Studies of protein nutrition and bi

Studies of protein nutrition and biochemistry require reliable methods for analysis of amino acid (AA) composition in polypeptides of animal tissues and foods. Proteins are hydrolyzed by 6 M HCl (110 °C for 24 h), 4.2 M NaOH (105 °C for 20 h), or proteases. Analytical techniques that require high-performance liquid chromatography (HPLC) include pre-column derivatization with 4-chloro-7-nitrobenzofurazan, 9-fluorenyl methylchloroformate, phenylisothiocyanate, naphthalene-2,3-dicarboxaldehyde, 6-aminoquinolyl-N-hydroxysuccinimidyl carbamate, and o-phthaldialdehyde (OPA). OPA reacts with primary AA (except cysteine or cystine) in the presence of 2-mercaptoethanol or 3-mercaptopropionic acid to form a highly fluorescent adduct. OPA also reacts with 4-amino-1-butanol and 4-aminobutane-1,3-diol produced from oxidation of proline and 4-hydroxyproline, respectively, in the presence of chloramine-T plus sodium borohydride at 60 °C, or with S-carboxymethyl-cysteine formed from cysteine and iodoacetic acid at 25 °C. Fluorescence of OPA derivatives is monitored at excitation and emission wavelengths of 340 and 455 nm, respectively. Detection limits are 50 fmol for AA. This technique offers the following advantages: simple procedures for preparation of samples, reagents, and mobile-phase solutions; rapid pre-column formation of OPA-AA derivatives and their efficient separation at room temperature (e.g., 20–25 °C); high sensitivity of detection; easy automation on the HPLC apparatus; few interfering side reactions; a stable chromatography baseline for accurate integration of peak areas; and rapid regeneration of guard and analytical columns. Thus, the OPA method provides a useful tool to determine AA composition in proteins of animal tissues (e.g., skeletal muscle, liver, intestine, placenta, brain, and body homogenates) and foods (e.g., milk, corn grain, meat, and soybean meal).

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การศึกษาของสารอาหารโปรตีนและชีวเคมีต้องใช้วิธีการที่เชื่อถือได้สำหรับการวิเคราะห์ของกรดอะมิโน (AA) องค์ประกอบใน polypeptides ของเนื้อเยื่อสัตว์และอาหาร โปรตีนไฮโดรไลซ์โดย 6 M HCl (110 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 24 ชั่วโมง) 4.2 M NaOH (105 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 20 ชั่วโมง) หรือโปรตีเอส เทคนิคการวิเคราะห์ที่จำเป็นต้องมีประสิทธิภาพสูงของเหลว chromatography (HPLC) รวมถึงอนุพันธ์ก่อนคอลัมน์ที่มี 4 chloro-7-nitrobenzofurazan 9 fluorenyl methylchloroformate, phenylisothiocyanate เหม็น-2,3-dicarboxaldehyde 6 aminoquinolyl-N-hydroxysuccinimidyl คาร์บาเม, และ o-phthaldialdehyde (OPA) OPA ทำปฏิกิริยากับหลัก AA (ยกเว้น cysteine​​ หรือซีสตีน) ในการปรากฏตัวของ 2 mercaptoethanol หรือกรด 3 mercaptopropionic ในรูปแบบดึงเข้าหาเรืองแสงสูง OPA ยังทำปฏิกิริยากับ 4 อะมิโนบิวทานอ 