at 37 ◦C, respectively. The conjuga

at 37 ◦C, respectively. The conjugates were dissolved in PBS and
stirred mildly. At the scheduled time, 20 L of the solution was
removed and diluted with ice cold methanol (380 L, containing
2% acetic acid). The mixture was vortexed for 5 min, sonicated for
1 min, and centrifuged at 6000 rpm for 5 min. 20 L of the supernatants
were injected and analyzed by HPLC method to determine
the release of Mel from conjugates.
The method for analysis of Mel release in plasma and enzyme
solution was similar to that of hydrolysis in PBS, except for the
pretreatment process. Rat blood and liver was obtained from
adult male Sprague-Dawley rats. Approximately 4 IU of heparin
was added to each mL of blood to prevent coagulation
(Mehvar, Dann, & Hoganson, 2000). The blood was immediately
centrifuged at 6000 rpm, 4 ◦C for 5 min to collect the pale
yellow supernatant as plasma. Rat liver lysosomal enzymes (tritosomes)
were prepared by differential centrifugation of the liver
homogenate solution according to the method of Bonifacino,
Dasso, Harford, Lippincott-Schwartz, and Yamada (2009, chaps.
3.0.1–3.0.7). Papain and tritosomes solution need to be activated
with 1 mM ethylenediaminetetra-acetic acid (EDTA) and 5 mM
reduced glutathione at 37 ◦C for 15 min before used. In all cases,
a bounded melphalan concentration of 1 mg/mL was used.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ที่ 37 ◦C ตามลำดับ Conjugates ถูกละลายใน PBS และกวน mildly เวลาที่กำหนด L 20 ของโซลูชันได้เอาออก และผสมกับน้ำแข็งเย็นเมทานอล (380 L ประกอบด้วยกรดอะซิติก 2%) ส่วนผสมคือ vortexed สำหรับ 5 นาที sonicated สำหรับ1 นาที และ centrifuged ที่ 6000 rpm สำหรับ 5 นาที 20 L ของ supernatantsฉีด และวิเคราะห์ โดยวิธี HPLC เพื่อกำหนดปล่อยของเมลจาก conjugates วิธีการวิเคราะห์ของเมลปล่อยในพลาสม่าและเอนไซม์โซลูชั่นคล้ายกับที่ไฮโตรไลซ์ใน PBS ยกเว้นการกระบวนการ pretreatment ด้วย หนูเลือดและตับได้รับจากผู้ใหญ่ชาย Sprague Dawley หนู ประมาณ 4 IU ของเฮพารินมีเพิ่มแต่ละมิลลิลิตรของเลือดเพื่อป้องกันการแข็งตัวของเลือด(Mehvar, Dann, & Hoganson, 2000) เลือดได้ทันทีcentrifuged ที่ 6000 rpm, ◦C 4 ใน 5 นาทีเก็บจางสีเหลือง supernatant เป็นพลาสม่า หนูตับเอนไซม์ lysosomal (tritosomes)ถูกเตรียม โดย centrifugation ส่วนของตับhomogenate การแก้ปัญหาตามวิธีการของ BonifacinoDasso, Harford, Lippincott Schwartz และยามาดะ (2009, chaps3.0.1–3.0.7) เอนไซม์ปาเปนและ tritosomes ต้องแก้ปัญหาได้กรดอะซิติก ethylenediaminetetra 1 มม. (EDTA) และ 5 มม.กลูตาไธโอนลดลงที่ ◦C 37 สำหรับ 15 นาทีก่อนใช้ ในทุกกรณีใช้ความเข้มข้นกี่ melphalan ของ 1 mg/mL

