The ปริมาณs of พาราไมลัม and ไลปิด (แวกซ์เอสเตอร์) produced by the
culture in Example 20 and Comparative Example 7 were measured every day.
The พาราไมลัม ปริมาณ after the culture was measured by the following procedure. That is, a mixture (40 mL) of the บรอธ and the ไมโครแอลจี after the culture was put into a centrifugal tube, followed by
การปั่นเหวี่ยง. Pure water was added to the precipitate after the
5 การปั่นเหวี่ยง to yield a suspension, and the operation of centrifugal
re-separation was repeated twice. Then, a small ปริมาณ of pure water was added to the precipitate after the การปั่นเหวี่ยง to yield a suspension, and the suspended solids were freeze-dried. Thus, the components of the บรอธ were removed.
10 Next, about 400 mg of the cells of the freeze-dried ไมโครแอลจี was
accurately weighed out in a centrifugal tube (which had been weighed as a blank value). Acetone was added thereto to yield a suspension, and the supernatant fluid after การปั่นเหวี่ยง was removed. Until the color of the
supernatant fluid disappears, the washing operation with acetone was repeated 15 about 5 times. Thus, the รงควัตถุ components produced by the ไมโครแอลจี
were removed.
Subsequently, using a dodecyl sodium sulfate solution, an operation to
remove components other than พาราไมลัม was performed. That is, 20 mL of
a 1% dodecyl sodium sulfate (SDS) solution was added to the residue after the 20 รงควัตถุ components were removed so as to yield a suspension, which was
thereafter heated at 100°C for 10 minutes. Then, the supernatant fluid after
การปั่นเหวี่ยง was removed. Such an operation was repeated twice, and
thereafter the same operation was repeated three times using pure water
instead of the SDS solution. Thus, the SDS was washed away.
25 Finally, the whole centrifugal tube was put in a dryer at 105°C so that
the moisture was removed, and the weight of the centrifugal tube containing พาราไมลัม was measured. Then, the ปริมาณ of พาราไมลัม was determined from the difference from the aforementioned blank value.
Meanwhile, the ปริมาณ of แวกซ์เอสเตอร์ after the culture was measured 30 by the BLIGHT-DYER method.
[0099]
29
รูป 8A and รูป 8B show the measurement results of the พาราไมลัม ปริมาณ over time in the culture of Example 20 and Comparative Example 7. Further, รูป 9A and รูป 9B show the measurement results of the ไลปิด (wax ester) ปริมาณ over time.
5 As seen from รูป 8A and รูป 8B, the ไมโครแอลจี of the จีนัส ยูกลีนา
(ยูกลีนา gracilis) strain EOD-1 have a higher พาราไมลัม production speed
than the conventional ไมโครแอลจี of the จีนัส ยูกลีนา (ยูกลีนา gracilis)
strain NIES-48. Further, the strain EOD-1 has a พาราไมลัม content per cell of about 55% or more, which is higher than in the strain NIES-48.
10 Further, as seen from รูป 9A and รูป 9B, the ไมโครแอลจี of the จีนัส
ยูกลีนา (ยูกลีนา gracilis) strain EOD-1 have a higher ไลปิด (wax ester) production speed, and thus the content of แวกซ์เอสเตอร์ per cell is increased within a shorter period.
[0100]
15 Further, the culture step was performed using the อาหารเพาะเลี้ยง
having the composition shown in Table 4 and Table 5 below under the following culture conditions.
[0101]
Example 21
20 The aforementioned ไมโครแอลจี, strain EOD-1, were cultured for two
days by photoเฮเทอโรโทรฟic culture. [0102]
Comparative Example 8
The aforementioned ไมโครแอลจี, strain NIES-48, were cultured for two 25 days by photoเฮเทอโรโทรฟic culture.
[0103]
As the อาหารเพาะเลี้ยง, a อาหารเพาะเลี้ยง obtained by adding 30 g/L of
glucose to a modified Hutner อาหารเพาะเลี้ยง (hereinafter, referred to as
"Modified Hutner อาหารเพาะเลี้ยง") was employed. Specifically, the
30 composition was as shown in Table 4, and the component in the liquid other
than nutrients was water. As the trace metal solution in Table 4, a trace metal solution having the composition in Table 5 below was used. The component other than trace metal was water.
The detailed culture method was as follows.
บรอธ: with a pH adjusted to 4.0 using hydrochloric acid
5 Culture container: 500-mL Sakaguchi flask
Introduction before the culture: 200 mL of the บรอธ and the ไมโครแอลจี before the culture were put into the Sakaguchi flask (in order to adjust the
initial ปริมาณ of biomass, 220 mL in total was used for the strain EOD-1 and 236 mL in total was used for the strain NIES-48).