1 และ 4 aminobutane-1,3-diol ผลิตจากการเกิดออกซิเดชันของโพรลีนและ 4-hydroxyproline ตามลำดับในการปรากฏตัวของคลอรา-T บวก borohydride โซเดียมที่ 60 ° C หรือ S-คาร์บอกซี-cysteine​​ เกิดขึ้นจาก cysteine​​ และกรด iodoacetic ที่ 25 ° C เรืองแสงของสัญญาซื้อขายล่วงหน้า OPA ที่จะถูกตรวจสอบและการกระตุ้นการปล่อยความยาวคลื่น 340 นาโนเมตรและ 455 ตามลำดับ ข้อ จำกัด ของการตรวจสอบ 50 fmol สำหรับ AA เทคนิคนี้มีข้อได้เปรียบดังต่อไปนี้ขั้นตอนที่ง่ายสำหรับการเตรียมความพร้อมของตัวอย่างสารเคมีและการแก้ปัญหาเฟสมือถือ อย่างรวดเร็วก่อก่อนคอลัมน์อนุพันธ์ OPA-AA และการแยกที่มีประสิทธิภาพของพวกเขาที่อุณหภูมิห้อง (เช่น 20-25 ° C); ความไวสูงของการตรวจสอบ; อัตโนมัติง่ายในเครื่อง HPLC ได้; ไม่กี่รบกวนปฏิกิริยาด้าน พื้นฐานที่มั่นคงสำหรับโคบูรณาการที่ถูกต้องของพื้นที่สูงสุด; และการฟื้นฟูอย่างรวดเร็วของการรักษาความปลอดภัยและคอลัมน์วิเคราะห์ ดังนั้นวิธีการ OPA ให้เครื่องมือที่มีประโยชน์ในการกำหนดองค์ประกอบ AA โปรตีนของเนื้อเยื่อสัตว์ (เช่นกล้ามเนื้อโครงร่าง, ตับ, ลำไส้รกสมองและ homogenates ร่างกาย) และอาหาร (เช่นนมข้าวข้าวโพดเนื้อสัตว์และถั่วเหลือง อาหาร)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การศึกษาทางโภชนาการโปรตีนและชีวเคมีเป็นวิธีที่เชื่อถือได้เพื่อการวิเคราะห์กรดอะมิโน ( AA ) องค์ประกอบในโปรตีนในเนื้อเยื่อสัตว์และอาหาร โปรตีนไฮโดรไลซ์ด้วย M HCl 6 ไหม ( 110  ° C 24 ไหม H ) 4.2 ไหม M NaOH ( 105  ° C 20 ไหม H ) หรือคุณค่าทางอาหารเทคนิคการวิเคราะห์ที่ใช้วิธีโครมาโทกราฟีของเหลวสมรรถนะสูง ( HPLC ) รวมกับกับคอลัมน์ก่อน 4-chloro-7-nitrobenzofurazan 9-fluorenyl methylchloroformate phenylisothiocyanate naphthalene-2,3-dicarboxaldehyde , , , , 6-aminoquinolyl-n-hydroxysuccinimidyl เมต และ o-phthaldialdehyde ( OPA )โอภาปฏิกิริยากับหลัก AA ( ยกเว้นกรดอะมิโนหรือซีสตีน ) ในการแสดงตนของอย่างเดียวหรือ 3-mercaptopropionic กรดเพื่อสร้างปุ่มตัวเลือกที่มีการเรืองแสง โอภา reacts กับ 4-amino-1-butanol 4-aminobutane-1,3-diol ผลิตจากปฏิกิริยาออกซิเดชัน และโพรลีนและ 4-hydroxyproline ตามลำดับ และในการแสดงตนของ chloramine-t บวกโซเดียมบอโรไฮไดรด์ที่ 60  ° Cหรือกับ s-carboxymethyl-cysteine ที่เกิดขึ้นจากกรดอะมิโน กรด และความสามารถในการเรืองแสงของอนุพันธ์ 25  ° C โอภาตรวจสอบกระตุ้นและการปล่อยที่ความยาวคลื่น 340 และ 455 รึเปล่า nm ตามลำดับ จำกัดการค้นหา 50 รึเปล่า fmol สำหรับ AA เทคนิคนี้มีข้อดีดังต่อไปนี้ : ขั้นตอนง่ายๆสำหรับการเตรียมตัวอย่าง สารเคมี และเฟสเคลื่อนที่ สารละลายอย่างรวดเร็วก่อนการก่อตัวของอนุพันธ์และคอลัมน์ opa-aa แยกที่มีประสิทธิภาพของพวกเขาที่อุณหภูมิห้อง ( เช่น 20 – 25  ° c ) ; ความไวสูงในการตรวจสอบ ; อัตโนมัติง่ายใน HPLC อุปกรณ์ น้อยรบกวนปฏิกิริยาด้าน พื้นฐานที่มั่นคงสำหรับการบูรณาการวิธีถูกต้องพื้นที่สูงสุด และการฟื้นฟูอย่างรวดเร็วของยาม และคอลัมน์วิเคราะห์ ดังนั้นที่ให้เครื่องมือที่มีประโยชน์เพื่อชาติ . วิธีการกำหนดองค์ประกอบในโปรตีนของ AA เนื้อเยื่อสัตว์ ( เช่น กล้ามเนื้อโครงกระดูก ตับ ไส้ รก สมอง และร่างกาย homogenates ) และอาหาร ( เช่น นมข้าวโพด ธัญพืช เนื้อสัตว์ และกากถั่วเหลือง )