2.7. UHPLC/MS/MS analysis
1290 Infinity series ultra high performance liquid chromatograph
coupled to 6460 triple quadrupole spectrometer
(Agilent Technologies, Santa Clara CA, USA) was employed for D2
and ergosterol analyses. The UHPLC system consisted of a binary
pump, an autosampler, a thermostat and a DAD detector. The spectrometer
was equipped with a Jet Stream technology ion source.
The UHPLC/MS/MS used is housed at Laboratory of Separation
and Spectroscopic Method Applications, Center for Interdisciplinary
Research, The John Paul II Catholic University of Lublin.
Chromatographic separation was performed on Zorbax Plus C18
analytical column, 2.1 100 mm, 1.8 lm particle size (Agilent
Technologies, Santa Clara CA, USA) at 30 C. LC–MS grade methanol
was used as mobile phase, flow rate 0.3 mL min1, analysis time
5 min. Injection volume was 1 lL. UV-signal was registered at
264 nm. The electrospray source was operated in positive ion
mode; fragmentor was set at 80V, gas temperature 325 C, gas flow
8 L min1, nebulizer gas 35 psi, sheath gas temperature 250 C,
sheath gas flow 11 L min1, capillary voltage 3500 V, nozzle voltage
500V. Ion acquisition was carried out in the multiple reaction
monitoring (MRM) mode. For vitamin D2 and ergosterol transitions
of ions of m/z 397.3 to ion of m/z 271.3 (collision energy, CE 10 eV),
124.9 (CE 10 eV) and 69.1 (CE 30 eV) were monitored. For vitamin
D3, used as an internal standard, transitions of ions of m/z 385.0 to
259.1 (CE 10 eV) and 159.1 (CE 30 eV) were monitored. Retention
times, based on MS-signal, were 3.2, 3.3 and 3.8 for vitamin D2,
D3 and ergosterol, respectively. Vitamin D2 and ergosterol were
baseline separated. Quantification of vitamin D2 was carried out
using MS-signal to ensure the high sensitivity, and for ergosterol
UV-signal was used to ensure the calibration linearity. Vitamin
D2 detection limit (LOD) was 1.34 lg g1, the lower limit of quantification
(LLOQ) 5 lg g1, and the extraction recovery 92.4%. For
ergosterol the method LOD was 0.15 mg g1, the LLOQ 1 mg g1,
and the recovery 89.6%. Agilent Mass Hunter software version
B.04.00 was used for data acquisition, instrument control and data
analysis.
2.8. Statistical analysis
Vitamin D2 and ergosterol concentrations were expressed as
means ± SD (standard deviation, n = 3). The results were statistically
analyzed by analysis of variance (ANOVA), and the means
were compared using Tukey test with p = 0.05 using STATISTICA
software (StatSoft, Cracow, Poland).
3. Results and discussion
3.1. Stability of vitamin D2 in hot-air dried mushrooms
The results regarding changes in the content of vitamin D2 in
dried mushroom are presented in Table 1. The fruit bodies of
mushrooms after UVB irradiation for 30 min. were subjected to
convection drying. The analysis of ergocalciferol content in nonirradiated
dried mushrooms showed that cultivated mushrooms
were totally devoid of vitamin D2 (data not show in Table 1). The
most probable reason for lack of ergocalciferol in cultivated mushrooms
is that they are cultivated and harvested in darkness or with
artificial light. In fresh fruit bodies of mushrooms immediately
after UVB irradiation vitamin D2 content was found to be
56.60 lg/g dry matter in the case of oyster and 29.33 lg/g dw in
shiitake, and fresh white button mushrooms were characterized
by the lowest content of the analyzed compound at the level of
13.10 lg/g dw despite the fact that it had the highest content of
vitamin D2 precursor – ergosterol (Table 4). The difference
2.7 UHPLC / MS / MS วิเคราะห์
1290 อินฟินิตี้ชุดพิเศษที่มีประสิทธิภาพสูง chromatograph ของเหลว
คู่กับ 6460 สเปกโตรมิเตอร์ quadrupole สาม
(Agilent Technologies, ซานตาคลารา CA, USA) ถูกจ้างสำหรับ D2
และการวิเคราะห์ ergosterol ระบบ UHPLC ประกอบด้วยไบนารี
ปั๊มอัตโนมัติสามารถเทอร์โมและเครื่องตรวจจับ DAD สเปกโตรมิเตอร์
เป็นอุปกรณ์ที่มีแหล่งที่มาของเทคโนโลยีไอออนเจ็ตสตรีม.
