Clonal evaluationStakes from F1 see

Clonal evaluation
Stakes from F1 seedlings were planted for evaluation
at two locations, Ohawu and Fumesua in high disease
Table 1 Crosses of progenitors or parental genotypes and
number of F1 progenies

pressure zones or hot-spots for CMD. This evaluation
was done on 12 parental genotypes and the 525 F1
progenies comprising individuals pre-selected for
CMD resistance in the seedling nursery. The parental
lines included three landraces, one IITA breeding
genotype and eight CIAT developed genotypes developed
for improved CMD resistance using the CMD2
gene. The plants were established under natural
conditions without irrigation or fertilization. Spacing
was 1 m between rows and within rows. Routine field
maintenance practices were followed. Virus symptom
severity scores were assessed on a scale of 1–5, where
1 indicates no symptoms and 5 indicates severe mosaic
with distortion of the entire leaf (IITA 1990). Ten
plants per row were scored at 1, 3 and 6 MAP.
Marker assisted selection
Multiple marker analysis was used to test for the
CMD2 gene in the progenitors and progenies. The
presence of the CMD2 gene in the CMD resistant
parental genotypes requires the presence of an allele
associated with CMD2 and the co-segregation with
CMD resistance in the progeny. Four markers were
used to analyse for the CMD2 gene. The presence of
alleles associated with CMD2 in the four markers in a
genotype is an indication that the most probable source
of CMD resistance is CMD2.
Fresh young tender leaf samples of the 12 progenitors
and all the F1 progenies were used for DNA
isolation with the Qiagen (Palo Alto, CA, USA) kit.
Four DNA based markers associated with the CMD2
gene which confers CMD resistance were used for
molecular analysis. They included one SCAR marker
(RME1) and three SSR markers (SSRY28, 158 and
169). The primer sequence for the four markers
associated with the CMD2 gene is shown in Table 2.
Two genotypes were also included as controls for the
marker analysis. These are TME3 which is the source
of the CMD2 gene which was used as the positive
control for presence of the CMD2 genes while Nga2
was used as the negative control and absence for the
band (marker allele) for the CMD2 gene.
The reaction contained 50 ng template DNA, 1X
PCR buffer, 1.5 Mm MgCl2, 0.2 mM dNTP, 250 nM
each of forward and reverse primers and 0.25U Taq
polymerase in a total volume of 10 ll. PCR amplification
was carried out in an M&J Thermal cycler. The
three SSR marker (158, 169 and 22RY28) profiles

