2.4. Analytical procedures2.4.1. De

2.4. Analytical procedures

2.4.1. Determination of gas composition

The gas blends of O2/CO2 were implemented on-board the trawler using a gas mixer (MAP Mix 9000, PBI-Dansensor A/S, Denmark). To determine the gas composition of samples under MAP shortly after arrival at laboratory and at the 12th month of storage, the food package analyser (Series 1400, Servomex Ltd, Crowborough, East Sussex TN6 3FB, UK) was employed.

2.4.2. Determinations of proximate composition, pH, total volatile basic-nitrogen (TVB-N), and thiobarbituric acid (TBA)

Quantitative numbers of GRS samples homogenized using Waring Blender (Model BB90E, Waring Products, New Hartford, CT, USA) were used to assess the following chemical parameters: (a) Proximate composition represented by total carbohydrates, as well as water, ash, fat and protein contents (measured in g/100 g) were determined before packaging/storage using method described by AOAC (2011); (b) Using a digital pH metre (WTW GmbH & Co. KG, Weilheim, Germany) the pH was determined; (c) By distillation and using the method described by Billon, Ollieuz, and Tao (1979), the total volatile basic nitrogen (TVB-N) (measured in mg/100 g tissue) was determined; and (d) using the method described by Tarladgis, Watts, and Younathan (1960), the thiobarbituric acid (TBA) (measured in mg of malonaldehyde (MDA)/kg of tissue/sample) was also determined.

2.4.3. Assessment of melanosis

A trained panel of four experienced judges assessed the melanosis of the treated-GRS samples. After general inspection of packaged samples, the shrimp were removed from each pack, thawed at ambient temperature and immediately presented to all panellists at the same time. Melanosis assessment involved a five-point descriptive scale where 0 indicated either natural or absence of discolouration, 1 indicated yellowing whereas 2, 3, and 4 respectively indicated slight, moderate and intense black spotting (Bono et al., 2012).

2.4.4. Determination of free amino acid (FAA)