UHPLC / MS / MS ที่ใช้เป็นที่ตั้งของห้องปฏิบัติการการแยก
และการประยุกต์ใช้วิธีสเปกโทรสโก, ศูนย์สหวิทยาการ
วิจัยจอห์นปอลที่สองมหาวิทยาลัยคาทอลิกของริน.
โครมาแยกกำลังดำเนินการ Zorbax พลัส C18
คอลัมน์วิเคราะห์ 2.1? 100 มิลลิเมตร 1.8 LM ขนาดอนุภาค (Agilent
Technologies, ซานตาคลารา CA, USA) วันที่ 30 องศาเซลเซียส LC-MS เมทานอลเกรด
ถูกใช้เป็นเฟสเคลื่อนที่อัตราการไหล 0.3 มลนาที 1 เวลาวิเคราะห์
5 นาที ปริมาณการฉีด 1 LL UV-สัญญาณได้รับการจดทะเบียนที่
264 นาโนเมตร แหล่งที่มา electrospray ได้รับการดำเนินการในไอออนบวก
ในโหมด fragmentor ตั้งอยู่ที่ 80V อุณหภูมิก๊าซ 325? C, การไหลของก๊าซ
8 นาที L? 1 nebulizer ก๊าซ 35 ปอนด์ต่อตารางนิ้วอุณหภูมิก๊าซปลอก 250? C,
ปลอกไหลของก๊าซ 11 L นาที 1, แรงดันของเส้นเลือดฝอย 3500 V, หัวฉีดแรงดันไฟฟ้า
500V การเข้าซื้อกิจการไอออนได้ดำเนินการในการเกิดปฏิกิริยาหลาย
โหมดการตรวจสอบ (MRM) สำหรับวิตามิน D2 และ ergosterol เปลี่ยน
ของไอออนของ M / z 397.3 เพื่อไอออน M / z 271.3 (พลังงานชน, CE 10 eV)
124.9 (CE 10 EV) และ 69.1 (CE 30 EV) ถูกตรวจสอบ สำหรับวิตามิน
D3 ใช้เป็นมาตรฐานภายในช่วงการเปลี่ยนของไอออนของ M / z ที่จะ 385,0
259.1 (CE 10 EV) และ 159.1 (CE 30 EV) ถูกตรวจสอบ การเก็บรักษา
ครั้งขึ้นอยู่กับ MS-สัญญาณ 3.2, 3.3 และ 3.8 สำหรับวิตามิน D2,
D3 และ ergosterol ตามลำดับ D2 วิตามินและ ergosterol ถูก
พื้นฐานแยกออกจากกัน ปริมาณของวิตามิน D2 ได้ดำเนินการ
โดยใช้ MS-สัญญาณเพื่อให้แน่ใจว่ามีความไวสูงและ ergosterol
UV-สัญญาณถูกนำมาใช้เพื่อให้แน่ใจว่าการสอบเทียบเชิงเส้น วิตามิน
ตรวจสอบวงเงิน D2 (LOD) เป็น 1.34 LG G? 1 ขีด จำกัด ล่างของปริมาณ
(LLOQ) 5 LG G? ที่ 1 และการฟื้นตัวของการสกัด 92.4% สำหรับ
ergosterol วิธีล็อดเป็น 0.15 มิลลิกรัมต่อกรัม? 1, LLOQ 1 มิลลิกรัมกรัม 1,
และการกู้คืน 89.6% Agilent มวลฮันเตอร์เวอร์ชั่นของซอฟต์แวร์
B.04.00 ถูกนำมาใช้สำหรับการเก็บข้อมูลการควบคุมเครื่องมือและข้อมูล
การวิเคราะห์.
2.8 การวิเคราะห์ทางสถิติ
D2 วิตามินและ ergosterol ความเข้มข้นแสดงเป็น
วิธี± SD (ความเบี่ยงเบนมาตรฐาน, N = 3) ผลการวิจัยทางสถิติ
วิเคราะห์โดยการวิเคราะห์ความแปรปรวน (ANOVA) และวิธีการที่
ถูกเมื่อเทียบกับการใช้การทดสอบ Tukey กับ p = 0.05 STATISTICA ใช้
ซอฟแวร์ (StatSoft คูฟ, โปแลนด์).