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ประเมิน clonalเงินเดิมพันจาก F1 กล้าไม้ที่ปลูกเพื่อประเมินผลพื้นที่ 2, Ohawu และ Fumesua ในโรคสูงตารางที่ 1 ตัด progenitors หรือศึกษาจีโนไทป์โดยผู้ปกครอง และจำนวน F1 progeniesโซนความดันหรือร้อนจุดสำหรับ cmd การประเมินนี้สำเร็จการศึกษาจีโนไทป์ปกครอง 12 และ 525 F1ประกอบด้วยบุคคลที่เลือกไว้ล่วงหน้าสำหรับ progeniesคำสั่งที่ความต้านทานในเรือนเพาะชำแหล่ง การปกครองบรรทัดสาม landraces รวม IITA พันธุ์หนึ่งลักษณะทางพันธุกรรมและ CIAT แปดพัฒนาพัฒนาศึกษาจีโนไทป์สำหรับต่อต้านคำสั่งปรับปรุงโดยใช้การ CMD2ยีน พืชที่ก่อตั้งขึ้นภายใต้ธรรมชาติเงื่อนไขไม่ มีการชลประทานหรือการปฏิสนธิ ระยะห่าง1 เมตร ระหว่างแถว และ ในแถวนั้น ฟิลด์ตามปกติบำรุงรักษาปฏิบัติตาม อาการไวรัสมีประเมินคะแนนความรุนแรงในระดับ 1-5 ที่อาการบ่งชี้ 1 และ 5 บ่งชี้โมเสกอย่างรุนแรงมีความผิดเพี้ยนของใบทั้งหมด (IITA 1990) สิบพืชต่อแถวได้คะแนนที่ 1, 3 และ 6 แผนที่เครื่องหมายช่วยเลือกใช้หลายเครื่องหมายการวิเคราะห์การทดสอบการยีน CMD2 ใน progenitors และ progenies ที่ของยีน CMD2 ใน CMD ทนการศึกษาจีโนไทป์โดยผู้ปกครองต้องของ alleleเกี่ยวข้องกับ CMD2 และแบ่งแยกร่วมด้วยคำสั่งที่ความต้านทานในตัวลูกหลาน มีเครื่องหมายสี่ใช้ในการวิเคราะห์สำหรับยีน CMD2 สถานะของalleles ที่เกี่ยวข้องกับ CMD2 ในเครื่องหมาย 4 ในการลักษณะทางพันธุกรรมเป็นตัวบ่งชี้ที่ต้นทางน่าเป็นที่สุดคำสั่งความต้านทานเป็น CMD2หนุ่มสดชำระเงินตัวอย่างใบไม้ 12 progenitorsและ progenies F1 ทั้งหมดใช้สำหรับการดีเอ็นเอแยกกับชุด Qiagen (ดัลลัส CA, USA)เครื่องหมายดีเอ็นเอตามสี่ที่เกี่ยวข้องกับการ CMD2ใช้สำหรับยีนที่ต้านทานคำสั่ง confersการวิเคราะห์ระดับโมเลกุล จะรวมเครื่องหมายรอยหนึ่ง(RME1) และเครื่องหมาย SSR สาม (SSRY28, 158 และ169) ลำดับรองพื้นสำหรับเครื่องหมาย 4เกี่ยวข้องกับ CMD2 ยีนจะแสดงในตารางที่ 2ยังได้ศึกษาจีโนไทป์ 2 เป็นการควบคุมการการวิเคราะห์เครื่องหมาย ได้แก่ TME3 ซึ่งเป็นแหล่งที่มาของยีน CMD2 ซึ่งถูกใช้เป็นในแง่บวกควบคุมของยีน CMD2 ในขณะที่ Nga2ใช้เป็นตัวควบคุมค่าลบและการขาดงานสำหรับการวง (เครื่องหมาย allele) สำหรับยีน CMD2ปฏิกิริยาที่ประกอบด้วย DNA แม่ ng 50, 1 XPCR บัฟเฟอร์ 1.5 Mm MgCl2, dNTP 0.2 mM, 250 nMของไพรเมอร์ไปข้างหน้า และย้อนกลับและ 0.25U Taqพอลิเมอเรสในปริมาณผลรวมของ 10 จะ PCR ขยายได้ดำเนินการใน cycler มี M & J ความร้อน ที่เครื่องหมาย SSR สาม (158, 169 และ 22RY28) โพรไฟล์

