2. Materials and methods2.1. Chemic

2. Materials and methods
2.1. Chemicals and test microorganisms
All the chemicals and solvents used in this present study were
of analytical grade procured locally. Clevenger apparatus used
for the isolation of essential oils was from Borosil®, India. The
Gram–negative bacterial strains such as Escherichia coli (E. coli),
Pseudomonas aeruginosa (P. aeruginosa), Salmonella typhimurium
(S. typhimurium) and Klebsilla pneumoniae (K. pneumoniae) and
Gram–positive bacterial strains such as Staphylococcus aureus (S.
aureus), Staphylococcus epidermidis (S. epidermidis), and Bacillus
cereus (B. cereus) were obtained from Department of Natural
Sciences, Oman Medical College, Sultanate of Oman.
2.2. Collection of plant material
The fresh O. basilicum plant material was collected in the month
of September from Seeb Nursery in the Muscat Governorate of
Sultanate of Oman. The plant was identified by the Pharmacognosy
Professor of Nizwa University and a voucher specimen was
deposited in the herbarium of Department of Pharmacy, Oman
Medical College, Oman, for future reference.
2.3. Isolation of essential oil
The aerial parts (stem and leaves) of O. basilicum Linn. were
separated from fresh plant material, washed under tap water for
clean, shaded dried and weighed. Two hundred gram of dried aerial
parts were subjected to hydrodistillation for 6 h by using Clevenger
apparatus to isolate volatile oil. The greenish yellow volatile oil (1.2
mL) was separated from aqueous layer, dried over anhydrous sodium
sulphate, filtered and stored at 4 ºC in a sealed dark brown bottle
prior to further analysis.
2.4. Gas chromatography–mass spectrometry (GC–MS) analysis
The isolated essential oil was analyzed on a Perkin Elmer Clarus
600 GC equipped with flame ionization detector and Rtx®-5MS
capillary column (30.00 m × 0.25 mm inner diameter × 0.25 μm film
thickness). The injection, mass transfer line and ion source were
set at 290 ºC, 260 ºC and 260°°C respectively. The oven temperature
was programmed from 40 ºC (held for 2 min) to 280°°C at a rate of
3°°C/min. Helium was used as carrier gas with a constant flow rate
of 1 mL/min. The injected volume of volatile oil was 1 μL with a
split ratio of 100:1. The mass spectra were recorded at an ionization
voltage of 70 ev in electron ionization mode and all data were
obtained by collecting the full scan mass spectra within the range of
40-500 (Figure 1).
100:1, 1 μL: dalia- oman medical college
Basil oil
, 06-Nov-2013 + 15:37:38
Scan El+
TIC
3.39e9
100
0
%
3.50
2.02 8.32
10.78
14.68
17.01
24.44
8.50 13.50 18.50 23.50 28.50 33.50 38.50 43.50 48.50 53.50 58.50 63.50 68.50 73.50
Time
(min)
Figure 1. A chromatogram of essential oil isolated from Omani basil.
2.5. Identification of volatile compounds
The volatile components were identified on the basis of GC
retention time on fused silica capillary column, by comparison
of their mass fragmentation pattern with literature reports and by
computer matching with standard spectra (Wiley Access Pak V7,
May 2003 and NIST2005 version 2.1.0).
2.6. Evaluation of antibacterial activity
The antibacterial activity of the O. basilicum essential oil
was evaluated against a range of Gram–positive (S. aureus, S.
epidermidis, B. cereus) and Gram–negative pathogenic bacteria
(E. coli, P. aeruginosa, S. typhimurium and K. pneumoniae).
