PCR was performed in a Veriti 96-we

PCR was performed in a Veriti 96-well thermal cycler (Applied Biosystems®) for 30 cycles (denaturation for 1 min at 92 °C, annealing for 1 min at 56 °C, and extension for 90 s at 72 °C), with an initial step of 2 min at 96 °C and a final extension of 90 s at 72 °C. Amplicons were simultaneously digested with two restriction enzymes (DdeI and HinfI) as follows: 5 μl of each PCR product was cut with 5 units of each enzyme (New England Biolabs®, Inc., 10 U/μl) in 2.0 μl 10× buffer D, 0.2 μl of acetylated BSA (10 mg/ml) and 11.8 μl of H2O for 3 h at 37 °C. As negative control, PCR products were treated with H2O instead of enzymes. Restriction fragment patterns were analyzed on 2% agarose gel in 0.5 times Tris–acetate– EDTA (TAE) buffer and visualized using ethidium bromide and a BioDoc-It Imaging System (UVP, LLC; Upland, CA).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ทำ PCR ใน cycler Veriti 96 หลุมความร้อน (Applied Biosystems®) 30 รอบ (แปรสภาพ 1 นาทีที่ 92 ° C หลอม 1 นาทีที่ 56 ° C และส่วนขยายสำหรับ 90 s 72 ° c), เป็นขั้นตอนแรก 2 นาทีที่ 96 ° C และการขยายขั้นสุดท้ายของ 90 s ที่อุณหภูมิ 72 องศาเซลเซียส Amplicons ถูกพร้อมกันถูกย่อย ด้วยเอนไซม์จำกัดสอง (DdeI และ HinfI) เป็นดังนี้: 5 μl ของแต่ละผลิตภัณฑ์ PCR ถูกตัด ด้วยเอนไซม์แต่ละ 5 หน่วย (New England Biolabs®, Inc., 10 U/μl) ในบัฟเฟอร์× μl 10 2.0 D, μl 0.2 ของ acetylated ขอบีเอสเอ (10 mg/ml) และ μl 11.8 ของ H2O สำหรับ 3 ชั่วโมงที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียส เป็นการควบคุมเชิงลบ ผลิตภัณฑ์ PCR ถูกรักษา ด้วย H2O แทนเอนไซม์ รูปแบบส่วนข้อจำกัดถูกวิเคราะห์บน agarose 2% เจในบัฟเฟอร์ 0.5 ครั้งทริสเรทติ้ง – อะซิเตท – EDTA (เต้) สามารถดู และใช้โบรไมด์ ethidium และมัน BioDoc ภาพระบบ (UVP, LLC ไร่ CA)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

PCR ที่ได้ดำเนินการใน Veriti Cycler 96 หลุมความร้อน (ประยุกต์Biosystems®) 30 รอบ (denaturation เวลา 1 นาทีที่ 92 องศาเซลเซียสการอบเป็นเวลา 1 นาทีที่ 56 องศาเซลเซียสและการขยายเวลา 90 s ที่ 72 ° C) ด้วย เป็นขั้นตอนแรกของการ 2 นาทีที่ 96 องศาเซลเซียสและส่วนขยายสุดท้ายของ 90 s ที่ 72 ° C Amplicons ถูกย่อยสลายไปพร้อม ๆ กันกับสอง จำกัด เอนไซม์ (DdeI และ HinfI) เป็นดังนี้: 5 ไมโครลิตรของแต่ละผลิตภัณฑ์ PCR ถูกตัดด้วย 5 หน่วยของแต่ละเอนไซม์ (นิวอิงแลนด์Biolabs®, Inc 10 U / ไมโครลิตร) ใน 2.0 ไมโครลิตร 10 ×บัฟเฟอร์ D, 0.2 ไมโครลิตรของ acetylated BSA (10 mg / ml) และ 11.8 ไมโครลิตรของ H2O เป็นเวลา 3 ชั่วโมงที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียส เป็นตัวควบคุมเชิงลบผลิตภัณฑ์พีซีอาร์ได้รับการรักษาด้วย H2O แทนของเอนไซม์ รูปแบบการ จำกัด ชิ้นส่วนถูกนำมาวิเคราะห์ใน agarose gel ที่ 2% ใน 0.5 ครั้ง Tris-acetate- EDTA (TAE) buffer และมองเห็นการใช้โบรไมด์ ethidium และระบบ BioDoc มัน Imaging (UVP, LLC; ดอน CA)