Colletotrichum gloeosporioides,2. M

Colletotrichum gloeosporioides,


2. Materials and methods
2.1. Microorganisms
C. gloeosporioides accession 36326 was provided by the Agricultural Culture Collection of China.


The pure culture isolate was grown on potato dextrose agar (PDA) at 28 _C for up to 7 days prior to use. Bacterial strains were obtained from the rhizosphere soil associated with the Shandong YingYangYuan Food Technology Co. Ltd., Jinan, China. For use in experiments, the strains were grown on nutrient agar (NA) incubated at 37 _C for 1–2 days. A suspension was created by gently scraping the bacterial lawn from NA and diluting with water to approximately 106 cfu mL_1, as assessed with McFarland Turbidity Standards.

2.2. Screening for bacteria producing volatile antimicrobials
All of the bacteria isolated from soil were tested for antagonistic activity in two-compartment plastic plates (Kai et al., 2007). For the fumigation assay against C. gloeosporioides, the PDA medium was poured into one side of the plates (92 _ 16 mm; Sarstedt AG, Nürnbrecht, Germany) and the NA medium was poured into the opposing sector. Each isolated bacteria (50 lL; 1 _ 106 cfu mL_1) was innoculated on the NA medium side of the plate and incubated for 1 day at 37 _C. Subsequently, an agar plug (U 5 mm) of C. gloeosporioides was placed on the PDA sector. Sterile distilled water was used as the control factor instead of the isolated bacterial. The plates were sealed with parafilm, incubated for 5 days at 28 _C and the diameter of C. gloeosporioides expansion was measured. Each experiment was performed with three replications and the experiment was repeated three times.

2.3. In vivo tests of disease control by volatile producing bacteria
Freshly harvested, mature and healthy mangos with approximate size and color (_30 g per fruit, _4 cm across) were used in this experiment. The fruits were free from visible defects and rot. Before each trial, the mangos were washed with water and their surface sterilized in 2% sodium hypochlorite for 10 s, then rinsed under running sterile water for 1 min and air-dried. Each fruit was wounded with a 5 mm diameter hole-puncher and injected with 5 mm diameter mycelia plugs of C. gloeosporioides or 50 lL C. gloeosporioides conidial suspension (105 conidia mL_1) in the wound area. To study the antagonistic activity of volatiles on mycelia growth or conidial germination, ten-inoculated fruits were
arranged in a 6.5 L container as one replicate of each antagonist strain. Then, 20 lL suspensions of the presumptive bacterial antagonists (1 _ 106 cfu mL_1) were inoculated separately on NA for 24 h at 37 _C. Also, six cultures were placed in the container with no direct contact with the mangos. For the control groups, sterile water of the same volume replaced the antagonist cultures. After 7 days at 25 _C, the diameters of decayed spots were measured and the lesion area was calculated to contrast treatment effects and antagonistic activity. Three replications of each treatment were performed and the experiment was repeated three times.

2.4. Taxonomic characterization of antagonistic isolates TB09 and
TB072
The isolated bacteria with presumptive volatile antifungal activity were identified based on morphological phenotype and 16S rDNA sequence analysis. The sequences for the primers are 27F: (50-AGAGTTTGATCCTGGTCAGAACGCT-30) and 1492R: (50-TACGGCTACCT TGTTACGACTTCACCCC-30). Bacterial DNA was isolated from each strain using the established CTAB method as described in Jin et al. (2011). The resulting PCR products were purified and used directly for sequencing (Invitrogen, Shanghai, China). Homology search comparisons were carried out using the database available at NCBI BLAST (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/).

