2.3. Reverse-transcription PCRThe i

2.3. Reverse-transcription PCR
The iScript Select cDNA Synthesis kit protocol (BIO-RAD, Hercules,
CA, USA) was used to synthesize cDNA in a total reaction volume of
10 μl. The reaction mixture of the iScript selected cDNA synthesis kit
was prepared from 1 μl of total RNA (1 μg/μl), 2 μl of 5× iScript select reaction
mix, 0.25 μl of CMNV-R primer (10 μM), 1 μl of GSP enhancer solution,
0.5 μl of iScript reverse transcriptase, and 5.25 μl of nuclease-free
water. To perform RT-PCR, the RNA sample was activated at 42 °C for
30 min and then incubated at 85 °C for 5 min to inactivate the reverse
transcriptase. The cDNA product was further amplified by real-time
PCR for CMNV detection.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.3. กลับถอด PCRCDNA iScript เลือกสังเคราะห์ชุดโพรโทคอล (BIO-ล้อ ดาวใช้ในการสังเคราะห์ cDNA ในปฏิกิริยาทั้งหมดระดับ CA, USA)10 μl ส่วนผสมของปฏิกิริยาของ iScript การเลือกชุดการสังเคราะห์ cDNAจัดทำจาก μl 1 ของ RNA ทั้งหมด (1 μ g μ l), μl 2 ของ 5 × iScript เลือกปฏิกิริยาผสม 0.25 μl CMNV R พื้น (10 ไมครอน), μl 1 ของ GSP เพิ่มโซลูชันΜl 0.5 ของ iScript ปเทส และ μl ขนาด 5.25 ของฟรี nucleaseน้ำ การทำ RT-PCR เรียกใช้ตัวอย่าง RNA ที่ 42 ° C สำหรับ30 นาที และได้รับการกกแล้ว ที่ 85 ° C เป็นเวลา 5 นาทีเพื่อปิดการทำงานย้อนกลับtranscriptase ผลิตภัณฑ์ cDNA ถูกขยายเพิ่มเติม โดยแบบเรียลไทม์PCR สำหรับตรวจจับ CMNV

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.3 ย้อนกลับถอดความ PCR
iScript เลือกสังเคราะห์ cDNA ชุด Protocol (BIO-RAD, Hercules,
CA, USA) ถูกนำมาใช้ในการสังเคราะห์ยีนในปริมาณรวมของปฏิกิริยา
10 ไมโครลิตร ปฏิกิริยาส่วนผสมของ iScript เลือกชุดการสังเคราะห์ cDNA
ถูกจัดทำขึ้นตั้งแต่วันที่ 1 ไมโครลิตรของ RNA รวม (1 ไมโครกรัม / ไมโครลิตร) 2 ไมโครลิตร 5 × iScript เลือกปฏิกิริยา
ผสม, 0.25 ไมโครลิตรของ CMNV-R ไพรเมอร์ (10 ไมครอน) 1 ไมโครลิตรของ วิธีการแก้ปัญหาเพิ่ม GSP,
0.5 ไมโครลิตรของ iScript transcriptase ย้อนกลับและ 5.25 ไมโครลิตรของ Nuclease ฟรี
น้ำ เพื่อดำเนินการ RT-PCR ตัวอย่าง RNA ถูกเปิดใช้งานที่ 42 องศาเซลเซียสเป็นเวลา
30 นาทีและจากนั้นบ่มที่อุณหภูมิ 85 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 5 นาทีเพื่อยับยั้งย้อนกลับ
transcriptase ผลิตภัณฑ์ยีนถูกขยายต่อไปโดยแบบ real-time
PCR ในการตรวจหา CMNV

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.3 ถอดความโดยย้อนกลับการ iscript เลือกยีนสังเคราะห์ชุดโพรโทคอล ( Bio-rad , Hercules ,แคลิฟอร์เนีย สหรัฐอเมริกา ) ที่ใช้ในปฏิกิริยาสังเคราะห์ cDNA รวม ปริมาณของ10 μ . ปฏิกิริยาผสมของ iscript เลือกชุดการสังเคราะห์ดีเอ็นเอเตรียมได้จาก 1 μ L ของ RNA ทั้งหมด ( 1 μกรัม / μ L ) 2 μ L 5 × iscript เลือกปฏิกิริยาผสม , 0.25 μ l cmnv-r รองพื้น ( 10 μ M ) 1 μผมของโซลูชั่น GSP Enhancer ,μ 0.5 ลิตร iscript reverse transcriptase และ 5.25 μลิตรนิวเคลียสฟรีน้ำ เพื่อดำเนินการต่อ , อาร์เอ็นเอตัวอย่างถูกเปิดใช้งานอยู่ที่ 42 ° C สำหรับ30 นาทีและบ่มที่อุณหภูมิ 85 องศา C เป็นเวลา 5 นาที เพื่อยับยั้งย้อนกลับอาการ . ผลิตภัณฑ์วิธีเพิ่มเติมโดยขยายแบบเรียลไทม์PCR เพื่อตรวจหา cmnv .