวคูณ 20

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ตอนแรก 800 ไมโครลิตรของ 125 ไมโครกรัม / มล. บีเอสเอ solutionwas กรองบน​​ "ที่เติบโตขึ้น" BDD-PM membranewas แล้ว rinsedwith 2ml ofwater ก่อนชะของบีเอสเอ 1.6 มิลลิลิตร acetonitrile / สารผสมน้ำ (70/30) รอบ 1.4 มล. ของการแก้ปัญหาที่ถูกเก็บรวบรวมในที่สุด จากนั้นได้รับการย่อยโปรตีนในเศษ peptidic ใช้ endopeptidase ที่คือ trypsin ตัวอย่างการจัดทำโพรโทคอทุ่มเทให้กับมวลสารได้รับรายละเอียดก่อนหน้านี้ [48] เรามุ่งเน้นไปที่การวิเคราะห์ MS ในสองบีเอสเอเปปไทด์ที่เฉพาะเจาะจงทั่วไป HLVDEPQNLIK (P1) และ LVNELTEFAK (P2) หนึ่งสามารถทราบว่ามาตรฐานภายในเป็นสิ่งจำเป็นสำหรับปริมาณที่แน่นอนของตัวละครในระหว่างการวิเคราะห์ LC tandemMS ซับซ้อน especiallywhen สื่อทางชีววิทยาที่มีส่วนเกี่ยวข้อง นี่คือจุดมุ่งหมายของการศึกษาในปัจจุบันเป็น แต่เพียงผู้เดียวในการประเมินการฟื้นตัวของเมมเบรนเพชรคืออัตราส่วนระหว่างแยกไปจำนวนเงินที่นำมาใช้วิเคราะห์ chromatograms จะแสดงในรูปที่ 5. อัตราส่วนการกู้คืนที่ได้รับกับที่เก่าแก่ BDD-PM เป็น 1.1% สำหรับ P1 และ 0.7% สำหรับ P2 อัตราส่วนทั้งหมดจะถูกแสดงในตารางที่ 2 ตั้งแต่เมมเบรนเส้นใยที่มีรูพรุนจัดแสดงนิทรรศการความพรุนสูงขึ้นเมื่อเทียบกับอนุภาค loadedmembrane โหลดของมันคือ ค่อนข้าง lowcompared กับตลับปกติ การทดลองเดียวกันกับการแก้ปัญหาที่เหมือนกันได้รับการดำเนินการเกี่ยวกับเมมเบรนเพชรฟังก์ชันที่มีห่วงโซ่ขอบคุณ aliphatic C4 เทคนิคการปลูกถ่ายอวัยวะร​​ายละเอียดก่อนหน้านี้ หลังจากการวิเคราะห์มวลสารอัตราส่วนคำนวณเป็น 17.6% สำหรับ P1 และ 20.3% สำหรับ P2 chromatograms เพิ่มเติมและสเปกตรัมมวลจะมีการรายงานในข้อมูลสนับสนุน เมื่อเทียบกับ "เติบโตขึ้นเป็น" เมมเบรน (ไฮโดรเจนยกเลิก) C4 แก้ไขเยื่อช่วยเพิ่มการสกัดโปรตีนโดยปัจจัยที่ 20 หนึ่งสามารถทราบว่าผลกระทบนี้จะเกี่ยวข้องกับการเพิ่มขึ้นของปัจจัยการเก็บรักษาที่แคนซัส (สม. (1) ) และดังนั้นจึงควรจะมีความสัมพันธ์กับการเพิ่มขึ้นของปริมาณการพัฒนา การทดลองนี้ชี้ให้เห็นว่าการเพิ่มขึ้นของตัวละครไม่ชอบน้ำของเมมเบรนจะนำไปสู่​​การเพิ่มขึ้นของการดูดซับของโปรตีนที่ [49] เมื่อเทียบกับซิลิกาของแข็งปกติ 'เป็นที่ปลูก' เพชรสามารถใช้โดยไม่ functionalization เป็นขั้นตอนย้อนกลับที่มีประสิทธิภาพในการสกัดโปรตีน เกิดขึ้นเองได้อย่างรวดเร็วและขั้นตอนที่หนึ่งในเส้นทาง functionalization เพิ่มประสิทธิภาพการกู้คืนโดยปัจจัยที่ 20