2.5. Analysis of volatile compounds produced by the antagonistic
bacteria
20 lL suspensions of the presumptive bacterial antagonists (1 _ 106 cfu mL_1) were inoculated separately on NA in sample vials. Volatiles from the Bacillus strains were collected and analyzed after 7 or 14 days of incubation. The NA medium without the antagonistic bacteria was set up as a control. The volatiles were trapped by the solid phase micro-extraction syringe (SPME) (Supelco Inc., PA-USA). SPME fibers coated with 65 lm (PDMS/DVB) was used.
Adsorption was allowed to continue for 45 min at room temperature. After that, samples were immediately analyzed by
GC–MS (GC/MS-QP2010 Plus, Shimadzu Co., Kyoto, Japan). The injector was operated in split-less mode for all chromatographic runs, and helium gas was used as the carrier. The injector temperature was kept at 250 _C and the detector at 280 _C. The oven temperature was programmed as follows: 40 _C for 5 min then increased to 250 _C at a speed of 20 _C min_1. Mass spectra data of the volatile compounds were compared with data in the NIST08 Mass Spectral Library (Software Version2.0).

2.6. Assay of identified volatile compounds on mycelia growth in vitro
Different amounts of individual volatile compounds (technical grade) were used to study the effect on radial growth of hyphae. An agar plug (U 5 mm) was placed on the PDA and a Standard amount of individual volatile compounds were added to another plate. Then the two lidless plates were sealed with parafilm. Equivalent amounts of sterile distilled water were used as the control. After 7 days incubation at 28 _C, the colony diameter was assessed. For treatments in which the C. gloeosporioides agar plug was completely inhibited, the original plug was transferred to the fresh PDA in the absence of volatiles to assess whether the inhibition was fungistatic or fungicidal. Following an additional five days on fresh media the diameter of outgrowth was measured. Each experiment was performed in three replications and the experiment was repeated three times.

2.7. Antifungal assay of artificial mixture of identified volatilecompounds
A constructed mixture was made by using authentic standard chemicals based on the volatile profile determined from live cultures. The proportion of each positively identified compound was calculated from the relative peak areas (2-nonanone: b-benzeneethanamine: 2-methylpyrazine: 2-decanone: thymol = 1:2:10:10:1; V/V). A 5 mm diameter agar plug with C. gloeosporioides was placed on PDA, and on the other plate, different amounts of the constructed mixture were added. Then the two lidless plates were
sealed with parafilm. After 7 days incubation at 28 _C, the colony diameter was assessed. Three replications of each treatment were
performed and the experiment was repeated three times.

2.8. Statistical analysis
The data was subjected to analyses of variance (ANOVA) using SPSS17.0 Windows Software (SPSS Inc., Chicago, USA). Least significant differences (LSD) were calculated to compare the results at 0.05 level.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

