The embryos were euthanized with Isoflourane and the brain,
CAM, and lungs were removed. Each tissue was digested
overnight in approximately 8 to 10 mL of 1 M KOH at 65 °C.
Sodium deoxycholic reagent was added to the digested tissue to
bring the volume up to 14 mL. This was then mixed by vortex
and centrifuged at 1500 g for 30 min. The supernatant was
aspirated, and the pellet was resuspended by sonication into
10 mL 5% Triton x-100 solution. The solution was centrifuged
at 1500 g for 15 min, and the supernatant was aspirated to a
level just above the pellet. The remaining volume was determined
with a 200 μl pipette. The number of microspheres in
each tissue sample was then counted using a hemocytometer.
The data is presented as the number of microspheres in either
the CAM or the brain divided by the number of microsphere in
the lungs (MSbrain/MSlung or MSCAM/MSlung). This provides the
relationship between the blood leaving the right atria and
flowing through the ductus arteriosi and the interatrial foramina,
and the blood flowing to the lungs through the pulmonary
arteries (White, 1974; Tazawa and Takenaka, 1985). The larger
the ratio the greater the right-to-left shunt.
ตัวอ่อนที่ถูก euthanized กับ Isoflourane และสมอง,
CAM และปอดถูกถอดออก เนื้อเยื่อแต่ละย่อยในชั่วข้ามคืนในเวลาประมาณ 8-10 มิลลิลิตร 1 M KOH ที่ 65 ° C. สารโซเดียม deoxycholic ถูกบันทึกอยู่ในเนื้อเยื่อย่อยที่จะนำปริมาณถึง14 มิลลิลิตร นี้ได้รับการผสมแล้วโดยกระแสน้ำวนและหมุนเหวี่ยงที่ 1,500 กรัมเป็นเวลา 30 นาที สารละลายถูกสำลักและเม็ดที่ถูก resuspended โดย sonication ลงใน 10 มิลลิลิตร 5% Triton X-100 การแก้ปัญหา วิธีการแก้ปัญหาที่ได้รับการหมุนเหวี่ยงที่ 1,500 กรัมเป็นเวลา 15 นาทีและใสถูกดูดไปที่ระดับเหนือเม็ด ปริมาณที่เหลืออยู่ถูกกำหนดด้วยปิเปต 200 ไมโครลิตร จำนวน microspheres ในแต่ละตัวอย่างเนื้อเยื่อถูกนับแล้วใช้hemocytometer ได้. ข้อมูลที่จะนำเสนอเป็นจำนวน microspheres ทั้งในCAM หรือสมองหารด้วยจำนวน microsphere ในปอด(MSbrain / MSlung หรือ MSCAM / MSlung) นี้จะให้ความสัมพันธ์ระหว่างเลือดออกจาก Atria เหมาะสมและไหลผ่านarteriosi ductus และ foramina interatrial, และเลือดที่ไหลไปยังปอดผ่านปอดหลอดเลือดแดง (สีขาว, 1974; Tazawa และ Takenaka, 1985) ที่มีขนาดใหญ่สัดส่วนมากขึ้นจากขวาไปซ้ายปัด
การแปล กรุณารอสักครู่..