Antibacterial activity was determined by using standard agar well
diffusion method and antimicrobial activity was compared with
that of the commercially available basil oil. Three wells of 6 mm
diameter were dug on each inoculated agar plate of a bacteria with
sterile cork borer and 10 μL of extracted basil oil (test), commercial
basil oil (standard for comparison) and paraffin oil (control) were
added to the wells. The plates were then incubated at 37 ºC for 24 h
following which the diameter of zone of inhibition (clear zone) was
measured in mm.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2. วัสดุและวิธีการ2.1. สารเคมีและจุลินทรีย์ทดสอบสารเคมีและหรือสารทำละลายที่ใช้ในการศึกษานี้มีทั้งหมดเกรดวิเคราะห์ค้นหาในท้องถิ่น ใช้เครื่อง Clevengerสำหรับแยกน้ำมันหอมระเหยได้จาก Borosil ® อินเดีย ที่สายพันธุ์แบคทีเรียกรัมลบเช่น Escherichia coli (E. coli),Pseudomonas aeruginosa (P. aeruginosa), ซัล typhimurium(S. typhimurium) และ Klebsilla pneumoniae (คุณ pneumoniae) และสายพันธุ์แบคทีเรียกรัมบวกเช่น Staphylococcus หมอเทศข้างลาย (S.หมอเทศข้างลาย), Staphylococcus epidermidis (S. epidermidis), และคัดcereus (เกิด cereus) ได้รับมาจากแผนกของธรรมชาติศาสตร์ วิทยาลัยแพทยศาสตร์โอมาน รัฐสุลต่านโอมาน2.2 การเก็บวัสดุโรงงานวัสดุพืชสดโอ basilicum ถูกรวบรวมในเดือนกันยายนจากเรือนเพาะชำบในรัฐมัสกัตของรัฐสุลต่านโอมาน โรงงานที่ระบุเภสัชเวทศาสตราจารย์มหาวิทยาลัยซวาและตัวอย่างสำคัญคือฝากในหอพรรณไม้ของภาควิชาเภสัชกรรม โอมานวิทยาลัยแพทยศาสตร์ โอมาน อ้างอิงในอนาคต2.3 การแยกน้ำมันหอมระเหยทางอากาศส่วน (ก้านและใบ) ของโอ basilicum งานผลิต มีแยกออกจากพืชสดวัสดุ ล้างใต้ก๊อกน้ำสะอาด เงาแห้ง และชั่งน้ำหนัก สองร้อยกรัมของขนมชั้นชิ้นส่วนถูกต้อง hydrodistillation สำหรับ 6 h โดย Clevengerเครื่องมือเพื่อแยกน้ำมันหอมระเหย โทนสีเหลืองน้ำมันหอมระเหย (1.2mL) ถูกแยกออกจากชั้นอควี แห้งมากกว่าไดโซเดียมซัลเฟต กรอง และเก็บไว้ที่ 4 ºC ในขวดสีน้ำตาลเข้มปิดผนึกก่อนที่จะวิเคราะห์ต่อไป2.4 การการวิเคราะห์ chromatography ก๊าซ – มวล spectrometry (GC – MS)น้ำมันหอมระเหยแยกถูกวิเคราะห์ในแบบเพอร์เอลเมอ Clarus600 GC พร้อมตรวจจับเปลวไฟ ionization และ Rtx ® 5MSคอลัมน์เส้นเลือดฝอย (30.00 เมตร × 0.25 มม.