Colletotrichum gloeosporioides2. วัสดุและวิธีการ2.1. จุลินทรีย์การเกษตรวัฒนธรรมชุดของจีนได้รับการภาคยานุวัติ C. gloeosporioides 36326 วัฒนธรรมบริสุทธิ์เพราะถูกปลูกในมันฝรั่งขึ้น agar (PDA) ที่ 28 _C ถึง 7 วันก่อนที่จะใช้ สายพันธุ์แบคทีเรียได้รับจากดินไรโซสเฟียร์ที่เกี่ยวข้องกับมณฑลซานตง YingYangYuan อาหารเทคโนโลยี จำกัด จี่หนาน จีน สำหรับใช้ในการทดลอง สายพันธุ์มีปลูกในธาตุอาหาร agar (NA) ที่ 37 _C incubated 1-2 วัน ระงับการถูกสร้างขึ้น โดย scraping หญ้าแบคทีเรียจากนา และ diluting กับน้ำประมาณ 106 cfu mL_1 เป็นประเมิน ด้วยมาตรฐานความขุ่นของ McFarland2.2 การคัดกรองเชื้อแบคทีเรียที่ผลิต antimicrobials ระเหยแบคทีเรียที่แยกต่างหากจากดินทั้งหมดถูกทดสอบในกิจกรรมต่อต้านในสองช่องพลาสติกแผ่น (ไก่ร้อยเอ็ด al., 2007) สำหรับทดสอบ fumigation กับ C. gloeosporioides สื่อ PDA ถูก poured เป็นด้านหนึ่งของแผ่น (92 _ 16 มม. Sarstedt AG, Nürnbrecht เยอรมนี) และสื่อนาถูก poured ในภาคฝ่ายตรงข้าม แต่ละแยกต่างหากแบคทีเรีย (50 จะ 1 _ 106 cfu mL_1) innoculated ด้านหน้ากลางของจาน และ incubated 1 วันที่ 37 _C ในเวลาต่อมา มีปลั๊ก agar (U 5 mm) ของ C. gloeosporioides ถูกวางบน PDA ภาค น้ำกลั่นฆ่าเชื้อที่ใช้เป็นตัวควบคุมแทนแบคทีเรียที่แยก แผ่นถูกปิดผนึก ด้วย parafilm, incubated 5 วันที่ 28 _C และมีวัดเส้นผ่าศูนย์กลางของการขยายตัว C. gloeosporioides ทำการทดลองแต่ละกับระยะที่สาม และทดลองถูกซ้ำสามครั้ง2.3 ควบคุมโรคโดยเชื้อแบคทีเรีย producing ระเหยทดสอบในสัตว์ทดลองFreshly harvested, mature and healthy mangos with approximate size and color (_30 g per fruit, _4 cm across) were used in this experiment. The fruits were free from visible defects and rot. Before each trial, the mangos were washed with water and their surface sterilized in 2% sodium hypochlorite for 10 s, then rinsed under running sterile water for 1 min and air-dried. Each fruit was wounded with a 5 mm diameter hole-puncher and injected with 5 mm diameter mycelia plugs of C. gloeosporioides or 50 lL C. gloeosporioides conidial suspension (105 conidia mL_1) in the wound area. To study the antagonistic activity of volatiles on mycelia growth or conidial germination, ten-inoculated fruits werearranged in a 6.5 L container as one replicate of each antagonist strain. Then, 20 lL suspensions of the presumptive bacterial antagonists (1 _ 106 cfu mL_1) were inoculated separately on NA for 24 h at 37 _C. Also, six cultures were placed in the container with no direct contact with the mangos. For the control groups, sterile water of the same volume replaced the antagonist cultures. After 7 days at 25 _C, the diameters of decayed spots were measured and the lesion area was calculated to contrast treatment effects and antagonistic activity. Three replications of each treatment were performed and the experiment was repeated three times. 2.4. Taxonomic characterization of antagonistic isolates TB09 andTB072 The isolated bacteria with presumptive volatile antifungal activity were identified based on morphological phenotype and 16S rDNA sequence analysis. The sequences for the primers are 27F: (50-AGAGTTTGATCCTGGTCAGAACGCT-30) and 1492R: (50-TACGGCTACCT TGTTACGACTTCACCCC-30). Bacterial DNA was isolated from each strain using the established CTAB method as described in Jin et al. (2011). The resulting PCR products were purified and used directly for sequencing (Invitrogen, Shanghai, China). Homology search comparisons were carried out using the database available at NCBI BLAST (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/).2.5. Analysis of volatile compounds produced by the antagonisticbacteria20 lL suspensions of the presumptive bacterial antagonists (1 _ 106 cfu mL_1) were inoculated separately on NA in sample vials. Volatiles from the Bacillus strains were collected and analyzed after 7 or 14 days of incubation. The NA medium without the antagonistic bacteria was set up as a control. The volatiles were trapped by the solid phase micro-extraction syringe (SPME) (Supelco Inc., PA-USA). SPME fibers coated with 65 lm (PDMS/DVB) was used.Adsorption was allowed to continue for 45 min at room temperature. After that, samples were immediately analyzed byGC–MS (GC/MS-QP2010 Plus, Shimadzu Co., Kyoto, Japan). The injector was operated in split-less mode for all chromatographic runs, and helium gas was used as the carrier. The injector temperature was kept at 250 _C and the detector at 280 _C. The oven temperature was programmed as follows: 40 _C for 5 min then increased to 250 _C at a speed of 20 _C min_1. Mass spectra data of the volatile compounds were compared with data in the NIST08 Mass Spectral Library (Software Version2.0).2.6. Assay of identified volatile compounds on mycelia growth in vitroDifferent amounts of individual volatile compounds (technical grade) were used to study the effect on radial growth of hyphae. An agar plug (U 5 mm) was placed on the PDA and a Standard amount of individual volatile compounds were added to another plate. Then the two lidless plates were sealed with parafilm. Equivalent amounts of sterile distilled water were used as the control. After 7 days incubation at 28 _C, the colony diameter was assessed. For treatments in which the C. gloeosporioides agar plug was completely inhibited, the original plug was transferred to the fresh PDA in the absence of volatiles to assess whether the inhibition was fungistatic or fungicidal. Following an additional five days on fresh media the diameter of outgrowth was measured. Each experiment was performed in three replications and the experiment was repeated three times.2.7. Antifungal assay of artificial mixture of identified volatilecompoundsA constructed mixture was made by using authentic standard chemicals based on the volatile profile determined from live cultures. The proportion of each positively identified compound was calculated from the relative peak areas (2-nonanone: b-benzeneethanamine: 2-methylpyrazine: 2-decanone: thymol = 1:2:10:10:1; V/V). A 5 mm diameter agar plug with C. gloeosporioides was placed on PDA, and on the other plate, different amounts of the constructed mixture were added. Then the two lidless plates weresealed with parafilm. After 7 days incubation at 28 _C, the colony diameter was assessed. Three replications of each treatment wereperformed and the experiment was repeated three times.2.8. Statistical analysisThe data was subjected to analyses of variance (ANOVA) using SPSS17.0 Windows Software (SPSS Inc., Chicago, USA). Least significant differences (LSD) were calculated to compare the results at 0.05 level.