3 ผลการค้นหาและการอภิปราย
3.1 ความมั่นคงของ D2 วิตามินในอากาศร้อนเห็ดแห้ง
ผลเกี่ยวกับการเปลี่ยนแปลงในเนื้อหาของวิตามิน D2 ใน
เห็ดแห้งถูกแสดงไว้ในตารางที่ 1 ผลไม้ร่างของ
เห็ดหลังการฉายรังสี UVB เป็นเวลา 30 นาที ถูกยัดเยียดให้
การอบแห้งการพาความร้อน การวิเคราะห์เนื้อหา ergocalciferol ใน nonirradiated
เห็ดแห้งพบว่าเห็ดที่ปลูก
ได้ทั้งหมดไร้ D2 วิตามิน (ข้อมูลไม่แสดงในตารางที่ 1)
เหตุผลน่าจะเป็นที่สุดสำหรับการขาด ergocalciferol ในเห็ดที่ปลูก
คือว่าพวกเขาจะปลูกและเก็บเกี่ยวในความมืดหรือ
แสงประดิษฐ์ ในร่างกายของผลไม้สดของเห็ดทันที
หลังจาก UVB ฉายรังสีปริมาณวิตามิน D2 ถูกพบว่าเป็น
56.60 LG / กรัมน้ำหนักแห้งในกรณีของหอยนางรมและ 29.33 LG / g DW ใน
เห็ดหอมสดและเห็ดปุ่มสีขาวมีลักษณะ
โดยเนื้อหาที่ต่ำสุดของ วิเคราะห์สารประกอบที่ระดับ
13.10 LG / g DW แม้จะมีข้อเท็จจริงที่ว่ามันมีปริมาณสูงสุดของ
D2 วิตามินสารตั้งต้น - ergosterol (ตารางที่ 4) ความแตกต่าง
การแปล กรุณารอสักครู่..

2.7 . การวิเคราะห์ uhplc / MS / MS- ประสิทธิภาพสูงของเหลวโครมาโทกราฟีแบบอัลตร้า อินฟินิตี้คู่กับ 6460 สามสี่ขั้วสเปคโตรมิเตอร์( Agilent Technologies , ซานตาคลารา แคลิฟอร์เนีย สหรัฐอเมริกา ) คือใช้ D2และการวิเคราะห์ข้อมูลโกสเทอรอล . ระบบ uhplc ประกอบด้วยแบบไบนารีปั๊ม , autosampler , เทอร์โมและพ่อ เครื่องตรวจจับ สเปกโตรมิเตอร์เป็นอุปกรณ์เจ็ทสตรีมเทคโนโลยีอิออนแหล่งที่มาการ uhplc / MS / MS ที่ใช้ตั้งอยู่ที่ห้องปฏิบัติการของการแยกและการประยุกต์ใช้วิธีทาง ศูนย์สหวิทยาการงานวิจัย , จอห์น ปอล ที่ 2 มหาวิทยาลัยคาทอลิกของ Lublin .เมื่อมีการแยก c18 zorbax พลัสวิเคราะห์คอลัมน์ 2.1 100 mm 1.8 LM ขนาดอนุภาค ( เลนต์เทคโนโลยี , ซานตาคลาราแคลิฟอร์เนีย สหรัฐอเมริกา ) ที่ 30 องศาเซลเซียสและเกรด LC MS เมทานอลใช้เฟสเคลื่อนที่ 0.3 มิลลิลิตร อัตราการไหล min1 เวลาการวิเคราะห์5 นาที ฉีดปริมาณ 1 จะ สัญญาณ UV คือจดทะเบียนที่264 nm . โดยวิธีพ่นละอองไฟฟ้าที่มาดำเนินการในประจุบวกโหมด ; fragmentor ไว้ที่ 80v อุณหภูมิก๊าซ 325 C อัตราการไหลของแก๊สผม min1 , nebulizer gas 35 psi ปลอกแก๊สอุณหภูมิ 250 Cปลอกแก๊สไหล 11 ผม min1 หลอดเลือดฝอยแรงดันไฟฟ้า V แรงดันหัวฉีด 3500 ,500V . ซื้อไอออนออกมาหลายปฏิกิริยาการตรวจสอบ ( mrm ) โหมด