The TOPO TA Cloning® Kit (Invitroge

The TOPO TA Cloning® Kit (Invitrogen, U.S.) was used for cloning of the PCR product following the manufacturer’s protocol. Minipreparation of plasmid DNA was carried out using the QIAprep Spin miniprep kit (Qiagen, Valencia, CA, U.S.), followed by restriction endonuclease analysis to identify the clones for sequencing. DNA sequencing was performed using an ABI Prism Dye Terminator Cycle Sequencing Ready Reaction kit and ABI PRISM 3100 Genetic Analyzer (Perkin-Elmer, Foster City, CA) following the manufacturer’s instructions. The 16S rRNA gene sequences were aligned using ClustalW and analyzed by neighbor-joining (NJ) using the MEGA 4 program [19].

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

เดินโคลน TA ®ชุด (Invitrogen สหรัฐอเมริกา) ถูกใช้สำหรับของผลิตภัณฑ์ PCR ต่อของโพรโทคอล Minipreparation ของ plasmid DNA ถูกดำเนินใช้ชุด miniprep ของ QIAprep หมุน (Qiagen, Valencia, CA สหรัฐอเมริกา), ตาม ด้วย endonuclease จำกัดวิเคราะห์ระบุโคลนสำหรับลำดับงาน ลำดับดีเอ็นเอที่ดำเนินการใช้เป็นชุด ABI ปริซึมย้อมเทอร์มิเนเตอร์วงจรลำดับพร้อมปฏิกิริยาและ 3100 ปริซึม ABI พันธุกรรมวิเคราะห์ (เพอร์เอลเมอ ฟอสเตอร์ City, CA) ตามคำแนะนำของผู้ผลิต 16S rRNA ยีนลำดับถูกจัดโดยใช้ ClustalW และวิเคราะห์โดยเพื่อนบ้านรวม (NJ) ใช้โปรแกรม 4 ร็อค [19]

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

TOPO TA Cloning® Kit (Invitrogen สหรัฐอเมริกา) ถูกนำมาใช้สำหรับการโคลนนิ่งของผลิตภัณฑ์ PCR ต่อไปนี้โปรโตคอลของผู้ผลิต Minipreparation ของพลาสมิดดีเอ็นเอถูกนำออกมาใช้ปั่น miniprep ชุด QIAprep (Qiagen, วาเลนเซีย, CA, US) ตามด้วยการวิเคราะห์ endonuclease ที่ จำกัด ในการระบุสายพันธุ์สำหรับการเรียงลำดับ ลำดับดีเอ็นเอได้รับการดำเนินการโดยใช้ชุดปฏิกิริยา ABI ปริซึมย้อม Terminator วงจรลำดับพร้อมและ ABI PRISM 3100 ทางพันธุกรรม Analyzer (เพอร์กินเอลเมอ, ฟอสเตอร์ซิตี้, CA) ตามคำแนะนำของผู้ผลิต 16S rRNA ลำดับยีนถูกจัดชิดโดยใช้ ClustalW และวิเคราะห์โดยเพื่อนบ้านเข้า (NJ) โดยใช้โปรแกรม MEGA 4 [19]

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ที่สถานที่ทาโคลน® Kit ( Invitrogen , สหรัฐอเมริกา ) ใช้สำหรับการทำผลิตภัณฑ์ PCR ตามขั้นตอนของผู้ผลิต minipreparation ของพลาสมิดดีเอ็นเอถูกนำออกมาใช้ qiaprep ปั่น miniprep Kit ( QIAGEN , Valencia , CA , สหรัฐอเมริกา ) , ตามด้วยการวิเคราะห์เอนโดนิวคลีเอสจำกัดระบุสายพันธุ์สำหรับการติดตาม .การจัดลำดับดีเอ็นเอการใช้อบิปริซึมย้อม Terminator รอบลำดับชุดปฏิกิริยาพร้อมและ ABI ปริซึม 3100 พันธุกรรมวิเคราะห์ ( เพอร์กินเอลเมอร์ ฟอสเตอร์ ซิตี้ , แคลิฟอร์เนีย ) ตามคำแนะนำของผู้ผลิต การลำดับเบส 16S rRNA ยีนชิด และวิเคราะห์ข้อมูลโดย ใช้ clustalw เพื่อนบ้านร่วม ( NJ ) โดยใช้โปรแกรมเด่น 4 [ 19 ]