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

Colletotrichum gloeosporioides, 2 วัสดุและวิธีการ2.1 จุลินทรีย์ซี เข้า gloeosporioides 36326 ถูกจัดให้โดยวัฒนธรรมการเกษตรของสะสมของจีน. วัฒนธรรมแยกบริสุทธิ์ได้รับการปลูกในอาหารเลี้ยงเชื้อเดกซ์โทรสมันฝรั่ง (PDA) วันที่ 28 _C นานถึง 7 วันก่อนที่จะใช้ สายพันธุ์แบคทีเรียที่ได้รับจากดินบริเวณรากที่เกี่ยวข้องกับมณฑลซานตง YingYangYuan เทคโนโลยีอาหาร จำกัด จี่หนาน, ประเทศจีน สำหรับการใช้งานในการทดลองสายพันธุ์ที่ถูกปลูกในอาหารเลี้ยงเชื้อ (NA) บ่มที่ 37 _C 1-2 วัน ระงับถูกสร้างขึ้นโดยค่อยๆขูดสนามหญ้าที่เกิดจากแบคทีเรีย NA และเจือจางด้วยน้ำประมาณ 106 cfu mL_1 เช่นการประเมินที่มีความขุ่น McFarland มาตรฐาน. 2.2 การคัดกรองเชื้อแบคทีเรียที่ผลิตยาต้านจุลชีพสารระเหยทั้งหมดของเชื้อแบคทีเรียที่แยกได้จากดินที่ได้รับการทดสอบว่าเป็นกิจกรรมที่เป็นปฏิปักษ์ในจานพลาสติกสองช่อง (ไก่ et al., 2007) สำหรับการทดสอบการรมควันกับ gloeosporioides ซีสื่อ PDA ถูกเทลงในอีกด้านหนึ่งของแผ่นเปลือกโลก (92 _ 16 มมซาร์สเต็ดท์แบงก์Nürnbrechtเยอรมนี) และขนาดกลาง NA ถูกเทลงในภาคของฝ่ายตรงข้าม แต่ละแยกเชื้อแบคทีเรีย (50 LL 1 _ 106 cfu mL_1) ถูก innoculated ทางด้านสื่อ NA ของแผ่นและบ่มเป็นเวลา 1 วันที่ 37 _C ต่อจากนั้นเสียบวุ้น (U 5 มิลลิเมตร) gloeosporioides ซีถูกวางลงบนภาคพีดีเอ น้ำกลั่นผ่านการฆ่าเชื้อที่ใช้เป็นปัจจัยที่ควบคุมแทนของเชื้อแบคทีเรียที่แยก แผ่นถูกปิดผนึกด้วย parafilm บ่มเป็นเวลา 5 วันที่ 28 _C และเส้นผ่านศูนย์กลางของซี gloeosporioides ขยายตัววัด แต่ละการทดลองได้ดำเนินการกับสามซ้ำและการทดสอบซ้ำสามครั้ง. 2.3 ในการทดสอบร่างกายในการควบคุมโรคจากเชื้อแบคทีเรียผลิตระเหยเก็บเกี่ยวสดมะม่วงเป็นผู้ใหญ่และมีสุขภาพดีที่มีขนาดประมาณและสี (_30 กรัมต่อผลไม้ _4 ซม) ถูกนำมาใช้ในการทดลองนี้ ผลไม้ที่เป็นอิสระจากข้อบกพร่องที่มองเห็นและเน่า ก่อนการพิจารณาคดีแต่ละมะม่วงถูกล้างด้วยน้ำและพื้นผิวของพวกเขาผ่านการฆ่าเชื้อในโซเดียมไฮโปคลอไรต์ 2% เป็นเวลา 10 วินาที, ล้างแล้วภายใต้การใช้น้ำหมันเป็นเวลา 1 นาทีและอากาศแห้ง ผลไม้แต่ละได้รับบาดเจ็บที่มีเส้นผ่านศูนย์กลาง 5 หลุมเจาะและฉีดด้วย 5 