The FAAs was analysed, from extraction to chromatography, according to the method described by Antoine, Wei, Littell, and Marshall (1999) and FAA units expressed in mg/100 g. Ten grams of shrimp and 40 mL of extracting solvent (75% methanol in distilled deionized water) were homogenated, transferred to a 100 mL volumetric flask and stored for 60 min (or overnight) at 4 °C. The contents of the flask were transferred to a 50 mL centrifuge tube and centrifuged at 15,000 rpm for 40 min at 4 °C. The supernatant was filtered on PTFE 0.2 μm filter membrane (Gelman Sciences), before derivatization. By way of o-phthaldialdehyde (OPA) pre-column derivatization, the OPA Thiol Reagent (OPT) was prepared 24 h prior to use by dissolving 27 mg of o-phthaldialdehyde in 500 μL of absolute alcohol. Then, 5 mL of 0.1 M sodium tetraborate (Na2B4O7, 10H2O) (pH 9.5) was added, followed by 50 μL of mercaptoethanol, then, mixed and stored in the dark. The amino acid standards stock solution was prepared by dissolving the equivalent of 2500 nmol of each amino acid in 0.05 M NaH2PO4 buffer (pH 5.5) and then diluted for calibration curve. Further, to 100 μL of amino acid standard or 189 diluted sample supernatant at High Pressure Liquid Chromatography (HPLC), 400 μL of OPT was added, then the sample was manually injected onto the column of HPLC system. Mobile phase A was made up of 0.05 M sodium phosphate buffer (pH 5.5), methanol, and THF (80: 19:1). Mobile phase B was made up of 80% methanol and 20% of the 0.05 M NaH2PO4 buffer. The pH of phosphate buffer was adjusted to 5.5. The mobile phases were filtered under 0.2 μm filter membranes (Gelman Sciences, Ann Arbor, MI) and degassed by vacuum for 5 min. The HPLC column was an Ultrasphere ODS 5 μm particle size, 4.6 mm × 25 cm (Beckman Instruments, Inc., Fullerton, CA). The gradient elution was generated using a Elite LaChrom equipped with a L-7100 pump (LaChrom, Hitachi), oven L-7350 (LaChrom, Merck), programmable fluorescence detector with excitation monochromator setting of 330 nm as well as an emission cutoff filter of 418 nm. The chromatographic data were processed using software EZChrom Elite (Agilent Tech., Santa Clara, CA 95051, USA).