Total RNA was extracted from leaves

Total RNA was extracted from leaves of Nicotiana benthamiana using Trizol reagent (Invitrogen) according to manufacturer’s instructions. After digestion with DNase I (Takara, Kyoto, Japan), samples were subjected to phenol:chloroform extraction and ethanol precipitation. One microgram of total RNA was reverse-transcribed using the PrimeScript II 1st Strand cDNA Synthesis Kit (Takara). Fragments were amplified from the cDNA using the following primers: 5′-CAG CCACAACGTCTATATCACC-3′ and 5′- GAA CTC CAG CAG GAC CAT GTG-3′ for Venus, 5′-CTG ACG AAT TAC AAA TCC GTT AC-3′ and 5′-CGT CAC CTG AGA ACC ACT TCC-3′ for PYR1, and 5′-AGA CCA ATG CGG AGC ATA TAC G-3′ and 5′-ACC TGC CTG AAA CCG AAC TG-3′ for the hygromycin phosphotransferase gene (HPT). The HPT gene is located in the T-DNA region of the pSK1 vector [16]. PCR products were size fractionated on a 1.5% agarose TBE gel, stained with ethidium bromide and visualized under ultraviolet light. Signal intensities were calculated using ImageJ software (http://rsb.info.nih.gov/ij/). The significant difference in Figure 3E was statistically defined by a Student’s t-test (p

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

อาร์เอ็นเอทั้งหมดที่สกัดจากใบของ benthamiana Nicotiana ใช้ Trizol รีเอเจนต์ (Invitrogen) ตามคำแนะนำของผู้ผลิต หลังจากย่อยอาหารกับ DNase ฉัน (Takara เกียวโต ญี่ปุ่น), ตัวอย่างฝนสกัดและเอทานอล: คลอโรฟอร์มวางถูกต้อง Microgram หนึ่งของอาร์เอ็นเอทั้งหมดถูกย้อนกลับทับศัพท์ใช้ cDNA สแตรนด์ PrimeScript II 1 ชุดสังเคราะห์ (Takara) ชิ้นส่วนถูกขยายจาก cDNA โดยใช้ไพรเมอร์ดังต่อไปนี้: 5′ CAG CCACAACGTCTATATCACC-3′ และ 5′ - เฒ่า CTC CAG CAG GAC แมว GTG-3′ วีนัส 5′ CTG จีบ AAT มาตรวัด AAA TCC GTT AC-3′ และ 5′-CGT CAC CTG AGA บัญชีบัญญัติ TCC-3′ PYR1 และ 5′ ตู้ CCA ATG CGG AGC ATA มาตรวัด G-3′ และ 5′ บัญชี TGC CTG AAA CCG AAC TG-3′ สำหรับยีน phosphotransferase ของ hygromycin (HPT) ยีน HPT อยู่ในขอบเขตทีดีเอ็นเอของเวกเตอร์ pSK1 [16] ผลิตภัณฑ์ PCR ขนาดแบ่งบนวุ้น 1.5% agarose TBE สีกับโบรไมด์ ethidium และ visualized ภายใต้รังสีอัลตราไวโอเลตได้ ปลดปล่อยก๊าซสัญญาณถูกคำนวณโดยใช้ซอฟต์แวร์ ImageJ (ส่วน http://rsb.info.nih.gov/ij/) ความแตกต่างอย่างมีนัยสำคัญใน 3E รูปถูกกำหนด โดย t-ทดสอบของนักเรียนทางสถิติ (p < 0.05) โดยใช้ข้อมูลจากเหมือนกับชีวภาพ 4