มมปลั๊กเส้นใยขนาดเส้นผ่าศูนย์กลาง gloeosporioides ซีหรือ 50 จะ C. gloeosporioides ระงับเชื้อรา (105 conidia mL_1) ในพื้นที่แผล เพื่อศึกษากิจกรรมของสารระเหยที่เป็นปฏิปักษ์ต่อการเจริญเติบโตหรือการงอกเส้นใยเชื้อรา, ผลไม้สิบเชื้อได้รับการจัดให้อยู่ในภาชนะบรรจุ6.5 ลิตรเป็นหนึ่งซ้ำของแต่ละสายพันธุ์ศัตรู จากนั้น 20 แขวนลอย LL ของคู่อริแบคทีเรียสันนิษฐาน (1 _ 106 cfu mL_1) ถูกเชื้อแยก NA เวลา 24 ชั่วโมงที่ 37 _C นอกจากนี้หกวัฒนธรรมที่ถูกวางไว้ในภาชนะที่ไม่มีการติดต่อโดยตรงกับมะม่วง สำหรับกลุ่มควบคุมน้ำหมันของปริมาณเดียวกันแทนที่วัฒนธรรมศัตรู หลังจาก 7 วันที่ 25 _C เส้นผ่าศูนย์กลางจุดผุถูกวัดและพื้นที่แผลที่คำนวณได้เพื่อความคมชัดผลกระทบการรักษาและการทำกิจกรรมที่เป็นปฏิปักษ์ ซ้ำสามของการรักษาแต่ละได้ดำเนินการและการทดสอบซ้ำสามครั้ง. 2.4 ลักษณะอนุกรมวิธานของแยกปฏิปักษ์ TB09 และTB072 แบคทีเรียที่แยกกับกิจกรรมต้านเชื้อราสันนิษฐานระเหยถูกระบุขึ้นอยู่กับฟีโนไทป์ก้านและวิเคราะห์ลำดับ 16S rDNA ลำดับสำหรับไพรเมอร์ที่มี 27 (50 AGAGTTTGATCCTGGTCAGAACGCT-30) และ 1492R (50 TACGGCTACCT TGTTACGACTTCACCCC-30) ดีเอ็นเอแบคทีเรียแยกได้จากสายพันธุ์ที่ใช้แต่ละที่จัดตั้งขึ้นวิธี CTAB ที่อธิบายไว้ในจินและอัล (2011) ส่งผลให้ผลิตภัณฑ์ PCR บริสุทธิ์และใช้โดยตรงลำดับ (Invitrogen, เซี่ยงไฮ้, จีน) การเปรียบเทียบการค้นหาที่คล้ายคลึงกันได้ดำเนินการโดยใช้ฐานข้อมูลที่มีอยู่ใน NCBI ระเบิด (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/). 2.5 การวิเคราะห์สารระเหยที่ผลิตโดยปฏิปักษ์แบคทีเรีย20 แขวนลอย LL ของคู่อริแบคทีเรียสันนิษฐาน (1 _ 106 cfu mL_1) ถูกเชื้อแยก NA ในขวดตัวอย่าง สารระเหยจากสายพันธุ์ Bacillus ถูกเก็บรวบรวมและวิเคราะห์หลังจาก 7 หรือ 14 วันของการบ่ม กลาง NA แบคทีเรียโดยไม่ต้องได้รับการตั้งค่าเป็นตัวควบคุม สารระเหยที่ถูกขังอยู่โดยของแข็งเข็มไมโครสกัด (อยู) (Supelco อิงค์ PA-USA) อยูเส้นใยเคลือบด้วยฟิล์ม 65 (PDMS / DVB) ถูกนำมาใช้. ดูดซับได้รับอนุญาตให้ดำเนินการต่อไปสำหรับ 45 นาทีที่อุณหภูมิห้อง หลังจากนั้นกลุ่มตัวอย่างที่ได้มาวิเคราะห์ได้ทันทีโดยGC-MS (GC / MS-QP2010 พลัส จำกัด Shimadzu