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.4 การขั้นตอนที่วิเคราะห์2.4.1 กำหนดองค์ประกอบของก๊าซผสมแก๊สของ O2/CO2 ถูกนำมาใช้บนเครื่องบิน trawler โดยใช้เครื่องผสมก๊าซ (แผนที่ผสม 9000, PBI Dansensor a/s เดนมาร์ก) การตรวจสอบองค์ประกอบก๊าซตัวอย่างภายใต้แผนที่หลังจากมาถึง ที่ห้องปฏิบัติการ และ ในเดือน 12 ของการจัดเก็บ เครื่องแพคเกจวิเคราะห์ (ชุด 1400, Servomex Ltd, Crowborough, East Sussex TN6 3FB, UK) ถูกจ้าง2.4.2. วิเคราะห์ปริมาณองค์ประกอบย่อม ค่า pH ความผันผวนพื้นฐานไนโตรเจน (N จุ่ย), และ thiobarbituric กรด (TBA)ตัวเลขเชิงปริมาณอย่าง GRS homogenized ใช้เครื่องปั่น Waring (รุ่น BB90E ผลิตภัณฑ์ Waring ใหม่ Hartford, CT สหรัฐอเมริกา) ใช้ในการประเมินสารเคมีพารามิเตอร์ต่อไปนี้: (a) องค์ประกอบย่อมแสดง โดยแอ ช ไขมัน คาร์โบไฮเดรตรวม รวมทั้งน้ำและเนื้อหาโปรตีน (วัด g/100 g) กำหนดก่อนโดยใช้วิธีอธิบาย (2011); aoac หรือเก็บบรรจุภัณฑ์ (ข) โดยใช้ pH ในเมตร (WTW GmbH & Co. KG, Weilheim เยอรมนี) กำหนดค่า pH (c) โดยการกลั่นโดยใช้วิธีการอธิบายไว้ โดย Billon, Ollieuz เต่า (1979), การเปลี่ยนแปลงพื้นฐานไนโตรเจน (จุ่ย-N) (วัด มิลลิกรัม/100 กรัมเยื่อ) กำหนด และ (d) โดยใช้วิธีการอธิบายไว้ โดย Tarladgis วัตต์ Younathan (1960), กรด thiobarbituric (TBA) (วัดมิลลิกรัม /kg malonaldehyde (เตอร์ MDA) ของเนื้อเยื่อ/ตัวอย่าง) ถูกกำหนด2.4.3 การประเมิน melanosisแผงของสี่ผู้พิพากษาที่มีประสบการณ์ผ่านการฝึกอบรมประเมิน melanosis ตัวอย่างถือว่า GRS หลังจากตรวจสอบทั่วไปของตัวอย่างบรรจุภัณฑ์ กุ้งออกจากแต่ละชุด ขับที่อุณหภูมิ และทันทีแสดง panellists ทั้งหมดในเวลาเดียวกัน Melanosis ประเมินเกี่ยวข้องห้าจุดอธิบายสเกล 0 ระบุธรรมชาติหรือไม่เปลี่ยนสี 1 ระบุเหลืองในขณะที่ 2, 3 และ 4 ตามลำดับระบุไว้เล็กน้อย ปานกลาง และรุนแรงดำส่อง (Bono et al. 2012)2.4.4 การวิเคราะห์ปริมาณกรดอะมิโนฟรี (FAA)ปรับโครงสร้างของได้มา วิเคราะห์ จากสกัดการ chromatography ตามวิธีการอธิบาย โดย Antoine, Wei, Littell และมาร์แชลล์ (1999) และ FAA ใน มิลลิกรัม/100 กรัมหน่วย สิบกรัมกุ้ง และ 40 มล.การสกัดตัวทำละลาย (75% เมทานอลในน้ำจุกลั่น) homogenated โอนย้ายขวดแก้ววัดปริมาตรเป็น 100 มิลลิลิตร และ 60 นาที (หรือหลาย) ที่เก็บไว้ที่อุณหภูมิ 4 องศาเซลเซียส เนื้อหาของขวดถูกโอนย้ายไปหลอดขนาด 50 มล.ปั่นเหวี่ยง และเหวี่ยงที่ 15,000 rpm สำหรับ 40 นาทีที่อุณหภูมิ 4 องศาเซลเซียส Supernatant ที่ถูกกรองบน 0.2 ไมครอนกรองเมมเบรน PTFE (รีเกลแมนวิทยาศาสตร์), ก่อน derivatization โดย o-phthaldialdehyde (OPA) ก่อนคอลัมน์ derivatization เอเจนต์ Thiol OPA (OPT) ถูกจัดเตรียมไว้ 24 ชั่วโมงก่อนใช้ โดยยุบ o-phthaldialdehyde ใน μL 500 แอลกอฮอล์สัมบูรณ์ 27 มิลลิกรัม 0.1 M โซเดียม tetraborate (Na2B4O7, 10H2O) แล้ว 5 mL (ค่า pH 9.5) เพิ่ม ตาม ด้วย 50 μL ของ mercaptoethanol แล้ว ผสม และเก็บไว้ในมืด กรดอะมิโนมาตรฐานโซลูชันหุ้นถูกเตรียมยุบเทียบเท่ากับ 2500 นาโนโมลของแต่ละกรดอะมิโนใน 0.05 M NaH2PO4 บัฟเฟอร์ (pH 5.5) แล้ว เจือจางสำหรับสอบเทียบเส้นโค้ง เพิ่มเติม การ μL 100 ของกรดอะมิโนมาตรฐานหรือ supernatant ที่สูงความดันของเหลว Chromatography (HPLC) ตัวอย่างเจือจาง 189, μL 400 ของ OPT ถูกเพิ่ม แล้วตัวถูกฉีดลงในคอลัมน์ของ HPLC ระบบด้วยตนเอง มือถือเฟส A ประกอบด้วย 0.05 M โซเดียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (pH 5.5), เมทานอล และเกี่ยวกับ THF (80:19:1) โทรศัพท์มือถือระยะ B ขึ้นของเมทานอล 80% และ 20% ของบัฟเฟอร์ NaH2PO4 0.05 M ค่า pH ของบัฟเฟอร์ฟอสเฟตถูกปรับปรุงเป็น 5.5 ระยะเคลื่อนที่กรองภายใต้ 0.2 ไมครอนกรองเยื่อหุ้ม (วิทยาศาสตร์รีเกลแมน Ann Arbor, MI) และ degassed โดยเครื่องดูดฝุ่นสำหรับ 5 นาที คอลัมน์ HPLC มีขนาดเป็น Ultrasphere ODS 5 ไมครอนอนุภาค 4.6 มม. × 25 ซม. (Beckman เครื่อง Inc. ฟูลเลอร์ตัน CA) สร้างชะลาดโดยใช้ LaChrom Elite ที่มีปั๊ม L-7100 (LaChrom ฮิตาชิ), เตาอบ L-7350 (LaChrom เมอร์ค), เครื่องตรวจจับสารเรืองแสงที่ปุ่มตั้งค่า monochromator กระตุ้นของ 330 nm เป็นตัวกรองตัดปล่อยของ 418 nm โครมาข้อมูลถูกประมวลผลโดยใช้ซอฟต์แวร์ EZChrom Elite (Agilent เทคโนโลยี ซานตาคลารา CA 95051 สหรัฐอเมริกา)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.4 การวิเคราะห์2.4.1 ความมุ่งมั่นขององค์ประกอบของก๊าซผสมก๊าซ O2 / CO2 ถูกนำมาใช้บนกระดานลากอวนโดยใช้เครื่องผสมก๊าซ (MAP Mix 9000 PBI-Dansensor A / S, เดนมาร์ก) เพื่อตรวจสอบองค์ประกอบของก๊าซของกลุ่มตัวอย่างภายใต้แผนที่ไม่นานหลังจากที่มาถึงที่ห้องปฏิบัติการและในเดือนที่ 12 ของการจัดเก็บวิเคราะห์แพคเกจอาหาร (ซีรีส์ 1400 Servomex จำกัด Crowborough, East Sussex TN6 3FB สหราชอาณาจักร) ถูกจ้าง. 2.4.2 การหาความขององค์ประกอบใกล้เคียงค่า pH ทั้งหมดระเหยพื้นฐานไนโตรเจน (TVB-N) และกรด thiobarbituric (TBA) ตัวเลขเชิงปริมาณของกลุ่มตัวอย่าง GRS หดหายใช้ Waring ปั่น (รุ่น BB90E ผลิตภัณฑ์ Waring, New ฮาร์ตฟอร์ด, CT, USA) ถูกนำมาใช้ ประเมินดังต่อไปนี้พารามิเตอร์ทางเคมี (ก) องค์ประกอบใกล้เคียงแทนด้วยคาร์โบไฮเดรตทั้งหมดเช่นเดียวกับน้ำเถ้าไขมันและโปรตีน (วัดกรัม / 100 กรัม) ได้รับการพิจารณาก่อนที่จะบรรจุภัณฑ์ / การจัดเก็บข้อมูลโดยใช้วิธีการอธิบายโดย AOAC (2011); (ข) การใช้เครื่องวัดค่า pH แบบดิจิตอล (WTW GmbH & Co. KG, Weilheim, เยอรมนี) ค่า pH ถูกกำหนด; (ค) โดยการกลั่นและการใช้วิธีการอธิบายโดย Billon, Ollieuz และเต่า (1979), รวมระเหยไนโตรเจนระดับล่าง (TVB-N) (วัดมก. / 100 กรัมเนื้อเยื่อ) ถูกกำหนด; และ (ง) โดยใช้วิธีการอธิบายโดย Tarladgis วัตต์และ Younathan (1960), กรด thiobarbituric (TBA) (วัดมิลลิกรัม malonaldehyde (MDA) / กก. ของเนื้อเยื่อ / ตัวอย่าง) ก็กำหนด. 