สำหรับวิตามิน D2 และเปลี่ยนโกสเทอรอลไอออนของ M / Z 397.3 กับไอออนของ M / Z 271.3 ( พลังงานการชน CE 10 EV )124.9 ( CE 10 EV ) และ CE ( 30 EV ) โดยการตรวจสอบ สำหรับวิตามินD3 ใช้เป็นมาตรฐานภายใน การเปลี่ยนของไอออนของ M / Z 385.0 เพื่อ259.1 ( CE 10 EV ) และ 159.1 ( CE 30 ev ) การติดตาม คงอยู่ครั้ง ขึ้นอยู่กับสัญญาณ MS , 3.2 , 3.3 และ 3.5 สำหรับวิตามิน D2 ,D3 และโกสเทอรอล ตามลำดับ D2 วิตามินและมีโกสเทอรอลก่อนแยกจากกัน ปริมาณของวิตามิน D2 ถูกออกใช้ MS สัญญาณเพื่อให้แน่ใจความไวสูง และโกสเทอรอลยูวีที่ใช้เพื่อให้แน่ใจว่าสัญญาณการเชิงเส้น . วิตามินD2 ขีดจำกัด ( LOD ) คือ 1.34 LG ต่ำกว่าขีดจำกัดของปริมาณ( lloq ) 5 LG G1 และการกู้คืนสกัดร้อยละ 92.4 . สำหรับโกสเทอรอลวิธีลอดเฉลี่ย 0.15 G1 มิลลิกรัม , lloq G1 1 มิลลิกรัม ,และการกู้คืนว่า % ด้านมวลนักล่ารุ่นของซอฟต์แวร์b.04.00 ถูกใช้สำหรับการซื้อข้อมูลและข้อมูลการควบคุมเครื่องมือการวิเคราะห์2.8 . สถิติที่ใช้ในการวิเคราะห์ข้อมูลวิตามิน D2 และความเข้มข้นที่แสดงเป็นโกสเทอรอลหมายถึง± SD ( ส่วนเบี่ยงเบนมาตรฐาน , n = 3 ) ผลการวิจัยพบว่าวิเคราะห์ข้อมูลโดยการวิเคราะห์ความแปรปรวน ( ANOVA ) และวิธีการการฝึกทดสอบเปรียบเทียบกับ P = 0.05 โดยใช้ statistica( StatSoft Cracow , ซอฟต์แวร์ , โปแลนด์ )3 . ผลและการอภิปราย3.1 . ความคงตัวของวิตามิน D2 ในอากาศร้อนแห้งเห็ดผลเกี่ยวกับการเปลี่ยนแปลงในเนื้อหาของวิตามิน D2 ในเห็ดหอมแห้งจะถูกนำเสนอในตารางที่ 1 ผลไม้ ร่างกายของเห็ดหลังจากการฉายรังสี UVB 30 นาทีภายใต้แบบแห้ง การวิเคราะห์ปริมาณ nonirradiated โกแคลซิเฟอรอลเห็ดแห้ง พบว่า การปลูกเห็ดสมบูรณ์ปราศจากวิตามิน D2 ( ข้อมูลไม่แสดงในตารางที่ 1 ) ที่เหตุผลที่น่าจะเป็นไปได้มากที่สุด เพราะขาดโกแคลซิเฟอรอลในการเพาะปลูกเห็ดคือ ว่า พวกเขามีการเพาะปลูกและเก็บเกี่ยวในที่มืด หรือแสงประดิษฐ์ ในผลไม้สด เนื้อเห็ดทันทีหลังจากการฉายรังสี UVB วิตามิน D2 เนื้อหาพบว่าเป็น56.60 LG / กรัมน้ำหนักแห้ง ในกรณีของหอยนางรมและ 29.33 LG / DW ในกรัมเห็ดหอมสดและเห็ดปุ่มสีขาวมีลักษณะโดยเนื้อหาต่ำสุดของวิเคราะห์สารประกอบในระดับของ13.10 บาท / กรัม แห้งแม้จะมีข้อเท็จจริงที่ว่ามันมีเนื้อหามากที่สุดสารตั้งต้นวิตามิน D2 และโกสเทอรอล ( ตารางที่ 4 ) ความแตกต่าง
การแปล กรุณารอสักครู่..