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

รวม RNA ถูกสกัดจากใบ Nicotiana benthamiana ใช้น้ำยา Trizol (Invitrogen) ตามคำแนะนำของผู้ผลิต หลังจากที่มีการย่อยอาหาร DNase ฉัน (Takara เกียวโตญี่ปุ่น) ตัวอย่างถูกยัดเยียดให้ฟีนอล: การสกัดคลอโรฟอร์มและฝนเอทานอล หนึ่งของอาร์เอ็นเอไมโครกรัมรวมย้อนกลับได้รับการถ่ายทอดโดยใช้ PrimeScript ครั้งที่สอง 1 Strand ยีนสังเคราะห์ Kit (Takara) เศษถูกขยายจาก cDNA โดยใช้ไพรเมอร์ต่อไปนี้: 5'-CAG CCACAACGTCTATATCACC-3 และ 5'- GAA CTC CAG CAG GAC CAT GTG-3 สำหรับวีนัส 5'-AAT CTG ACG TAC AAA ทีซีซี GTT AC-3 ' และ 5'-CGT CAC CTG AGA แม็ก ACT TCC-3 'สำหรับ PYR1 และ 5'-AGA CCA ATG CGG AGC ATA TAC G-3' และ 5'-ACC TGC CTG AAA CCG AAC TG-3 'สำหรับไฮโกร phosphotransferase ยีน (HPT) ยีน HPT ตั้งอยู่ในภูมิภาค T-DNA ของเวกเตอร์ pSK1 [16] ผลิตภัณฑ์พีซีอาร์มีขนาด fractionated บน 1.5% agarose เจล TBE, ย้อมด้วย ethidium bromide และมองเห็นภายใต้แสงอัลตราไวโอเลต ความเข้มของสัญญาณจะถูกคำนวณโดยใช้ซอฟแวร์ ImageJ (http://rsb.info.nih.gov/ij/) ความแตกต่างอย่างมีนัยสำคัญในรูปที่ 3E ถูกกำหนดทางสถิติโดยนักศึกษา t-test (p <0.05) โดยใช้ข้อมูลจากสี่ซ้ำทางชีวภาพ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

อาร์เอ็นเอทั้งหมดถูกสกัดจากใบ benthamiana ขนะใช้ trizol Reagent ( Invitrogen ) ตามคำแนะนำของผู้ผลิต หลังจากตัดด้วยตรวจหา ADNase ( Takara , เกียวโต , ญี่ปุ่น ) จำนวนภายใต้ฟีนอล : การสกัดคลอโรฟอร์มและการตกตะกอนของเอทานอล 1 ไมโครกรัมของ RNA ทั้งหมดกลับและใช้ primescript II 1 เส้นดีเอ็นเอสังเคราะห์ชุด ( ทาการะ )ชิ้นส่วนถูกขยายจากยีนโดยใช้ไพรเมอร์ต่อไปนี้ : 5 ’ - ’ของ ccacaacgtctatatcacc-3 5 ’ - GAA CTC CAG CAG ก๊ากแมว gtg-3 ’สำหรับวีนัส 5 ’ - CTG ACG AAT TAC AAA TCC gtt ac-3 MBC และ 5 ’ - CGT the CTG อย่างไรก็ตามบัญชีพระราชบัญญัตินั้น tcc-3 สำหรับ pyr1 และ 5 ’ - ส CCA ATG CGG อาซาฮี ATA และ 3 และ 5 ’ - ’บัญชี TGC CTG AAA ccg AAC tg-3 ’สำหรับยีนต้านยา hygromycin phosphotransferase ยีน ( HPT )ที่ HPT ) ตั้งอยู่ในเขตของ t-dna เวกเตอร์ psk1 [ 16 ] ผลิตภัณฑ์ทั้งหมดจะถูกพบในขนาด 1.5 % ( ทีบีเจล เปื้อนทิเดียมโบรไมด์และมองเห็นภายใต้แสงอัลตราไวโอเลต ความเข้มของสัญญาณที่ถูกคำนวณโดยใช้โปรแกรม ImageJ ( http : / / ข้อมูล rsb . NIH . gov / IJ / ) ความแตกต่างในรูป 3E ที่กำหนดโดยนักเรียนอย่างมีนัยสำคัญสถิติ ( p < 005 ) โดยใช้ข้อมูลจากสี่ทางชีวภาพ ได้แก่