Abstract: The successful entry of h

Abstract: The successful entry of human immunodeficiency virus type 1 (HIV-1) relies on
active functions of the viral envelope glycoproteins (Env) and human CD4 together with
proper chemokine co-receptors. To specifically search for novel HIV-1 entry inhibitors, we
established a cell-cell fusion assay that mimicked the entry step of the virus. The assay
utilized two cell populations; effector cells that expressed HIV-1 Env on the cell surface as
well as a trans-activator Tat protein, and target cells that expressed human CD4 and CXCR4
as viral receptor and co-receptor, respectively. To assess fusion, we exploited a copepod
Pontellina plumata green fluorescent protein (copGFP) to be expressed under the control of a
truncated HIV-1 LTR promoter in the target cells. By co-culturing the effector and the target
cells, multinucleated cells or syncytia were formed by 24 hours as a result of cell-cell fusion,
allowing Tat from the effector cells to activate the truncated LTR promoter in the target cells.
Therefore, the amounts of syncytial formations could be directly quantified by measuring
fluorescent intensity, which was demonstrated to be optimal on day 4 after co-cultivation.
The assay was validated by showing that cell-cell fusion mediated by HIV-1 Env was
inhibited by a known fusion inhibitor (enfuvirtide, T20) in a dose-dependent manner. The
50% inhibitory concentration (IC50) of T20 in our assay was 0.0242 μg/ml. These results
indicate that our system of HIV-1 Env-mediated cell-cell fusion assay is suitable for
identification and evaluation of potential HIV-1 entry inhibitors.

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

บทคัดย่อ: รายการที่ประสบความสำเร็จจากประเภทเชื้อไวรัสเอดส์ 1 (HIV-1)
ต้องอาศัยฟังก์ชั่นที่ใช้งานของไกลโคโปรตีนซองจดหมายไวรัส(Env) และ CD4 ของมนุษย์ร่วมกับ
chemokine ที่เหมาะสมร่วมรับ- เฉพาะค้นหานวนิยาย HIV-1
สารยับยั้งรายการเราจัดตั้งทดสอบฟิวชั่นโทรศัพท์มือถือที่เลียนแบบขั้นตอนการเข้ามาของไวรัส
ทดสอบใช้สองประชากรเซลล์ เซลล์ effector ที่แสดง Env HIV-1
บนผิวเซลล์เป็นเดียวกับทรานส์กระตุ้นโปรตีนตาดและเซลล์เป้าหมายที่แสดงมนุษย์CD4 และ CXCR4
เป็นตัวรับไวรัสและร่วมรับตามลำดับ เพื่อประเมินฟิวชั่นที่เราใช้ประโยชน์ copepod
Pontellina plumata โปรตีนเรืองแสงสีเขียว (copGFP)
ที่จะแสดงภายใต้การควบคุมของที่ถูกตัดทอนHIV-1 ก่อการ LTR ในเซลล์เป้าหมาย โดยร่วมเลี้ยง effector
และเป้าหมายเซลล์multinucleated หรือ syncytia ถูกที่เกิดขึ้นจาก 24 ชั่วโมงเป็นผลมาจากฟิวชั่นโทรศัพท์มือถือที่ช่วยให้ตาดจากเซลล์ effector เพื่อเปิดใช้งานโปรโมเตอร์ LTR ถูกตัดทอนในเซลล์เป้าหมาย. ดังนั้นจำนวนเงินที่ ของการก่อ syncytial อาจจะวัดได้โดยตรงโดยการวัดความเข้มของแสงซึ่งแสดงให้เห็นว่าดีที่สุดในวันที่4 หลังจากที่ร่วมการเพาะปลูก. ผลการวิเคราะห์ได้รับการตรวจสอบโดยแสดงให้เห็นว่าฟิวชั่นเซลล์เซลล์ไกล่เกลี่ยโดย Env HIV-1 ถูกยับยั้งโดยยับยั้งฟิวชั่นที่รู้จักกัน(enfuvirtide, T20) ในลักษณะที่ขึ้นอยู่กับปริมาณ เข้มข้นยับยั้ง 50% (IC50) ของ T20 ในการทดสอบของเราคือ 0.0242 ไมโครกรัม / มิลลิลิตร ผลการศึกษานี้แสดงให้เห็นว่าระบบของเราของเชื้อ HIV-1 Env พึ่งทดสอบฟิวชั่นโทรศัพท์มือถือที่เหมาะสมสำหรับการระบุและการประเมินผลที่อาจเกิดการติดเชื้อHIV-1 สารยับยั้งรายการ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

Description : รายการที่ประสบความสำเร็จของมนุษย์ไวรัสภูมิคุ้มกันบกพร่อง type 1 ( HIV-1 ) อาศัยฟังก์ชันการใช้งานของไกลโคโปรตีน
ซองจดหมายไวรัส ( ENV ) และมนุษย์ด้วยกันกับเหมาะสมเคโมไคน์ Co
CD4 receptor โดยเฉพาะในรายการการค้นหานิยายเรา
สร้างฟิวชั่น assay ที่ astrocytoma mimicked รายการขั้นตอนของไวรัส (
) สองเซลล์ประชากร ;( เซลล์ที่แสดงออกต่อ HIV-1 บนพื้นผิวเซลล์เป็น
รวมทั้งทรานส์กระตุ้นตาดโปรตีนและเซลล์เป้าหมายที่แสดงซีดีของมนุษย์และ cxcr4
เป็นตัวรับไวรัส และโคตัวรับ ตามลำดับ เพื่อประเมินประโยชน์ของเราปราศจาก
pontellina plumata โปรตีนเรืองแสงสีเขียว ( copgfp ) จะแสดงออกภายใต้การควบคุมของโปรโมเตอร์ใน LTR
ตัดในเซลล์เป้าหมายโดย จำกัด การเพาะและเซลล์เป้าหมาย (
, multinucleated เซลล์หรือ syncytia ขึ้นโดย 24 ชั่วโมง ผลของ astrocytoma ฟิวชั่น ,
ให้ ททท. จากเซลล์ ( เพื่อเปิดใช้งานตัดทอน LTR โปรโมเตอร์ในเซลล์เป้าหมาย
ดังนั้นปริมาณเป็นพิเศษการก่อตัวสามารถ quantified โดยการวัดความเข้มฟลูออเรสเซนต์โดยตรง
,ซึ่งแสดงให้เห็นถึงเหมาะที่สุดในวันที่ 4 หลังจากการเพาะปลูก Co .
( ถูกนำไปแสดงที่ astrocytoma ( Env โดยฟิวชั่น 1 คือ
ยับยั้งโดยรู้จักใช้เอนฟูเวียร์ไทด์รอดตาย , ฟิวชั่น ) ในลักษณะปิดกั้น .
50% เจริญสมาธิ ( ic50 ) รอดตายในการทดสอบของเรา 0.0242 μผลลัพธ์เหล่านี้
g / mlระบุว่าระบบของเราของ HIV-1 Env โดยฟิวชั่น astrocytoma ( เหมาะสําหรับ
การจำแนกและการประเมินศักยภาพในรายการตัวยับยั้ง