10 Temperature during culture: 28°C
Light-dark conditions during culture: cultured under light-shielded dark conditions
Aerobic conditions during culture: The Sakaguchi flask was placed on a shaker, and air was supplied into the บรอธ by operating the shaker with
15 reciprocal shaking at 130 rpm.
[0104]
Table 4
Modified Hutner อาหารเพาะเลี้ยง: Glucose Added
Glucose 30 g/L
Asparagine 2 g/L
Glutamic acid 5 g/L
Malic acid 5 g/L
Glycine 2.5 g/L
Urea 0.4 g/L
Succinic acid 0.1 g/L
KH2PO4 0.4 g/L
MgSO4.7H20 0.14 g/L
MgCO3 0.4 g/L
CaCO3 0.1 g/L
(NH4)2Fe(SO4)2.6H20 0.021 g/L
Vitamin B1 0.6 mg/L
Vitamin B12 0.05 mg/L
Trace metal solution 10 mL/L
20
31
[0105] Table 5
ZnSO4.7H20 1.1 g/L
MgSO4.H20 0.58 g/L
(NH4)6Mo7024'4H20 0.18 g/L
CoSO4.7H20 0.024 g/L
CuSO4.5H20 0.077 g/L
H3B03 0.029 g/L
NaNO3' 41120 0.074 g/L
[0106]
5 The dry weight (biomass production) of the algae after two days from
the culture and the glucose conversion were calculated in the same manner as above. Table 6 shows the results.
[0107]
Table 6
After two days Ex. 21 C. Ex. 8
from the culture (Strain EOD-1) (Strain NIES-48)
Dry weight (g/L) 24.50 11.50
Glucose conversion (%) 76 33
10
[0108]
As seen from Table 6, the ไมโครแอลจี of the จีนัส ยูกลีนา (ยูกลีนา
gracilis) strain EOD-1 have a better biomass production performance and a
better glucose conversion than the conventional ไมโครแอลจี of the จีนัส 15 ยูกลีนา (ยูกลีนา gracilis) strain NIES-48.
INDUSTRIAL APPLICABILITY
[0109]
The ไมโครแอลจี of the การประดิษฐ์นี้, the วิธีเพื่อผลิต
20 โพลีแซคคาไรด์ of the การประดิษฐ์นี้, and the วิธีเพื่อผลิต an
สารประกอบอินทรีย์ of the การประดิษฐ์นี้ are suitably used for obtaining
สารประกอบอินทรีย์s such as โพลีแซคคาไรด์ such as พาราไมลัม, ไลปิด such as แวกซ์เอสเตอร์, and proteins by culture.
32
The obtained สารประกอบอินทรีย์s can be used in applications such as health food, pharmaceutical, feed, chemical products, or fuel, while remaining stored in the cells of the ไมโครแอลจี, or after being extracted by an extraction
process or the like. Specifically, the ไลปิด stored in the cells of the ไมโครแอลจี 5 as สารประกอบอินทรีย์s by culture are suitably used, for example, as a raw
material of fuel by being extracted from the cells.