2.4.3 การประเมิน melanosis แผงรับการฝึกอบรมในสี่ของผู้พิพากษาที่มีประสบการณ์การประเมิน melanosis ของกลุ่มตัวอย่างที่ได้รับการรักษา-GRS หลังจากการตรวจสอบโดยทั่วไปของตัวอย่างบรรจุกุ้งถูกถอดออกจากแต่ละแพ็คละลายที่อุณหภูมิห้องและทันทีที่นำเสนอให้อภิปรายทั้งหมดในเวลาเดียวกัน การประเมิน melanosis เกี่ยวข้องกับระดับพรรณนาห้าจุดที่ 0 ชี้ให้เห็นอย่างใดอย่างหนึ่งตามธรรมชาติหรือไม่มีการเปลี่ยนสี 1 ระบุสีเหลืองในขณะที่ 2, 3 และ 4 ตามลำดับแสดงให้เห็นเล็กน้อยปานกลางและรุนแรงจุดสีดำ (Bono et al., 2012). 2.4.4 . ความมุ่งมั่นของกรดอะมิโนอิสระ (FAA) Faas ได้รับการวิเคราะห์จากการสกัดเพื่อโครมาโตตามวิธีการที่อธิบายโดยแอนทอนเหว่ย Littell และมาร์แชลล์ (1999) และหน่วยงานที่แสดงในจอห์นฟามก. / 100 กรัม สิบกรัมของกุ้งและ 40 มิลลิลิตรในการสกัดด้วยตัวทำละลาย (75% เมทานอลในน้ำกลั่นปราศจากไอออน) ถูก homogenated ย้ายไป 100 มิลลิลิตรขวดปริมาตรและเก็บไว้เป็นเวลา 60 นาที (หรือข้ามคืน) ที่ 4 ° C เนื้อหาของขวดถูกโอนไปยังหลอด centrifuge 50 มลและหมุนเหวี่ยงที่ 15,000 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 40 นาทีที่ 4 องศาเซลเซียส ใสถูกกรองบน ​​PTFE 0.2 ไมครอนกรองเมมเบรน (Gelman วิทยาศาสตร์) ก่อนอนุพันธ์ โดยวิธีการของ O-phthaldialdehyde (OPA) อนุพันธ์ก่อนคอลัมน์ OPA Thiol Reagent (OPT) กำลังเตรียมพร้อม 24 ชั่วโมงก่อนที่จะใช้โดยการละลาย 27 mg ของ O-phthaldialdehyde ใน 500 ไมโครลิตรของเครื่องดื่มแอลกอฮอล์ที่แน่นอน จากนั้น 5 มิลลิลิตร 0.1 M โซเดียม tetraborate (Na2B4O7, 10H2O) (pH 9.5) ถูกเพิ่มเข้ามาตามด้วย 50 ไมโครลิตรของ mercaptoethanol แล้วผสมและเก็บไว้ในที่มืด วิธีการแก้ปัญหามาตรฐานกรดอะมิโนหุ้นถูกจัดทำขึ้นโดยการละลายเทียบเท่า 2500 nmol ของกรดอะมิโนแต่ละใน 0.05 M NaH2PO4 บัฟเฟอร์ (pH 5.5) และปรับลดสำหรับเส้นโค้งการสอบเทียบแล้ว นอกจากนี้ถึง 100 ไมโครลิตรมาตรฐานกรดอะมิโนหรือ 189 เจือจางตัวอย่างสารละลายที่ความดันสูง Liquid Chromatography (HPLC) 400 ไมโครลิตรของการเลือกถูกเพิ่มเข้ามาแล้วตัวอย่างถูกฉีดด้วยตนเองบนคอลัมน์ของระบบ HPLC เฟสมือถือถูกสร้างขึ้นจาก 0.05 M บัฟเฟอร์โซเดียมฟอสเฟต (pH 5.5), เมทานอลและ THF (80: 19: 1) มือถือเฟส