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ตอนแรกμ 800 ลิตร 125 μ g / ml ( solutionwas กรอง " เป็นผู้ใหญ่ " bdd-pm . การ membranewas แล้ว rinsedwith 2ml ต่างๆ ก่อนใช้ BSA กับ 1.6 ml / น้ำผสมไนไตรล์ ( 70 / 30 ) ประมาณ 1.4 กรัม โซลูชั่น ก็เก็บ แล้ว โปรตีนถูกย่อยในเศษ peptidic ใช้โดเพปทิเดส ได้แก่ เอนไซม์ .ตัวอย่างการเตรียมขั้นตอนโดยเฉพาะมวลสารได้รับรายละเอียดก่อนหน้านี้ [ 48 ] เรามุ่งเน้นการวิเคราะห์ MS สองประเภททั่วไปเฉพาะเปป hlvdepqnlik ( P1 ) และ lvneltefak ( P2 ) หนึ่งสามารถทราบว่า มาตรฐานภายในที่ใช้เป็นปริมาณสัมบูรณ์ของครูระหว่าง LC tandemms ตัวละคร especiallywhen สื่อทางชีววิทยาที่เกี่ยวข้อง ที่นี่จุดมุ่งหมายของการศึกษาในปัจจุบันเป็นเพียงประมาณการการฟื้นตัวของเพชรด้วย คือ อัตราส่วนระหว่างสารสกัดไปใช้ครูจํานวนเงิน ที่กลิ่นจะแสดงในรูปที่ 5 อัตราส่วนการกู้คืนได้ด้วย bdd-pm ล้วนเป็น 1.1% สำหรับ P1 และ 0.7 % P2 , อัตราส่วนที่แสดงในตารางที่ 2เนื่องจากเยื่อใย พรุน จัดแสดงความพรุนสูงเมื่อเทียบกับอนุภาค loadedmembrane มันโหลดค่อนข้าง lowcompared กับตลับหมึกปกติ การทดลองเดียวกันกับสารละลายเหมือนกันดำเนินการในเมมเบรนที่มีเพชรด้วย C4 อะลิฟาติกโซ่ขอบคุณการปลูกถ่ายอวัยวะรายละเอียดเทคนิคก่อนหน้านี้ หลังจากการวิเคราะห์มวลสาร , คำนวณอัตราส่วนเป็น 17ร้อยละ 6 และร้อยละ 20.3 P1 P2 . กลิ่นต่อไปและมวลนี้จะรายงานในการสนับสนุนข้อมูล เมื่อเทียบกับ " โต " เมมเบรน ( ไฮโดรเจนยกเลิก ) , การดัดแปลงปรับปรุงการสกัดโปรตีนเมมเบรนโดยปัจจัย 20 หนึ่งสามารถทราบว่าผลกระทบนี้จะเกี่ยวข้องกับการเพิ่มขึ้นของปัจจัย KS ( อีคิว( 1 ) ) และดังนั้นจึงควรจะเกี่ยวข้องกับการเพิ่มขึ้นของปริมาตร . การทดลองนี้ชี้ให้เห็นว่าการเพิ่มขึ้นของตัวละคร ) ของเยื่อ นำไปสู่การเพิ่มขึ้นของการดูดซับโปรตีน [ 49 ] เมื่อเทียบกับปกติซิลิกาแข็งเฟส ' ปลูก ' เพชรสามารถใช้โดยไม่ functionalization ขั้นตอนย้อนกลับสำหรับประสิทธิภาพการสกัดโปรตีนธรรมชาติ อย่างรวดเร็ว และเพิ่มประสิทธิภาพในขั้นตอนเดียว functionalization เส้นทางการฟื้นตัว โดยปัจจัยของ 20