ปริมาณs พาราไมลัมและไลปิด (แวกซ์เอสเตอร์) ผลิตโดยการวัฒนธรรมใน 20 ตัวอย่างและ 7 ตัวอย่างเปรียบเทียบที่วัดทุกวันปริมาณพาราไมลัมหลังจากที่วัฒนธรรมถูกวัดตามขั้นตอนต่อไปนี้ นั่นคือ การผสมผสานระหว่าง (40 มล.) บรอธและไมโครแอลจีหลังจากวัฒนธรรมได้ใส่ลงในหลอดแรงเหวี่ยง ตามด้วยการปั่นเหวี่ยง น้ำบริสุทธิ์ถูกเพิ่ม precipitate หลังจากการปั่นเหวี่ยง 5 ให้ระงับ และการดำเนินการของแรงเหวี่ยงแยกอีกเป็นซ้ำสอง แล้ว ปริมาณขนาดเล็กของน้ำบริสุทธิ์ที่เพิ่ม precipitate ที่หลังการปั่นเหวี่ยงให้ผลระงับ และของแข็งระงับมีกรอบ ดังนั้น ส่วนประกอบของบรอธถูกเอาออก10 มีประมาณ 400 มิลลิกรัมของเซลล์ไมโครแอลจีกรอบถัดไปอย่างหนักออกในท่อแรงเหวี่ยง (ซึ่งมีการชั่งน้ำหนักเป็นค่าว่างเปล่า) อะซิโตนได้เพิ่มจุดให้ผลระงับ และน้ำมัน supernatant หลังการปั่นเหวี่ยงถูกเอาออก จนกว่าสีของใบน้ำมัน supernatant หาย การล้าง ด้วยอะซิโตนเป็น 15 ซ้ำประมาณ 5 ครั้ง ดังนั้น ส่วนประกอบของรงควัตถุที่ผลิต โดยไมโครแอลจี ถูกเอาออกในเวลาต่อมา ใช้โซลูชัน dodecyl โซเดียมซัลเฟต การดำเนินงาน ลบคอมโพเนนต์อื่นมากกว่าทำพาราไมลัม นั่นคือ 20 mL ของ โซลูชัน dodecyl 1% โซเดียมซัลเฟต (SDS) เพิ่มได้ตกค้างหลังจากส่วนประกอบของรงควัตถุ 20 ออกเพื่อระงับ ซึ่งเป็นผลผลิต หลังจากนั้นความร้อนที่ 100° C 10 นาที แล้ว น้ำมัน supernatant หลัง การปั่นเหวี่ยงถูกเอาออก การดำเนินการที่ซ้ำสองครั้ง และ หลังจากนั้นการดำเนินงานเดียวไม่ซ้ำกันสามครั้งใช้บริสุทธิ์น้ำ แทนที่จะแก้ปัญหาขององค์กร ดังนั้น SDS ถูกล้างไป25 สุดท้าย หลอดแรงเหวี่ยงทั้งหมดถูกใส่ในอบที่ 105° C ดังนั้นความชื้นถูกเอาออก และมีวัดน้ำหนักของท่อแรงเหวี่ยงที่ประกอบด้วยพาราไมลัม ปริมาณของพาราไมลัมแล้ว ถูกกำหนดจากความแตกต่างจากค่าว่างดังกล่าวในขณะเดียวกัน ปริมาณของแวกซ์เอสเตอร์หลังจากวัฒนธรรม 30 วัด โดยวิธีทันโรค[0099] 29รูป 8A และรูป 8B แสดงผลการวัดพาราไมลัมปริมาณเวลาใน 20 ตัวอย่างและเปรียบเทียบตัวอย่างที่ 7 เพิ่มเติม รูป 9A และรูป 9B แสดงผลการวัดปริมาณ (ขี้ผึ้งเอส) ไลปิดเวลา5 เท่าที่เห็นจากรูป 8A 8B รูป ไมโครแอลจีของจีนัสยูกลีนา(ยูกลีนาจระเข้) ต้องใช้ EOD-1 มีความสูงพาราไมลัมผลิตเร็วกว่าไมโครแอลจีทั่วไปของยูกลีนาจีนัส (ยูกลีนาจระเข้)สายพันธุ์ NIES-48 เพิ่มเติม สายพันธุ์ EOD-1 ได้เนื้อหาพาราไมลัมต่อเซลล์ประมาณ 55% น้อย ซึ่งจะสูงกว่าในพันธุ์ NIES-48ต่อ 10 เท่าที่เห็นจากรูป 9A 9B รูป ไมโครแอลจีของจีนัสต้องใช้ยูกลีนา (ยูกลีนาจระเข้) EOD-1 มีความสูงไลปิด (ขี้ผึ้งเอส) ผลิตเร็ว และดังนั้น เพิ่มเนื้อหาของแวกซ์เอสเตอร์ต่อเซลล์ภายในระยะเวลาสั้น[0100]ต่อ 15 วัฒนธรรมขั้นตอนทำใช้อาหารเพาะเลี้ยงมีองค์ประกอบที่แสดงในตาราง 4 และตาราง 5 ด้านล่างภายใต้วัฒนธรรมเงื่อนไขต่อไปนี้[0101]ตัวอย่าง 2120 ไมโครแอลจีดังกล่าว ต้องใช้ EOD-1 มีอ่างสำหรับ 2วันตามวัฒนธรรม photoเฮเทอโรโทรฟic [0102]ตัวอย่างเปรียบเทียบ 8ไมโครแอลจีดังกล่าว ต้องใช้ NIES-48 มีอ่างสำหรับวันที่สอง 25 โดยวัฒนธรรม photoเฮเทอโรโทรฟic[0103]เป็นอาหารเพาะเลี้ยง อาหารเพาะเลี้ยงที่ได้รับ โดยการเพิ่ม 30 g/L กลูโคสการ Hutner ปรับเปลี่ยนอาหารเพาะเลี้ยง (ซึ่งต่อไปนี้ เรียกว่า "ปรับเปลี่ยน Hutner อาหารเพาะเลี้ยง") ได้รับการว่าจ้าง