B ถูกสร้างขึ้นจากเมทานอล 80% และ 20% ของบัฟเฟอร์ 0.05 M NaH2PO4 ค่า pH ของฟอสเฟตบัฟเฟอร์ปรับ 5.5 ขั้นตอนที่โทรศัพท์มือถือภายใต้ถูกกรอง 0.2 ไมครอนกรองเมมเบรน (Gelman วิทยาศาสตร์ Ann Arbor, MI) และ degassed โดยสูญญากาศเป็นเวลา 5 นาที คอลัมน์ HPLC เป็น Ultrasphere ODS 5 ไมครอนอนุภาคขนาด 4.6 มม× 25 ซม. (เบคค์เครื่องดนตรี, Inc, Fullerton, CA) ชะลาดถูกสร้างขึ้นโดยใช้ยอด LaChrom พร้อมกับปั๊ม L-7100 (LaChrom ฮิตาชิ), เตา L-7350 (LaChrom เมอร์ค) ตรวจจับการเรืองแสงโปรแกรมได้ด้วยการตั้งค่าการกระตุ้น monochromator 330 นาโนเมตรเช่นเดียวกับตัวกรองการปล่อยตัดของ 418 นาโนเมตร ข้อมูลสารที่ถูกประมวลผลโดยใช้ซอฟต์แวร์ EZChrom ยอด (Agilent Tech., ซานตาคลารา, แคลิฟอร์เนีย 95051, USA)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.4 . ขั้นตอนการวิเคราะห์เครื่องมือกำจัดเพื่อย้าย . การกำหนดองค์ประกอบของก๊าซก๊าซผสมระหว่างออกซิเจน / CO2 ถูกนำมาใช้บนเรืออวนลากที่ใช้ก๊าซผสม ( แผนที่ผสม 9000 , pbi dansensor / S , เดนมาร์ก ) เพื่อศึกษาองค์ประกอบของตัวอย่างก๊าซภายใต้แผนที่ไม่นานหลังจากที่มาถึงห้องปฏิบัติการและในเดือน 12 ของกระเป๋า , เครื่องบรรจุภัณฑ์อาหาร ( ชุด 1400 servomex Ltd crowborough East Sussex tn6 3fb , UK ) ที่ใช้2.4.2 . รวมทั้งวิเคราะห์องค์ประกอบด่างที่ระเหยได้ทั้งหมด ( tvb-n พื้นฐานไนโตรเจน ) และเท่ากับ acid ( TBA )ตัวเลขของปริมาณตัวอย่าง GRS บดโดยใช้เครื่องปั่น ( แบบ bb90e waring สินค้า , ผลิตภัณฑ์ใหม่ , Hartford , CT , สหรัฐอเมริกา ) ใช้เพื่อประเมินพารามิเตอร์ต่อไปนี้ : ( เคมี ) วิเคราะห์องค์ประกอบที่แสดงโดยคาร์โบไฮเดรตทั้งหมดเช่นเดียวกับน้ำ เถ้า ไขมัน และโปรตีน ( วัดในกรัม / 100 กรัม ) ได้รับการพิจารณาก่อน กระเป๋าบรรจุภัณฑ์ / การใช้วิธีอธิบายด้วยโปรตีน ( 2011 ) ; ( b ) โดยใช้ pH เมตรดิจิตอล ( wtw GmbH & Co . KG , Weilheim , เยอรมนี ) pH ตั้งใจ ; ( C ) โดยการกลั่นและการใช้วิธีอธิบาย โดยทาง ollieuz , และเต่า ( 1979 ) , ที่ระเหยได้ทั้งหมด ( tvb-n พื้นฐานไนโตรเจน ) ( วัดในเนื้อเยื่อมิลลิกรัม / 100 กรัม ) ได้กำหนด และ ( d ) ใช้วิธีอธิบายโดย tarladgis , วัต และ younathan ( 1960 ) , thiobarbitu ริค แอซิด ( TBA ) ( วัดในมิลลิกรัมมาโลนัลดีไฮด์ ( MDA ) / กก. เนื้อเยื่อ / ตัวอย่าง ) ได้แก่2.4.3 . การประเมินของเมลาโนซิสแผงของผู้พิพากษาที่มีประสบการณ์และผ่านการฝึกอบรม 4 เมลาโนซิสในการรักษา GRS ตัวอย่าง หลังจากการตรวจสอบทั่วไปของแพคเกจตัวอย่างกุ้งที่ถูกถอดออกจากแต่ละแพ็คละลายที่อุณหภูมิห้องและทันทีนำเสนอทั้งหมด Panellists