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การประเมินผลของพันธุ์ยาง
จากต้นกล้าเดิมพัน F1 ถูกนำมาปลูกสำหรับการประเมินผล
ที่สองสถานที่ Ohawu และ Fumesua ในการเกิดโรคสูง
ตารางที่ 1 ข้ามของบรรพบุรุษหรือยีนของผู้ปกครองและ
จำนวนของลูก F1 โซนความดันหรือจุดร้อนสำหรับ CMD การประเมินนี้ได้ทำในวันที่ 12 ยีนของผู้ปกครองและ F1 525 ลูกที่ประกอบไปด้วยบุคคลที่เลือกไว้ล่วงหน้าสำหรับต้านทาน CMD ในเรือนเพาะชำกล้าไม้ ผู้ปกครองรวมถึงสามสายพันธุ์พื้นเมืองหนึ่ง IITA ผสมพันธุ์จีโนไทป์และแปด CIAT การพัฒนาสายพันธุ์ที่พัฒนาความต้านทาน CMD ปรับปรุงการใช้ cmd2 ยีน พืชที่ได้รับการจัดตั้งขึ้นตามธรรมชาติโดยไม่ต้องชลประทานหรือการปฏิสนธิ การเว้นวรรคเป็น 1 เมตรระหว่างแถวและอยู่ในแถว ข้อมูลประจำการปฏิบัติบำรุงรักษาตามมา อาการไวรัสคะแนนความรุนแรงได้รับการประเมินโย 1-5 ที่1 หมายถึงไม่มีอาการบ่งชี้ 5 และกระเบื้องโมเสคที่รุนแรงที่มีการบิดเบือนของใบทั้งหมด (IITA 1990) สิบต้นต่อแถวถูกยิงวันที่ 1, 3 และ 6 MAP. Marker ช่วยเลือกการวิเคราะห์หลายเครื่องหมายถูกใช้ในการทดสอบยีน cmd2 ในบรรพบุรุษและลูก การปรากฏตัวของยีนใน cmd2 ทน CMD จีโนไทป์ผู้ปกครองต้องมีการปรากฏตัวของอัลลีลที่เกี่ยวข้องกับ cmd2 และร่วมกับการแยกต้านทาน CMD ในลูกหลาน สี่เครื่องหมายถูกใช้ในการวิเคราะห์สำหรับยีน cmd2 การปรากฏตัวของอัลลีลที่เกี่ยวข้องกับ cmd2 ในสี่เครื่องหมายในจีโนไทป์เป็นข้อบ่งชี้ว่าแหล่งที่น่าจะเป็นที่สุดของความต้านทาน CMD เป็น cmd2. สดซื้อตัวอย่างใบอ่อนของ 12 บรรพบุรุษและ F1 ลูกถูกนำมาใช้สำหรับดีเอ็นเอแยกกับ Qiagen (พาโลอัลโต, CA, USA) ชุด. สี่ตามเครื่องหมายดีเอ็นเอที่เกี่ยวข้องกับ cmd2 ยีนซึ่งฟาโรห์ต้านทาน CMD ถูกนำมาใช้สำหรับการวิเคราะห์โมเลกุล พวกเขารวมถึงหนึ่งในเครื่องหมาย SCAR (RME1) และสามเครื่องหมาย SSR (SSRY28, 158 และ169) ลำดับไพรเมอร์สำหรับสี่เครื่องหมายที่เกี่ยวข้องกับยีน cmd2 จะแสดงในตารางที่ 2. สองสายพันธุ์นี้ยังรวมถึงได้รับการควบคุมสำหรับการวิเคราะห์เครื่องหมาย เหล่านี้เป็น TME3 ซึ่งเป็นแหล่งที่มาของยีน cmd2 ซึ่งถูกใช้เป็นบวกควบคุมการปรากฏตัวของยีน cmd2 ขณะ Nga2 ถูกใช้เป็นตัวควบคุมเชิงลบและการขาดสำหรับวงดนตรี (อัลลีลมาร์กเกอร์) สำหรับยีน cmd2. ปฏิกิริยาที่มี 50 ศึกษาดีเอ็นเอแม่แบบ 1X บัฟเฟอร์ PCR, 1.5 มม MgCl2, 0.2 มิลลิ dNTP 250 นาโนเมตรแต่ละข้างหน้าและย้อนกลับและไพร 0.25U Taq polymerase ในปริมาณรวมของ 10 LL ขยาย PCR ได้ดำเนินการใน Cycler ร้อน M & J สามเครื่องหมาย SSR (158, 169 และ 22RY28) โปรไฟล์

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

รูปแบบการประเมิน
เดิมพันจากต้นกล้าที่ปลูกไว้สำหรับการประเมิน
ที่ 2 สถานที่ ohawu fumesua สูงและโรค
ตาราง 1 คู่ผสม ตั้งต้น หรือพ่อแม่พันธุ์และจำนวนลูก F1