เส้นผ่าศูนย์กลางภายใน× 0.25 μm ฟิล์มความหนา) มีแหล่งรายการและไอออนมวลโอนฉีดตั้งที่ 290 ºC, 260 ºC และ 260° ° C ตามลำดับ อุณหภูมิเตาอบโปรแกรมจาก 40 ºC (จัดใน 2 นาที) ไป 280° ° C ในอัตราของใช้ 3° ° C/นาที ฮีเลียมเป็นก๊าซผู้ขนส่งมีอัตราการไหลคงของ 1 mL/นาที ปริมาณการฉีดของน้ำมันหอมระเหยถูก μL 1 มีการแบ่งอัตราส่วนของ 100:1 บันทึกที่การ ionization แรมสเป็คตรามวลแรง 70 ev ในโหมด ionization อิเล็กตรอนและข้อมูลทั้งหมดได้ได้ โดยการรวบรวมแรมสเป็คตราของมวลการสแกนแบบเต็มของ40-500 (1 รูป)100:1, 1 μL: วิทยาลัยแพทย์เลียโอมานน้ำมันโหระพา, 06-พ.ย.-2013 + 15:37:38สแกนเอล +รับผลิตกระป๋อง3.39e91000%3.502.02 8.3210.7814.6817.0124.448.50 13.50 18.50 23.50 28.50 33.50 38.50 43.50 48.50 53.50 58.50 63.50 68.50 73.50เวลา(นาที)รูปที่ 1 Chromatogram ของน้ำมันหอมระเหยที่แยกต่างหากจากใบกะเพราเรี2.5. รหัสของสารระเหยระบุส่วนประกอบระเหย โดย GCรักษาเวลาในคอลัมน์ รูพรุนของซิลิก้า fused โดยการเปรียบเทียบของเอกสารประกอบการรายงาน และโดยรูปแบบของการกระจายตัวของมวลตรงกับแรมสเป็คตรามาตรฐาน (Wiley เข้าปาก V7 คอมพิวเตอร์2003 พฤษภาคม และ NIST2005 รุ่น 2.1.0)2.6. การประเมินผลของกิจกรรมต้านเชื้อแบคทีเรียกิจกรรมต้านเชื้อแบคทีเรียของน้ำมันหอมระเหยโอ basilicumถูกประเมินกับช่วงของกรัมบวก (S. หมอเทศข้างลาย S.epidermidis, cereus เกิด) และแบคทีเรีย pathogenic กรัมลบ(E. coli, P. aeruginosa, S. typhimurium และคุณ pneumoniae)กำหนดกิจกรรมต้านเชื้อแบคทีเรีย โดยใช้ agar มาตรฐานดีกิจกรรมวิธีการและจุลินทรีย์แพร่ถูกเปรียบเทียบกับที่น้ำมันโหระพาใช้ได้ในเชิงพาณิชย์ บ่อสาม 6 มม.เส้นผ่าศูนย์กลางถูกขุดในแต่ละจาน inoculated agar ของแบคทีเรียด้วยคอร์กกอซ borer และ μL 10 ใบโหระพาแยกน้ำมัน (ทดสอบ), พาณิชย์น้ำมันโหระพา (มาตรฐานสำหรับเปรียบเทียบ) และน้ำมันพาราฟิน (ควบคุม)เพิ่มเข้าไปในบ่อ แผ่นได้แล้ว incubated ที่ 37 ºC ใน 24 ชมดังต่อไปนี้ซึ่งมีเส้นผ่าศูนย์กลางของโซนยับยั้ง (โซนชัดเจน)วัดเป็นมิลลิเมตร

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2. วัสดุและวิธีการ
2.1 สารเคมีและจุลินทรีย์ทดสอบสารเคมีและตัวทำละลายทั้งหมดที่ใช้ในการศึกษาครั้งนี้มีเกรดการวิเคราะห์จัดหาในประเทศ อุปกรณ์ Clevenger ใช้ในการแยกน้ำมันหอมระเหยจากBorosil®อินเดีย สายพันธุ์แบคทีเรียแกรมลบเช่น Escherichia coli (E. coli) เชื้อ Pseudomonas aeruginosa (พี aeruginosa) Salmonella typhimurium (typhimurium เอส) และ Klebsilla pneumoniae (K. pneumoniae) และสายพันธุ์ของเชื้อแบคทีเรียแกรมบวกเช่นStaphylococcus aureus ( S. aureus), Staphylococcus epidermidis (เอส epidermidis) และ Bacillus cereus (B. cereus) ที่ได้รับจากกรมธรรมชาติวิทยาศาสตร์โอมานวิทยาลัยแพทย์รัฐสุลต่านโอมาน. 