ในเวลาเดียวกัน การประเมินเมลาโนซิส เกี่ยวข้อง กับ ห้าจุดระดับที่ 0 ( บรรยายทั้งธรรมชาติหรือขาดการเปลี่ยนสี ( เหลือง ) 1 , 2 , 3 และ 4 ตามลำดับ พบน้อย ปานกลาง และรุนแรงสีดำเฉพาะ ( โบโน่ et al . , 2012 )2.4.4 . การหาปริมาณกรดอะมิโนอิสระ ( FAA )และ FAAS วิเคราะห์จากการสกัดโครมาโทกราฟี ตามวิธีการที่อธิบายโดย แอนโทน เว่ย ลิตเติล , และมาร์แชล ( 1999 ) และหน่วยที่ 4 มิลลิกรัม / 100 กรัมและ 10 กรัมของกุ้งและ 40 มิลลิลิตรการสกัดตัวทำละลาย ( เมทานอล 75% สารคล้ายเนื้อเยื่อประสานน้ำ ) homogenated โอนให้ 100 มล. ปริมาตร ขวด และเก็บไว้ได้นาน 60 นาที ( หรือคืน ) ที่อุณหภูมิ 4 องศา เนื้อหาของขวดที่ถูกโอนไปยัง 50 ml centrifuge หลอดไฟฟ้า 12 , 000 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 40 นาทีที่ 4 ° C สูงคือกรองบนμไส้กรองเมมเบรน PTFE 0.2 M ( เกลแมนวิทยาศาสตร์ ) ก่อนกับ . โดยวิธีการ o-phthaldialdehyde ( OPA ) กับ pre คอลัมน์ โอภา thiol Reagent ( เลือก ) พร้อม 24 ชั่วโมง ก่อนใช้ โดยละลาย 27 มิลลิกรัม o-phthaldialdehyde 500 μลิตรของแอลกอฮอล์สัมบูรณ์ จากนั้น 5 ml ของ 0.1 โมลาร์โซเดียมเตตราบอเรต ( na2b4o7 , , ) ( pH 9.5 ) ก็เพิ่มตามμ mercaptoethanol 50 ลิตร แล้วผสมและเก็บไว้ในที่มืด กรดอะมิโนมาตรฐานโซลูชั่นหุ้นถูกเตรียมโดยละลายเท่ากับ 2500 ซึ่งแต่ละกรดอะมิโนใน 0.05 M nah2po4 บัฟเฟอร์ pH 5.5 ) และเจือจางสำหรับการปรับเส้นโค้ง เพิ่มเติม μ 100 ลิตรมาตรฐานกรดอะมิโนหรือ 189 เจือจางตัวอย่างที่นำวิธีโครมาโทกราฟีของเหลวที่ความดันสูง ( HPLC ) , 400 μผมของเลือกถูกเพิ่มจำนวนด้วยตนเอง แล้วฉีดลงบนคอลัมน์ระบบ HPLC . เฟสเคลื่อนที่เป็นขึ้นของ 0.05 M โซเดียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์ pH 5.5 ) , เมทานอล และเตตระไฮโดรฟูแรน ( 80 : 19 : 1 ) มือถือเฟส B ขึ้นของเมธานอล 80% และ 20% ของ 0.05 M nah2po4 บัฟเฟอร์ ฟอสเฟตบัฟเฟอร์ปรับ pH 5.5 . ระยะเคลื่อนที่เป็นกรองใต้กรองเมมเบรนμ 0.2 M ( เกลแมนวิทยาศาสตร์ , Ann Arbor , MI ) และ degassed สุญญากาศสำหรับ 5 นาที HPLC คอลัมน์เป็น ultrasphere ODS 5 μ M ขนาด 4.6 มม. × 25 ซม. ( Beckman เครื่องมือ , อิงค์ , Fullerton , CA ) การไล่ระดับสี ( ถูกสร้างขึ้น โดยใช้ยอด lachrom พร้อมกับปั๊ม l-7100 ( lachrom , Hitachi ) , เตาอบ l-7350 ( lachrom เมอร์ค ) , เครื่องตรวจจับโปรแกรมที่มีการตั้งค่าระบบโมโนโครเมเตอร์ 330 nm เช่นเดียวกับสารมลพิษตัวกรองของ 405 nm . ข้อมูลที่ถูกประมวลผล และใช้ยอด ezchrom ซอฟต์แวร์เทคโนโลยี Agilent , 95051 ซานตาคลารา , แคลิฟอร์เนีย , สหรัฐอเมริกา )