โดยเฉพาะ การ องค์ประกอบ 30 เป็นดังแสดงในตาราง 4 และส่วนประกอบในของเหลวอื่น ๆ มากกว่าสารอาหารถูกน้ำ เป็นการติดตามโลหะแก้ไขในตาราง 4 มีใช้โซลูชันโลหะติดตามมีองค์ประกอบ 5 ตารางด้านล่าง ส่วนประกอบไม่ใช่โลหะติดตามถูกน้ำวิธีวัฒนธรรมรายละเอียดมีดังนี้บรอธ: ด้วย pH ปรับ 4.0 โดยใช้กรดไฮโดรคลอริก5 วัฒนธรรมคอนเทนเนอร์: หนาว Sakaguchi 500 mLแนะนำก่อนวัฒนธรรม: 200 mL บรอธและไมโครแอลจีก่อนวัฒนธรรมใส่เข้าหนาว Sakaguchi (เพื่อปรับปรุงการ ใช้ปริมาณเริ่มต้นของชีวมวล 220 mL รวมสำหรับพันธุ์ EOD-1 ก 236 mL รวมใช้สำหรับพันธุ์ NIES-48)อุณหภูมิ 10 ระหว่างวัฒนธรรม: 28° Cสภาพแสงมืดระหว่างวัฒนธรรม: อ่างภายใต้ป้องกันแสงมืดสภาพแอโรบิกระหว่างวัฒนธรรม: หนาว Sakaguchi ถูกวางบนที่เชคเกอร์ และอากาศถูกจัดเป็นบรอธทำเชคเกอร์ด้วย15 ซึ่งกันและกันสั่นที่ 130 rpm[0104]ตาราง 4ปรับเปลี่ยน Hutner อาหารเพาะเลี้ยง: เพิ่มระดับน้ำตาลในน้ำตาลกลูโคส 30 g/LAsparagine 2 g/Lกลูตาเมต 5 g/LMalic กรด 5 g/LGlycine 2.5 g/LUrea 0.4 g/Lกรด 0.1 g/LKH2PO4 0.4 g/LMgSO4.7H20 0.14 g/LMgCO3 0.4 g/LCaCO3 0.1 g/L(NH4) 2Fe (SO4) 2.6H20 0.021 g/Lวิตามินบี 1 0.6 mg/Lวิตามินบี 12 0.05 mg/Lติดตามแก้ไขปัญหาโลหะ 10 mL/L20 31ตาราง [0105] 5ZnSO4.7H20 1.1 g/LMgSO4.H20 0.58 g/L(NH4) 6Mo7024'4 H 20 0.18 g/LCoSO4.7H20 0.024 g/LCuSO4.5H20 0.077 g/LH3B03 0.029 g/LNaNO3' 41120 0.074 g/L[0106]5 แห้งน้ำหนัก (การผลิตชีวมวล) ของสาหร่ายจากจากวัฒนธรรมและการแปลงกลูโคสมีคำนวณในลักษณะเดียวกันกับข้างบน ตาราง 6 แสดงผล[0107]ตาราง 6หลังจากสองวันเช่น 21 C. เช่น 8จากวัฒนธรรม (ต้องใช้ EOD-1) (ต้องใช้ NIES-48)น้ำหนักแห้ง (กรัม/ลิตร) 24.50 11.50แปลงกลูโคส (%) 76 3310[0108]เท่าที่เห็นจากตาราง 6 ไมโครแอลจีของยูกลีนาจีนัส (ยูกลีนา ต้องใช้จระเข้) EOD-1 มีประสิทธิภาพการผลิตชีวมวลที่ดีและ ดีกว่าแปลงกลูโคสมากกว่า NIES 48 สายพันธุ์ไมโครแอลจีทั่วไปของยูกลีนาจีนัส 15 (ยูกลีนาจระเข้)ความเกี่ยวข้องของโรงงานอุตสาหกรรม[0109]ไมโครแอลจีของการประดิษฐ์นี้ วิธีเพื่อผลิตโพลีแซคคาไรด์ 20 การประดิษฐ์นี้ และวิธีเพื่อผลิตมีสารประกอบอินทรีย์ of the การประดิษฐ์นี้ are suitably used for obtainingสารประกอบอินทรีย์s such as โพลีแซคคาไรด์ such as พาราไมลัม, ไลปิด such as แวกซ์เอสเตอร์, and proteins by culture. 32The obtained สารประกอบอินทรีย์s can be used in applications such as health food, pharmaceutical, feed, chemical products, or fuel, while remaining stored in the cells of the ไมโครแอลจี, or after being extracted by an extractionprocess or the like. Specifically, the ไลปิด stored in the cells of the ไมโครแอลจี 5 as สารประกอบอินทรีย์s by culture are suitably used, for example, as a raw material of fuel by being extracted from the cells.
การแปล กรุณารอสักครู่..
