RNA Extraction and Reverse Transcri

RNA Extraction and Reverse Transcriptase-PCR
Total RNA was isolated using a TRIzol reagent (Invitrogen
Co., Carlsbad, CA, U.S.A.) according to the manufacturer’s
instructions. Total RNA concentration was determined by
spectrophotometric analysis at 260 nm. In reverse transcription
reaction system, 2.5m g total RNA and 0.5m g random
primers were mixed and incubated at 70 °C for 5 min. Then,
5RT buffer, 20 UrRNasin ribonuclease inhibitor, 10mM
dNTP mix, 200U MMLV reverse transcriptase and RNase
free water were added. The mixture was incubated at 25 °C
for 10 min, 37 °C for 1 h and 95 °C for 5 min.19)
Real-time PCR: Real-time PCR of Bcl-2, Bax, Survivin
and GAPDH were performed using SYBR Green PCR
assay.19) Each 20m l PCR reaction mixture contained 5m l
cDNA, PCR buffer, 3mM MgCl2, 0.25mM of each dNTP,

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

สกัด RNA และ PCR ปเทสรวม RNA ถูกแยกโดยใช้เอเจนต์ TRIzol (Invitrogenบริษัท คาร์ลบาด CA สหรัฐอเมริกา) ตามของผู้ผลิตคำแนะนำ ความเข้มข้นของ RNA ทั้งหมดถูกกำหนดโดยวิเคราะห์ spectrophotometric ที่ 260 nm ในการถอดรหัสย้อนกลับระบบปฏิกิริยา 2.5m RNA รวม g และ g 0.5 ม.สุ่มไพรเมอร์ผสม และได้รับการกกที่ 70 ° C สำหรับ 5 นาที แล้ว5 RT บัฟเฟอร์ 20 UrRNasin ribonuclease ยับยั้ง 10 มม.ผสม dNTP, 200U MMLV ปเท และ RNaseเพิ่มน้ำ ส่วนผสมได้รับการกกที่ 25 ° Cสำหรับ 10 นาที 37 ° C สำหรับ 1 h และ 95 ° C สำหรับ 5 min.19)PCR แบบเรียลไทม์: PCR แบบเรียลไทม์ของ Bcl-2, Bax, Survivinและ GAPDH ดำเนินการโดยใช้ SYBR Green PCRl assay.19) แต่ละ 20 เมตรส่วนผสมของปฏิกิริยา PCR อยู่ม 5 lcDNA, PCR บัฟเฟอร์ 3 มม.แต่ละ dNTP, 0.25mM, MgCl2

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

RNA สกัดและ Reverse Transcriptase-PCR
รวม RNA ถูกแยกออกโดยใช้ Trizol น้ำยา (Invitrogen
Co. , Carlsbad, CA, USA) ตามที่ผู้ผลิต
คำแนะนำ ความเข้มข้นของ RNA ทั้งหมดถูกกำหนดโดย
การวิเคราะห์สเปกที่ 260 นาโนเมตร ในการถอดรหัสย้อนกลับ
ระบบปฏิกิริยา 2.5mg รวม RNA และ 0.5mg สุ่ม
ไพรเมอร์ผสมและบ่มที่อุณหภูมิ 70 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 5 นาที จากนั้น
5? RT บัฟเฟอร์ 20 UrRNasin ribonuclease ยับยั้ง 10 mM
ผสม dNTP, 200U MMLV reverse transcriptase และ RNase
น้ำฟรีถูกเพิ่ม ส่วนผสมที่ถูกบ่มที่อุณหภูมิ 25 องศาเซลเซียส
เป็นเวลา 10 นาที, 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 1 ชั่วโมงและ 95 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 5 min.19)
Real-time PCR: Real-time PCR ของ Bcl-2, แบ็กซ์, survivin
และ GAPDH ถูกดำเนินการโดยใช้ สีเขียว SYBR PCR
assay.19) แต่ละ 20m L PCR ปฏิกิริยาส่วนผสมที่มีอยู่ 5m L
cDNA, PCR บัฟเฟอร์ 3mm MgCl2, 0.25mm ของแต่ละ dNTP,

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การสกัดอาร์เอ็นเอและ reverse transcriptase PCRอาร์เอ็นเอทั้งหมดได้ใช้ trizol Reagent ( Invitrogenจำกัด , Carlsbad , CA , USA ) ตามที่ผู้ผลิตคําแนะนํา ความเข้มข้นของอาร์เอ็นเอทั้งหมดถูกกำหนดโดย) การวิเคราะห์ที่ 260 นาโนเมตร ในทางตรงกันข้ามการถอดความระบบปฏิกิริยา 2.5 กรัมรวม RNA และ 0.5 กรัม แบบสุ่มไพรเมอร์ผสมบ่มที่อุณหภูมิ 70 องศา C เป็นเวลา 5 นาทีแล้ว5rt บัฟเฟอร์ , 20 urrnasin ไรโบนิวคลีเสาร !dntp ผสม 200u mmlv reverse transcriptase และ เลสน้ำฟรีมีการเพิ่ม ผสมส่วนผสมที่อุณหภูมิ 25 ° Cสำหรับ 10 นาที , 37 ° C เป็นเวลา 1 ชั่วโมง และ 95 องศา C เป็นเวลา 5 min.19 )เวลาจริงเวลาจริงของ PCR PCR bcl-2 bax , ดิกgapdh และการใช้ PCR SYBR กรีน( 19 ) แต่ละ 20m ผมเพื่อตรวจหาส่วนผสมที่มีอยู่ 5 ลิตรวิธี PCR buffer , 3 ชุดของแต่ละ dntp 0.25mm , ,