2.2 คอลเลกชันของวัสดุพืชสดทุม basilicum วัสดุพืชที่ถูกเก็บรวบรวมในเดือนกันยายนจากSeeb เนอสเซอรี่ในมัสกัตอเรทของรัฐสุลต่านโอมาน พืชที่ถูกระบุโดยเภสัชเวทศาสตราจารย์ Nizwa มหาวิทยาลัยและตัวอย่างบัตรกำนัลถูกฝากไว้ในหอพรรณไม้ของภาควิชาเภสัชกรรมโอมานวิทยาลัยแพทย์โอมานเพื่ออ้างอิงในอนาคต. 2.3 การแยกน้ำมันหอมระเหยส่วนทางอากาศ (ลำต้นและใบ) ของทุม basilicum Linn ถูกแยกออกจากวัสดุจากพืชสดล้างภายใต้น้ำประปาสำหรับทำความสะอาดสีเทาแห้งและชั่งน้ำหนัก สองร้อยกรัมอากาศแห้งชิ้นส่วนถูกยัดเยียดให้กลั่นเป็นเวลา 6 ชั่วโมงโดยใช้ Clevenger อุปกรณ์เพื่อแยกน้ำมันหอมระเหย น้ำมันระเหยสีเหลืองแกมเขียว (1.2 มิลลิลิตร) ถูกแยกออกจากชั้นน้ำแห้งมากกว่าโซเดียมไฮดรัสซัลเฟตกรองและเก็บไว้ที่4 องศาเซลเซียสในขวดสีน้ำตาลเข้มที่ปิดสนิทก่อนที่จะมีการวิเคราะห์ต่อไป. 2.4 มวลสาร-แก๊ส chromatography (GC-MS) การวิเคราะห์น้ำมันหอมระเหยที่แยกวิเคราะห์ในPerkin Elmer Clarus 600 GC การติดตั้งเครื่องตรวจจับไอออนไนซ์เปลวไฟและRtx®-5MS คอลัมน์ฝอย (30.00 ม. ​​× 0.25 มิลลิเมตรเส้นผ่าศูนย์กลางภายใน× 0.25 ไมครอนฟิล์มหนา) . ฉีดสายการถ่ายเทมวลและแหล่งที่มาไอออนที่ถูกตั้งไว้ที่ 290 องศาเซลเซียส 260 องศาเซลเซียสและ 260 °° C ตามลำดับ อุณหภูมิเตาอบเป็นโปรแกรมจาก 40 องศาเซลเซียส (จัดขึ้นเป็นเวลา 2 นาที) 280 °° C ในอัตรา 3 °° C / นาที ฮีเลียมถูกใช้เป็นก๊าซที่มีอัตราการไหลคงที่1 มิลลิลิตร / นาที ปริมาณการฉีดน้ำมันหอมระเหย 1 ไมโครลิตรกับอัตราส่วนแบ่ง100: 1 สเปกตรัมมวลที่ถูกบันทึกไว้ในไอออไนซ์แรงดันไฟฟ้าของ 70 ในโหมด EV ไอออนไนซ์อิเล็กตรอนและข้อมูลทั้งหมดถูกที่ได้จากการเก็บรวบรวมสเปกตรัมมวลสแกนเต็มรูปแบบในช่วงของ40-500 (รูปที่ 1). 100: 1, 1 ไมโครลิตร: dalia- โอมาน วิทยาลัยแพทย์น้ำมันโหระพาที่06 พ.ย. 2013 15:37:38 + สแกน El + TIC 3.39e9 100 0% 3.50 2.02 8.32 10.78 14.68 17.01 24.44 8.50 13.50 18.50 23.50 28.50 33.50 38.50 43.50 48.50 53.50 58.50 63.50 68.50 73.50 เวลา(นาที) รูปที่ 1. chromatogram ของน้ำมันหอมระเหยที่แยกได้จากใบโหระพาโอมาน. 2.5 บัตรประจำตัวของสารระเหยส่วนประกอบระเหยที่ถูกระบุบนพื้นฐานของประชาคมโลกการเก็บรักษาเวลาในคอลัมน์ของเส้นเลือดฝอยซิลิกาหลอมละลายโดยเปรียบเทียบรูปแบบการกระจายตัวของมวลของพวกเขาที่มีการรายงานวรรณกรรมและการจับคู่เครื่องคอมพิวเตอร์ที่มีสเปกตรัมมาตรฐาน(Wiley เข้าถึงปาก V7, พฤษภาคม 2003 และรุ่น NIST2005 2.1.0.) 