The whole cell patch clamp experime

The whole cell patch clamp experiments and intracellular Ca2+ measurement demonstrated that depletion of polyP by the exopolyphosphatase scPPX1 inhibited TRPM8 currents and Ca2+-entry. To understand whether the effect of polyP
is direct or indirect on the TRPM8 channel protein, we examined the single channel properties of TRPM8 incorporated in planar lipid bilayers and the effect of subsequent treatment of the protein with scPPX1. The purified TRPM8 protein
derived in dodecylmaltoside (DDM) micelles was incorporated into lipid micelles consisting of a mixture of 1-palmitoyl-2-oleoyl-glycero-3-phosphoco line and 1-palmitoyl-2-oleoyl-glycero-3-phosphoet hanolaminein POPC/POPE (3:1,
v/v), and then into planar lipid bilayers of the same lipid composition between aqueous solutions of 150 mM KCl, 0.2 mM MgCl2 in 20 mM Hepes, pH 7.2. The presence of Mg2+ in the experimental solution was required to sustain normal
channel activity of TRPM8 with optimal concentration of 0.2 mM. Higher concentrationsof Mg2+ (≥2 mM) evoked an inhibition of TRPM8 currents. We also found that the presence of Mg2+ was necessary during the protein purification.

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

เซลล์ทั้งการทดลองยึดแพทช์และเซลล์ Ca2 + วัดแสดงให้เห็นถึงการลดลงของปะการังว่าโดย scPPX1 exopolyphosphatase ยับยั้งกระแส TRPM8 และ Ca2 + -entry เพื่อให้เข้าใจว่าผลของปะการังเป็นทางตรงหรือทางอ้อมต่อโปรตีน TRPM8 ช่องทางเราตรวจสอบคุณสมบัติของช่องทางเดียว TRPM8 จดทะเบียนใน bilayers ไขมันภาพถ่ายและผลของการรักษาที่ตามมาของโปรตีนที่มี scPPX1
โปรตีน TRPM8
บริสุทธิ์มาในdodecylmaltoside (DDM) micelles เป็น บริษัท ไมเซลล์ไขมันที่ประกอบด้วยส่วนผสมของ 1 palmitoyl-2-oleoyl-glycero-3-phosphoco line และ 1 palmitoyl-2-oleoyl-glycero-3-phosphoet hanolaminein popc / สมเด็จพระสันตะปาปา (3: 1,
v / v) และจากนั้นเข้าไปใน bilayers ไขมันระนาบขององค์ประกอบของไขมันที่เหมือนกันระหว่างสารละลาย 150 มิลลิ KCl 0.2 มิลลิ MgCl2 20 มิลลิ HEPES ค่า pH 7.2 การปรากฏตัวของ Mg2 +
ในการแก้ปัญหาการทดลองที่ถูกต้องเพื่อรักษาปกติกิจกรรมช่องทางของการTRPM8 ที่มีความเข้มข้นที่เหมาะสมของ 0.2 มิลลิ ที่สูงขึ้น concentrationsof Mg2 + (≥2มิลลิ) ปรากฏยับยั้งกระแส TRPM8 นอกจากนี้เรายังพบว่าการปรากฏตัวของ Mg2 + เป็นสิ่งจำเป็นในระหว่างการทำให้บริสุทธิ์โปรตีน

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ทั้งเซลล์ การทดลองและการวัดแคลเซียมภายในเซลล์แผ่นหนีบ แสดงให้เห็นว่าการร่วมโต๊ะด้วย exopolyphosphatase scppx1 ยับยั้งกระแส trpm8 และแคลเซียม - รายการ ให้เข้าใจถึงผลของโปลิป
เป็นโดยตรงหรือโดยอ้อมใน trpm8 ช่องโปรตีนเราตรวจสอบช่องสัญญาณเดียว คุณสมบัติของ trpm8 รวมอยู่ในระนาบลิพิดสองชั้น และผลของการรักษาที่ตามมาของโปรตีนกับ scppx1 .
trpm8 โปรตีนบริสุทธิ์ได้ dodecylmaltoside ( DDM ) มัถูกรวมเข้าไปในไมเซลล์ไขมันประกอบด้วยส่วนผสมของเส้นและ 1-palmitoyl-2-oleoyl-glycero-3-phosphoco 1-palmitoyl-2-oleoyl-glycero-3-phosphoet hanolaminein popc / สมเด็จพระสันตะปาปา ( : 1 3
v / v ) และจากนั้นในระนาบเดียวกันไขมันสองชั้นของไขมันส่วนประกอบระหว่างสารละลายของเกลือโปแตสเซียมคลอไรด์ 150 มม. 0.2 มม. ชุด 20 ฮีเปส อืม pH 7.2 .การปรากฏตัวของ mg2 ในโซลูชั่นทดลองใช้รักษาปกติ
ช่องทางกิจกรรมของ trpm8 ที่มีความเข้มข้นที่เหมาะสมของ 0.2 มิลลิเมตร mg2 ระดับที่สูงขึ้น ( ≥ 2 มม. ) ปรากฏมีการยับยั้ง trpm8 กระแส นอกจากนี้เรายังพบว่า มี mg2 จำเป็นระหว่างโปรตีนบริสุทธิ์