เกียวโตญี่ปุ่น) หัวฉีดได้รับการดำเนินการในโหมดการแบ่งน้อยสำหรับการทำงานโครมาทั้งหมดและก๊าซฮีเลียมที่ใช้เป็นผู้ให้บริการ อุณหภูมิหัวฉีดที่ได้รับการเก็บรักษาไว้ที่ 250 _C และเครื่องตรวจจับที่ 280 _C อุณหภูมิเตาอบเป็นโปรแกรมดังต่อไปนี้: 40 _C เวลา 5 นาทีจากนั้นเพิ่มขึ้นถึง 250 _C ที่ความเร็ว 20 _C min_1 ข้อมูลสเปกตรัมมวลของสารระเหยที่ถูกเปรียบเทียบกับข้อมูลใน NIST08 มวลสเปกตรัมห้องสมุด (ซอฟท์แว Version2.0). 2.6 Assay ระบุของสารระเหยในการเจริญเติบโตของเส้นใยในหลอดทดลองจำนวนเงินที่แตกต่างกันของสารระเหยของแต่ละบุคคล(เกรดเทคนิค) ถูกนำมาใช้ในการศึกษาผลกระทบต่อการเจริญเติบโตของเส้นใยรัศมี เสียบวุ้น (U 5 มิลลิเมตร) ถูกวางลงบน PDA และจำนวนมาตรฐานสารระเหยแต่ละถูกเพิ่มเข้าไปในแผ่นอีก จากนั้นทั้งสองแผ่นที่ไม่มีฝาปิดถูกปิดผนึกด้วย parafilm จำนวนเทียบเท่าของน้ำกลั่นปลอดเชื้อถูกนำมาใช้เป็นตัวควบคุม หลังจากบ่ม 7 วันที่ 28 _C เส้นผ่าศูนย์กลางอาณานิคมได้รับการประเมิน สำหรับการรักษาที่ C. gloeosporioides ปลั๊กวุ้นถูกยับยั้งสมบูรณ์ปลั๊กเดิมที่ถูกถ่ายโอนไปยัง PDA สดในกรณีที่ไม่มีสารระเหยที่จะประเมินว่าการยับยั้งเป็น fungistatic หรือเชื้อรา ต่อไปอีกห้าวันในสื่อสดเส้นผ่านศูนย์กลางของผลพลอยได้ที่ถูกวัด แต่ละทดลองดำเนินการในสามซ้ำและการทดสอบซ้ำสามครั้ง. 2.7 ทดสอบเชื้อราผสมเทียมระบุ volatilecompounds ส่วนผสมสร้างถูกสร้างขึ้นโดยใช้สารเคมีมาตรฐานที่แท้จริงขึ้นอยู่กับรายละเอียดที่กำหนดระเหยจากวัฒนธรรมที่มีชีวิตอยู่ สัดส่วนของสารแต่ละระบุบวกที่คำนวณได้จากพื้นที่สูงสุดญาติ (2 Nonanone: B-benzeneethanamine: 2-methylpyrazine: 2-decanone: ไทมอล = 1: 2: 10: 10: 1; V / V) 5 มมเสียบวุ้นเส้นผ่าศูนย์กลาง gloeosporioides ซีถูกวางลงบน PDA และในจานอื่น ๆ ที่แตกต่างของปริมาณส่วนผสมสร้างถูกเพิ่ม จากนั้นทั้งสองแผ่นที่ไม่มีฝาปิดถูกปิดผนึกด้วย parafilm หลังจากบ่ม 7 วันที่ 28 _C เส้นผ่าศูนย์กลางอาณานิคมได้รับการประเมิน ซ้ำสามของการรักษาแต่ละดำเนินการและการทดลองซ้ำสามครั้ง. 2.8 การวิเคราะห์ทางสถิติข้อมูลที่ถูกยัดเยียดให้การวิเคราะห์ความแปรปรวน (ANOVA) โดยใช้ SPSS17.0 ซอฟต์แวร์ Windows (SPSS อิงค์, ชิคาโก, สหรัฐอเมริกา) อย่างน้อยแตกต่างกัน (LSD) ได้รับการคำนวณเพื่อเปรียบเทียบผลที่ระดับ 0.05