2.6 การประเมินผลของฤทธิ์ต้านแบคทีเรียกิจกรรมต้านเชื้อแบคทีเรียของ basilicum ทุมน้ำมันหอมระเหยที่ได้รับการประเมินเทียบกับช่วงของแกรมบวก(เอสเรียสเอสepidermidis บี cereus) และเชื้อแบคทีเรียก่อโรคแกรมลบ(เชื้อ E. coli, aeruginosa พี , typhimurium เอสและเค pneumoniae). กิจกรรมต้านเชื้อแบคทีเรียที่ถูกกำหนดโดยใช้มาตรฐานเดียวกับวุ้นวิธีการแพร่กระจายและฤทธิ์ต้านจุลชีพที่ถูกเมื่อเทียบกับที่ของน้ำมันโหระพาใช้ได้ในเชิงพาณิชย์ สามหลุม 6 มิลลิเมตรเส้นผ่าศูนย์กลางถูกขุดในแต่ละจานเลี้ยงเชื้อเชื้อแบคทีเรียที่มีหนอนเจาะก๊อกผ่านการฆ่าเชื้อและ10 ไมโครลิตรของน้ำมันโหระพาสกัด (ทดสอบ) การค้าน้ำมันโหระพา(มาตรฐานสำหรับการเปรียบเทียบ) และน้ำมันพาราฟิน (ควบคุม) ได้รับการบันทึกอยู่ในหลุม. แผ่นแล้วถูกบ่มที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 24 ชั่วโมงต่อไปนี้ซึ่งมีขนาดเส้นผ่าศูนย์กลางของโซนของการยับยั้ง(โซนที่ชัดเจน) ได้รับการวัดเป็นมิลลิเมตร

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2 . วัสดุและวิธีการ
2.1 . เคมีและจุลินทรีย์ทดสอบ
ทั้งสารเคมีและสารละลายที่ใช้ในการศึกษานี้คือ
ของอิตเทอร์เบียมจัดหาในประเทศ เคลวินเจอร์เครื่องมือ
สำหรับการแยกน้ำมันหอมระเหยจาก borosil ® , อินเดีย
กรัม - ลบแบคทีเรีย เช่น เชื้อ Escherichia coli ( E . coli )
( P . aeruginosa ) , Pseudomonas aeruginosa Salmonella Typhimurium
( Sสีชมพู ) และ klebsilla pneumoniae ( K . pneumoniae ) และ
กรัมบวกแบคทีเรีย ( เช่นเชื้อ Staphylococcus aureus ( S .
, Staphylococcus aureus ) อาหาร ( s อาหาร ) และ Bacillus cereus
( B . cereus ) ที่ได้รับจากกรมวิทยาศาสตร์
, วิทยาลัยแพทย์โอมาน โอมาน .
2.2 . คอลเลกชันของวัสดุพืชสด
Oวัสดุปลูกโหระพา รวบรวมข้อมูลในเดือน กันยายน จากสถานเลี้ยงเด็ก
ซีบในมัสกัตระบบไฟฟ้าของ
โอมาน . พืชที่ถูกระบุโดยเภสัชเวท
ศาสตราจารย์ของมหาวิทยาลัยและคูปองนิซวาชิ้นตัวอย่าง
ฝากในหอพรรณไม้ของภาควิชาเภสัชกรรม , โอมาน
วิทยาลัยการแพทย์ , โอมาน , สำหรับการอ้างอิงในอนาคต .
2.3 การแยก
น้ำมันหอมระเหยส่วนทางอากาศ ( ลำต้นและใบ ) o . โหระพา Linn . ถูก
แยกจากวัสดุพืชสด , ล้างภายใต้น้ำสำหรับ
สะอาดสีเทาแห้งและชั่งน้ำหนัก สองร้อยกรัม ส่วนทางอากาศ
แห้งได้ภายใต้วิธีการต้มกลั่นสำหรับ 6 ชั่วโมง โดยใช้เครื่องแยกน้ำมันเคลวินเจอร์
. ส่วนสีเหลืองสีเขียวน้ํามันหอมระเหย ( 1.2
มิลลิลิตร ) แยกจากน้ำชั้นแห้งอันไฮดรัสโซเดียม
ซัลเฟต , กรองและเก็บไว้ที่ 4 องศาเซลเซียส ในºปิดผนึกขวดสีน้ำตาลเข้มก่อนที่จะวิเคราะห์ต่อไป
.