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ที่ 37 ◦Cตามลำดับ conjugates
ถูกกลืนหายไปในพีบีเอสและกวนอย่างอ่อนโยน ในเวลาที่กำหนด 20? L
ของการแก้ปัญหาที่ถูกถอดออกและเจือจางด้วยเมทานอลน้ำแข็งเย็น(380? L มี
2% กรดอะซิติก) ส่วนผสมที่ถูกการ vortex เวลา 5 นาที, sonicated สำหรับ
1 นาทีและหมุนเหวี่ยงที่ 6000 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 5 นาที 20 L ของ supernatants
ถูกฉีดและวิเคราะห์โดยวิธี HPLC
เพื่อตรวจสอบการเปิดตัวของเมลจากconjugates. วิธีการสำหรับการวิเคราะห์ของการปล่อยเมลในพลาสมาและเอนไซม์แก้ปัญหาที่มีความคล้ายคลึงกับที่ของการย่อยสลายในพีบีเอสยกเว้นขั้นตอนการปรับสภาพ เลือดหนูและตับที่ได้รับจากผู้ใหญ่ชายหนูสปราก-Dawley ประมาณ 4 IU ของเฮถูกบันทึกอยู่ในแต่ละมิลลิลิตรของเลือดเพื่อป้องกันการแข็งตัว(Mehvar, Dann และ Hoganson, 2000) เลือดได้ทันทีหมุนเหวี่ยงที่ 6000 รอบต่อนาที 4 ◦Cเป็นเวลา 5 นาทีในการเก็บรวบรวมอ่อนใสสีเหลืองเป็นพลาสม่า เอนไซม์ lysosomal ตับหนู (tritosomes) ถูกจัดทำขึ้นโดยการหมุนเหวี่ยงแตกต่างของตับแก้ปัญหา homogenate ตามวิธีการของ Bonifacino, Dasso, Harford, ปินคอต-Schwartz และยามาดะ (2009, Chaps. 3.0.1-3.0.7) ปาเปนและโซลูชั่นการ tritosomes จะต้องมีการเปิดใช้งาน1 มิลลิกรดอะซิติก ethylenediaminetetra-(EDTA) และ 5 มิลลิกลูตาไธโอนที่ลดลงที่37 ◦Cเป็นเวลา 15 นาทีก่อนที่จะนำมาใช้ ในทุกกรณีที่มีความเข้มข้น melphalan ล้อมรอบ 1 มิลลิกรัม / มิลลิลิตรถูกนำมาใช้

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

◦ที่ 37 องศาเซลเซียส ตามลำดับ สารประกอบที่ละลายใน PBS และ
กวนเล็กน้อย ในเวลา 20  L ของสารละลายที่เจือจางด้วยเมทานอล
ลบออกและน้ำแข็งเย็น ( 380  L (
2 % กรด ) ส่วนผสม vortexed นาน 5 นาที sonicated สำหรับ
1 นาที และระดับที่ 6 , 000 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 5 นาที 20  L ของ supernatants
ฉีดและวิเคราะห์โดยวิธี HPLC เพื่อตรวจสอบ
ปล่อยเมลจากสารประกอบ .
วิธีการสำหรับการวิเคราะห์ของเมล ปล่อยในพลาสมาและสารละลายเอนไซม์
คล้ายกับการย่อยใน PBS ยกเว้น
ปรับสภาพกระบวนการ . เลือดหนูและตับ ได้จาก
ผู้ใหญ่ Sprague ต่อการหนู ประมาณ 400 IU ของ heparin
ที่ถูกเพิ่มเข้าไปในแต่ละมิลลิลิตรของเลือดเพื่อป้องกันการแข็งตัว
( mehvar , จากนั้น , & hoganson , 2000 ) เลือดทันที
ระดับที่ 6 , 000 รอบต่อนาที 4 ◦ C เป็นเวลา 5 นาที เพื่อรวบรวมนำเหลืองซีด
เป็นพลาสมา หนู lysosomal เอนไซม์ตับ ( tritosomes )
3 เตรียมค่าของตับ
อนแก้ปัญหาตามวิธีการของ bonifacino ฮาร์ฟอร์ด , ดร ,
, ลิปินเกิตต์ Schwartz และยามาดะ ( 2009 , chaps
3.0.1 – 3.0.7 ) ปาเปนและต้องสามารถใช้งาน
tritosomes โซลูชั่นกับ 1 มม. ethylenediaminetetra กรดน้ำส้ม ( EDTA ) และ 5 mm
ลดลงกลูตาไธโอนที่ 37 ◦เป็นเวลา 15 นาทีก่อนที่จะใช้ ในทุกกรณี , การล้อมรอบเมลฟาแลนเข้มข้น 1 มก. / มล. และใช้