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

Colletotrichum gloeosporioides ,


2 วัสดุและวิธีการ
2.1 .
C . gloeosporioides ภาคยานุวัติ 36326 จุลินทรีย์โดยวัฒนธรรมการเกษตรคอลเลกชันของประเทศจีน


เชื้อบริสุทธิ์แยกปลูกในอาหารเลี้ยงเชื้อ potato dextrose agar ( PDA ) ที่ 28 _c นานถึง 7 วัน ก่อนการใช้สายพันธุ์แบคทีเรียที่ได้จากดินบริเวณรากเกี่ยวข้องกับมณฑลซานตง yingyangyuan อาหารเทคโนโลยี จำกัด , จี่หนาน , จีน เพื่อใช้ในการทดลอง สายพันธุ์ปลูกใน NUMB3RS ( na ) บ่มที่ 37 _c 1 - 2 วัน ชั่วคราวถูกสร้างขึ้นโดยค่อย ๆ ขูด สนามหญ้า แบคทีเรียจากนา และเจือจางด้วยน้ำประมาณ 106 cfu ml_1 ,เท่าที่ประเมินด้วยแมคฟาร์แลนด์มาตรฐานความขุ่น .

. . การคัดเลือกแบคทีเรียที่ผลิตสารปฏิชีวนะ
ทั้งหมดของแบคทีเรียที่แยกได้จากดิน ทดสอบพันธุกรรมใน 2 ช่องพลาสติกแผ่น ( ไค et al . , 2007 ) สำหรับการทดสอบหรือการต่อ C . gloeosporioides , PDA ) เทลงไปในด้านใดด้านหนึ่งของแผ่น ( 92 _ 16 มม. ; Sarstedt AG , rnbrecht n ü ,เยอรมนี ) และนาปานกลาง เทใส่ฝ่ายตรงข้ามภาค แต่ละแยกแบคทีเรีย ( 50 จะ 1 _ 106 cfu ml_1 ) คือ innoculated บนนากลาง ข้างจาน และบ่มเป็นเวลา 1 วัน ที่อุณหภูมิ 37 _c ต่อมาเป็นวุ้นปลั๊ก ( U 5 มม. ) ของ C . gloeosporioides วางอยู่บนภาค PDA ฆ่าเชื้อน้ำที่ใช้ในการควบคุมปัจจัยแทนที่จะแยกแบคทีเรียจานถูกผนึกด้วยพาราฟิล์มบ่มนาน 5 วัน ที่ 28 _c และเส้นผ่าศูนย์กลางของ C . gloeosporioides ขยายเป็นวัด แต่ละทดสอบมี 3 ซ้ำ และทำการทดลองซ้ำ 3 ครั้ง

2.3 ในการทดสอบฤทธิ์ของการควบคุมโรคโดยแบคทีเรียที่ผลิตสาร
เก็บเกี่ยวมะม่วงสด , ผู้ใหญ่และมีสุขภาพดีด้วย ประมาณขนาดและสี ( _30 กรัมต่อผล