2.4 . แก๊สโครมาโทกราฟี - แมสสเปกโทรเมทรี ( GC ( MS ) การวิเคราะห์
แยกน้ำมันหอมระเหย วิเคราะห์บนเพอร์กินเอลเมอร์ clarus
600 GC พร้อมกับเครื่องตรวจจับไอเปลวเพลิงและ RTX ® - คอลัมน์ 5ms
หลอดเลือดฝอย ( 30.00 เมตรขนาดเส้นผ่านศูนย์กลาง 0.25 มม. ×× 0.25 μเมตรความหนาของฟิล์ม
)ฉีด , สายการถ่ายเทมวลและแหล่งกำเนิดไอออนถูก
ตั้ง 290 º C , 260 º 260 °° C และ C ตามลำดับ อุณหภูมิเตาอบ
เป็นโปรแกรมจาก 40 º C ( รอ 2 นาที ) 280 °° C ที่อัตราการ°°
3 C / นาที ฮีเลียมถูกใช้เป็นแก๊สตัวพา ด้วยอัตราการไหลคงที่
1 มิลลิลิตร / นาที ปริมาณการฉีดของน้ำมันระเหย 1 μ L กับ
แบ่งอัตราส่วน 100 : 1 . มวลสเปกตรัมที่ได้ถูกบันทึกไว้ในไอออไนเซชัน
แรงดันไฟฟ้าในโหมด EV ไอออนไนซ์อิเล็กตรอนของ 70 และข้อมูลทั้งหมดที่ได้จากการรวบรวมแบบสแกน
มวลสเปกตรัมในช่วงของ
40-500 ( รูปที่ 1 ) .
100 : 1 1 μ L : ดาเลีย - วิทยาลัยแพทย์โอมาน
น้ำมันโหระพา 06-nov-2013 15:37:38




3.39e9 สแกน El Tic 100
0
%



คิดสัดส่วน 3.50 2.02 14.68


24.44 17.01 8.50 13.50 18.50 23.50 570.00 33.50 38.50 76.32 48.50 53.50 58.50 63.50 68.50 ตรงใจ


เวลา ( นาที ) 1 รูปเป็น chromatogram ของน้ำมันหอมระเหยที่แยกจากโอมาน ใบโหระพา
2.5 ตัวระเหย
ส่วนประกอบระเหยถูกระบุบนพื้นฐานของเวลาใน GC
ในคอลัมน์ซิลิกาผสมหลอดเลือดฝอยโดยการเปรียบเทียบมวลของรูปแบบของพวกเขาด้วย

รายงานวรรณกรรมและคอมพิวเตอร์ที่ตรงกันกับสเปกตรัมมาตรฐาน ( นิ่งเข้าปาก v7
พฤษภาคม 2003 และ nist2005 รุ่น 2.1.0 ) .
2.6การประเมินฤทธิ์ต้านเชื้อแบคทีเรีย ฤทธิ์ต้านแบคทีเรียของ
O
โหระพาน้ำมันหอมระเหยจะถูกประเมินเทียบกับช่วงของกรัม - บวก ( S . aureus , S .
: อาหาร , B . cereus ) และกรัม - ลบเชื้อโรคแบคทีเรีย
( E . coli , P . aeruginosa , S . typhimurium และ K . pneumoniae ) .
ฤทธิ์ต้านเชื้อแบคทีเรียถูกกำหนดโดยการใช้วุ้น มาตรฐานดี
กิจกรรมและวิธีการแพร่เชื้อเมื่อเทียบกับ
ของน้ำมันโหระพาสามารถใช้ได้ในเชิงพาณิชย์ สามหลุมของเส้นผ่าศูนย์กลาง 6 มม.
ถูกขุดในแต่ละเชื้อ agar plate ของแบคทีเรียกับ
เจาะจุกปลอดเชื้อและ 10 μผมดึงน้ำมันโหระพา ( ทดสอบ ) , พาณิชย์
น้ำมันโหระพา ( มาตรฐานสำหรับเปรียบเทียบ ) และน้ำมันพาราฟิน ( กลุ่มควบคุม )
เพิ่มในเวลส์จาน แล้วบ่มที่ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 24 ชั่วโมงº
ต่อไปนี้ที่เส้นผ่าศูนย์กลางของโซนของการยับยั้ง ( เคลียร์โซน ) คือ
วัดในมิลลิเมตร