ดันโซนหรือจุดร้อน cmd การประเมิน
ทำ 12 ผู้ปกครองพันธุ์และ 525 F1
ลูกประกอบด้วยบุคคลก่อนเลือก
cmd ความต้านทานในการอนุบาล
รวมสามเส้นพ่อแม่พันธุ์ landraces หนึ่ง iita
โตแปดเกี๊ยตพัฒนาสายพันธุ์ พัฒนาเพื่อปรับปรุงความต้านทานใช้ CMD

cmd2 ยีน พืชก่อตั้งขึ้นภายใต้สภาวะธรรมชาติ
โดยไม่ต้องชลประทานหรือการปฏิสนธิ . ระยะห่าง
1 M ระหว่างแถวในแถว ประจำสาขา
การบำรุงรักษามีการปฏิบัติตาม ไวรัสอาการ
คะแนนประเมินความรุนแรงอยู่ในระดับของ 1 - 5 ที่
1 บ่งชี้ว่า ไม่มีอาการรุนแรงและ 5 แสดงโมเสก
ด้วยการบิดเบือนของใบไม้ทั้งหมด ( iita 1990 ) 10
ต้นต่อแถวเป็นคะแนนที่ 1 , 3 และ 6 ช่วยการวิเคราะห์เครื่องหมายเครื่องหมายแผนที่

หลายที่เลือกใช้สำหรับการทดสอบ
cmd2 ยีนในตั้งต้น และลูก .
มียีน cmd2 ใน cmd ทน
เมื่อผู้ปกครองต้องการมีอยู่ของยีนที่เกี่ยวข้องกับ cmd2

cmd และ Co แยกกับความต้านทานในลูกหลาน 4 เครื่องหมายถูก
ใช้วิเคราะห์สำหรับ cmd2 ยีน การแสดงของยีนที่เกี่ยวข้องกับ cmd2

ใน 4 ชนิดในพันธุกรรม เป็นข้อบ่งชี้ว่า น่าจะเป็นแหล่งของความต้านทาน cmd2 CMD
.
มะพร้าวอ่อนสด เปื่อย ตัวอย่างใบ 12 ตั้งต้น
ที่มีทั้งหมดและ F1 ถูกใช้ดีเอ็นเอ
แยกกับ QIAGEN ( อัลโต แคลิฟอร์เนีย สหรัฐอเมริกา )
4 ชุด ที่มีดีเอ็นเอเครื่องหมายที่เกี่ยวข้องกับยีนที่เกี่ยวข้อง cmd2

cmd ความต้านทานใช้สำหรับการวิเคราะห์โมเลกุล พวกเขารวมหนึ่งแผลเป็นเครื่องหมาย
( rme1 ) และสามเครื่องหมาย SSR ( ssry28 158 และ
169 ) ลําดับที่รองพื้นสำหรับสี่ที่เกี่ยวข้องกับ cmd2 ยีนเครื่องหมาย

แสดงดังตารางที่ 2สองสายพันธุ์ นอกจากนี้ยังรวมเป็นการควบคุมสำหรับ
การวิเคราะห์เครื่องหมาย เหล่านี้เป็น tme3 ซึ่งเป็นแหล่ง
ของ cmd2 ยีนซึ่งใช้เป็นบวก
ควบคุมสถานะของ cmd2 ยีนในขณะที่ nga2
ถูกใช้เป็นลบ และขาดการควบคุมสำหรับ
วง ( ยีนเครื่องหมาย ) สำหรับ cmd2 ยีน
ปฏิกิริยาที่มีอยู่ 50 ของแม่แบบ DNA PCR , 1x
บัฟเฟอร์ ชุด dntp 0.2 มม. 1.5 มม. , 250 nm
แต่ละชนิดไปข้างหน้าและย้อนกลับ 0.25u แทค
ใช้ในปริมาณรวม 10 จะ PCR (
ได้ดําเนินการใน M & J Thermal cycler .
สาม SSR Marker ( 158 169 และ 22ry28 ) โปรไฟล์